CN109804884B

CN109804884B - 一种试管微扦插繁殖玉扇锦的方法

Info

Publication number: CN109804884B
Application number: CN201811094190.2A
Authority: CN
Inventors: 陈汉鑫; 余德亿; 万学锋; 姚锦爱
Original assignee: ZHANGZHOU INSTITUTE OF AGRICULTURAL SCIENCES
Current assignee: ZHANGZHOU INSTITUTE OF AGRICULTURAL SCIENCES
Priority date: 2018-09-19
Filing date: 2018-09-19
Publication date: 2021-10-26
Anticipated expiration: 2038-09-19
Also published as: CN109804884A

Abstract

本发明公开了一种试管微扦插繁殖玉扇锦的方法，包括如下步骤：(1)材料的选取和消毒；(2)在无菌条件下，将消毒后的玉扇不带锦的叶片剔除，带锦的叶片接入诱导叶片基部长芽的培养基中；(3)将诱导的玉扇锦小苗接入生根培养基中；培养至玉扇锦小苗长成直径约2.8‑3.2cm的生根苗；(4)将根系良好、叶片完整的玉扇锦生根苗，在炼苗棚进行适应性炼苗18‑22d；然后将炼好后的生根苗取出，消毒,将消毒好的玉扇锦小苗放在阴凉通风处晾干，待玉扇锦组培苗晾到叶片发皱，即可进行移栽。本发明能成功繁殖玉扇锦。

Description

一种试管微扦插繁殖玉扇锦的方法

技术领域

本发明涉及一种试管微扦插繁殖玉扇锦的方法。

背景技术

玉扇(Haworthia truncata)，也称截形十二卷，为百合科十二卷属小型肉质植物，原产非洲南部。其植株端庄，造型优美，品种变异丰富，窗面花纹富于变化。很适于家庭养护，是多肉植物爱好者喜欢收集的珍贵品种。

十二卷属植物传统繁殖方法主要有扦插、分株及播种等。扦插成活率极低，适合植物爱好者对植株进行小规模繁殖，不适用于商品化的大规模繁殖。分株是较为常用的十二卷属传统繁殖方法，但每年繁殖量仅3-5株，名贵品种更少，繁殖率极低。

现有技术中，CN201510502501.4公开了一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基及组培方法，专用培养基的成分为基础培养基以及低剂量的2,4-D，组培方法包括如下步骤：(1)外植体的选择和消毒，(2)接种及无菌系的建立，(3)转接与扩繁。

CN201610687042.6公开了一种截形十二卷瓶外生根组培育苗方法，该方法包括：(1)培养基的配制；(2)带根原基组培苗瓶内培养；(3)带根原基组培苗的移栽与瓶外生根。

以上发明能够提高繁殖率，然而，这两篇发明并未针对如何在保持锦的稳定性。玉扇锦，为玉扇的斑锦变异品种。而斑锦是一种嵌合体，即不同的细胞杂合在一个植物体上，包括锦细胞(异常细胞)和绿色细胞(正常细胞)的嵌合。因此玉扇锦叶片有黄色或粉红色、白色斑纹，斑纹形状因植株而异，或呈丝状，或呈块状。斑锦植物存在非常多的变体，加之不同细胞间的竞争，这就导致了斑锦生长的不平衡特征。因此，用分株、播种或组织培养方式都会使玉扇锦失锦(即玉扇叶片变为绿色)。而在温室用玉扇锦叶片叶插的方式，由于玉扇锦叶片比较肥厚、含水量较高，还有受到环境的影响，叶片插下去后很容易腐烂，因此玉扇锦叶插成活率很低。因此玉扇锦数量稀少，观赏价值高，价格昂贵。对同一个玉扇品种而言，带锦的玉扇的价值是不带锦玉扇价值的近百倍。因此，如何在生产过程中保持锦的稳定性意义重大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种试管微扦插繁殖玉扇锦的方法，该方法能够用于玉扇锦带锦叶片的扦插繁殖。

本发明提供的技术方案如下：

一种试管微扦插繁殖玉扇锦的方法，包括如下步骤：

(1)材料的选取和消毒：以玉扇锦成品苗为材料，将其放温室大棚控水5-10d后拔出，切除根部，冲洗干净，然后置于在超净工作台，用70-80％的酒精浸泡25-35s，再用含有1-2滴的吐温-80的0.05-0.15％的升汞溶液消毒8-12min，用无菌水冲洗3-5次后，用无菌滤纸滤干残余的水分；

(2)在无菌条件下，将消毒后的玉扇不带锦的叶片剔除，带锦的叶片在接入的过程中保持其基部生长点的完整性，将叶片内侧朝上，用斜插的方式接入诱导叶片基部长芽的培养基中，该诱导培养基的配方如下：改良MS+蔗糖28-32g+卡拉胶6-10g·L^-1，pH＝5.5-6.0，每瓶接1片带锦叶片；该步骤的培养条件为温度24-32℃，暗培养8-12d后，转入光培养，每天光照培养9-11h，光照强度为1900-2100LX；玉扇叶片接入芽诱导培养基45-55d，至基部长出完整的玉扇锦小芽；

(3)将上述诱导的玉扇锦小苗接入生根培养基中，生根培养基为：1/2改良MS(大量元素减半，其他元素不变)+IBA0.5-1.5mg·L^-1+NAA0.5-1.5mg·L^-1+活性炭0.5-1.5g·L^-1+蔗糖18-22g+卡拉胶6-10g·L^-1；该步骤的培养条件为温度24-32℃，每天光照培养9-11h，光照强度为1900-2100LX；培养至玉扇锦小苗长成直径约2.8-3.2cm的生根苗；

(4)将根系良好、叶片完整的玉扇锦生根苗，在炼苗棚进行适应性炼苗18-22d；然后将炼好后的生根苗取出，用水冲洗根部残留的培养基，用内吸性的杀菌剂水溶液浸泡1-2min,将消毒好的玉扇锦小苗放在阴凉通风处晾干，待玉扇锦组培苗晾到叶片发皱，即可进行移栽。

优选地，步骤(1)中，用含有1-2滴的吐温-80的0.05-0.15％的升汞溶液消毒8-12min。

优选地，为提高玉扇叶片的芽诱导率，将基本培养基MS进行改良，改良方法如下：降低MS中硝酸铵的量，提高磷酸二氢钾的量，补充加入硝酸钙。改良后的MS培养基简称改良MS，优选地，改良后的MS中，硝酸铵的量为700-900mg·L^-1，磷酸二氢钾的量为330-350mg·L^-1，补充加入硝酸钙含量为300-500mg·L^-1，其他成分的量不变。

进一步优选，改良后的MS中，硝酸铵的量为800mg·L^-1，磷酸二氢钾的量为340mg·L^-1，补充加入硝酸钙含量为400mg·L^-1，其他成分的量不变。

优选地，步骤(2)的玉扇叶片接入芽诱导培养基的培养时间为45-55d。

优选地，步骤(3)培养时间为55-65d。

优选地，步骤(4)适应性炼苗的参数条件为例如温度27-32℃、相对湿度为90％。

优选地，步骤(4)移栽基质中一般要求疏松透气、排水性良好，含适量的腐殖质。

优选地，移栽基质为体积比泥炭土：火山岩＝3:1。

优选地，种植以后在土表上1-2cm厚的赤玉土。

由上述描述可知，本发明提供了一种试管微扦插繁殖玉扇锦的方法，该方法能够用于玉扇锦带锦叶片的扦插繁殖。对玉扇锦的繁殖及栽培技术研究具有十分重要的意义。

本发明对MS进行改良，使其更有利于玉扇锦小芽的生长；由于对带锦的玉扇采用微扦插的方式进行繁殖，在繁殖过程中不加入细胞分裂素，可保持植株的稳定性，实验结果表明，用微扦插繁殖玉扇锦，其带锦的比例高达66.7％。因此，采用此方法繁殖玉扇锦，具有很高的经济价值和实用性。

附图说明

图1为扇叶片接入芽诱导培养基50d后，基部长出完整的玉扇锦小芽；

图2为培养60d后，玉扇锦小苗长成直径约3cm的生根苗；

图3为根系良好、叶片完整、直径3-4cm的玉扇锦生根苗；

图4为玉扇锦组培苗移栽于基质。

具体实施方式

(1)材料的选取和消毒以玉扇锦成品苗为材料，将其放温室大棚控水1周后拔出，切除根部，冲洗干净，然后置于在超净工作台，用75％的酒精浸泡30s，再用含有1-2滴的吐温-80的0.1％的升汞溶液消毒10min，用无菌水冲洗3～5次后，用无菌滤纸滤干残余的水分；

(2)在无菌条件下，将消毒后的玉扇不带锦的叶片剔除，带锦的叶片在接的过程中保持其基部生长点的完整性，将叶片内侧朝上，用斜插的方式接入诱导叶片基部长芽的培养基中，为提高玉扇叶片的芽诱导率，将基本培养基MS进行改良，改良方法如下：降低MS中硝酸铵的量，提高磷酸二氢钾的量，补充加入硝酸钙。改良后的MS培养基简称改良MS。改良后的MS中，硝酸铵的量为800mg·L^-1，磷酸二氢钾的量为340mg·L^-1，补充加入硝酸钙的量为400mg·L^-1，其他的量不变。对MS进行改良的理由：降低铵态氮的含量和提高钾的含量能改善玉扇芽的生长，培养基中铵态氮的含量太高时对玉扇培养物有一定的毒害和抑制作用，但培养基中不能缺乏铵盐，因此加入硝酸钙；(2)磷是玉扇的必需元素之一，在组培中适当提高磷的含量有利于玉扇锦小芽的的生长及保持锦的稳定性；钙对玉扇的新陈代谢和许多生理生化过程起着重要作用，增加钙离子的含量有利于玉扇锦小芽的生长。(3)氯离子过量对玉扇组织和细胞有不利的影响，因此减少氯离子。

该诱导培养基的配方如下：改良MS+蔗糖30g+卡拉胶8.0g·L^-1，pH＝5.8，每瓶接1片带锦叶片，以防止交叉感染；该步骤的培养条件为温度24～32℃，暗培养10d后，转入光培养，每天光照培养9～11h，光照强度为1900～2100LX；玉扇叶片接入芽诱导培养基50d后，基部长出完整的玉扇锦小芽(如图1)。

(3)将上述诱导的玉扇锦小苗接入生根培养基中，生根培养基为：1/2改良MS(大量元素减半，其他元素不变)+IBA1mg·L^-1+NAA 1mg·L^-1+活性炭1g·L^-1+蔗糖20g+卡拉胶8.0g·L^-1；该步骤的培养条件为温度24～32℃，每天光照培养9～11h，光照强度为1900～2100LX；培养60d后，玉扇锦小苗长成直径约3cm的生根苗(如图2)。

(4)将根系良好、叶片完整、直径3-4cm的玉扇锦生根苗(如图3)，在炼苗棚进行适应性炼苗20d左右。然后将炼好后的生根苗取出，用水冲洗根部残留的培养基，用内吸性的杀菌剂水溶液浸泡1～2min，将消毒好的玉扇锦小苗放在阴凉通风处晾干，待玉扇锦组培苗晾到叶片发皱，即可进行移栽。移栽基质中一般要求疏松透气、排水性良好好，含适量的腐殖质。通常用泥炭土：火山岩＝3:1(体积比)为宜，种植以后在土表上1-2cm厚的赤玉土，以此防止植株腐烂，阻碍害虫在潮湿的土壤中产卵(如图4)。

Claims

1.一种试管微扦插繁殖玉扇锦的方法，包括如下步骤：

（1）材料的选取和消毒：以玉扇锦成品苗为材料，将其放温室大棚控水5-10 d后拔出，切除根部，冲洗干净，然后置于超净工作台，用70-80%的酒精浸泡25-35 s，再用含有1-2滴的吐温-80的0.05-0.15%的升汞溶液消毒8-12 min，用无菌水冲洗3-5次后，用无菌滤纸滤干残余的水分；

（2）在无菌条件下，将消毒后的玉扇锦不带锦的叶片剔除，带锦的叶片在接入的过程中保持其基部生长点的完整性，将叶片内侧朝上，用斜插的方式接入诱导叶片基部长芽的培养基中，该诱导叶片基部长芽的培养基的配方如下：改良MS+蔗糖28-32g·L^-1+卡拉胶6-10g·L^-1，pH=5.5-6.0，每瓶接1片带锦叶片；该步骤的培养条件为温度24-32 ℃，暗培养8-12d后，转入光培养，每天光照培养9-11 h，光照强度为1900-2100 LX；玉扇锦叶片接入诱导叶片基部长芽的培养基45-55 d，至基部长出完整的玉扇锦小芽；所述的改良MS为将基本培养基MS进行改良，改良方法如下：降低MS中硝酸铵的量，提高磷酸二氢钾的量，补充加入硝酸钙；其中，改良后的MS中，硝酸铵的量为700-900 mg·L^-1，磷酸二氢钾的量为330-350 mg·L^-1，补充加入硝酸钙含量为300-500 mg·L^-1，其他的量不变；

（3）将诱导的玉扇锦小苗接入生根培养基中，生根培养基为：1/2改良MS+IBA 0.5-1.5mg·L^-1+NAA 0.5-1.5 mg·L^-1+活性炭0.5-1.5g·L^-1+蔗糖18-22 g·L^-1+卡拉胶6-10 g·L^-1；该步骤的培养条件为温度24-32℃，每天光照培养9-11 h，光照强度为1900-2100 LX；培养至玉扇锦小苗长成直径2.8-3.2 cm的生根苗；其中，所述的1/2改良MS为大量元素减半，其他元素不变；

（4）将根系良好、叶片完整的玉扇锦生根苗，在炼苗棚进行适应性炼苗18-22 d；然后将炼好后的生根苗取出，用水冲洗根部残留的培养基，用内吸性的杀菌剂水溶液浸泡 1-2min，将消毒好的玉扇锦小苗放在阴凉通风处晾干，待玉扇锦组培苗晾到叶片发皱，即可进行移栽。

2.如权利要求1所述的一种试管微扦插繁殖玉扇锦的方法，其特征在于：改良后的MS中，硝酸铵的量为800 mg·L^-1，磷酸二氢钾的量为340 mg·L^-1，补充加入硝酸钙的量为400mg·L^-1，其他的量不变。

3.如权利要求1所述的一种试管微扦插繁殖玉扇锦的方法，其特征在于：步骤（3）培养时间为55-65 d。

4.如权利要求1所述的一种试管微扦插繁殖玉扇锦的方法，其特征在于：步骤（4）适应性炼苗的温度为27-32 ℃、相对湿度为90%。

5.如权利要求4所述的一种试管微扦插繁殖玉扇锦的方法，其特征在于：移栽基质为体积比泥炭土：火山岩=3:1。

6.如权利要求5所述的一种试管微扦插繁殖玉扇锦的方法，其特征在于：种植以后在土表上1-2 cm厚的赤玉土。