CN102499090A - 十二卷类多肉植物的离体培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种十二卷类多肉植物的离体培养方法,其特征在于,步骤为:第一步:外植体的选择与消毒;第二步:无菌系的建立;第三步:无菌系丛生芽的继代增殖;第四步:生根培养;第五步:试管苗炼苗培养。本发明利用组织培养技术对十二卷属植物进行工厂化快速繁殖,具有用料少,繁殖快以及提纯复壮脱病毒等优点,可加快繁殖种苗速度,周年生产出优质种苗,对该品名花卉的开发生产具有积极意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种百合科十二卷属性植物的组织培养快速繁殖方法。
背景技术
十二卷属植物(学名HaworthiafasciataHaw)又名锦鸡尾,为百合科十二卷属,原产非洲南部地区,世界各地广泛栽培,在我国干燥的沙漠地带亦有野生种类(耐寒性)分布。喜温暖干燥和阳光充足的环境,怕低温和阴暗潮湿,生长适期3-10月,最适温度15-25度,最高可忍受35-40度的高温。对土壤要求不严,但以疏松肥沃的沙壤土为宜。
该类植物在世界上有150个种,多年生肉质草本,无茎,叶片肉质厚实,其叶片上有条纹,名贵品种上分布有红色、白色、金黄色条纹,非常美丽,是不可多得的观赏植物,作盆栽观赏,在居室、阳台、办公桌上摆放呈现清新高雅之态。目前在日本、美国、以色列等非常盛行,我国上海、北京、广州等大城市从国外进口种苗或直接进口商品盆花,价格昂贵,售价从数十元至上万元不等。但此植物繁殖主要靠分株,每年繁殖量仅3-5株,名贵品种更少,故制约了应用推广,造成种苗奇缺,供不应求,名贵种苗或商品盆花价格高昂,普通百姓很难消费。有关十二卷属植物的生产国内有些零星报道,但未见利用花枝嫩茎段离体培养及规模化生产的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种十二卷属植物的组织培养快速繁殖方法,以花枝嫩茎段为外植体,直接诱导无菌芽培育成试管苗。
为了达到上述目的,本发明的技术方案是提供了一种十二卷类多肉植物的离体培养方法,其特征在于,步骤为:
第一步:外植体的选择与消毒
在春夏季节,选取十二卷多肉植物刚抽生的呈半木质化的花枝,自基部整枝剪下,清洗干净后,消毒;
第二步:无菌系的建立
将消毒过的花枝切成0.5-1.5厘米的茎段,接种于发生培养基上,进行初始诱导培养;
第三步:无菌系丛生芽的继代增殖
将初始培养获得的无菌芽切下,接种于第二培养基进行增殖,待在基部叶腋间分化出腋芽后,该腋芽即为丛生芽,继续切割后不断增殖;
第四步:生根培养
将丛生芽切成单芽,接种于第三培养基进行生根培养,在基部分分化出不定根后,试管苗培育成功;
第五步:试管苗炼苗培养
将生根的十二卷试管苗在苗床上作炼苗培养。
优选地,第一步中所述清洗的步骤为:用洗洁精将剪下的花枝清洗两遍,用纱布包裹后用水冲洗3小时后沥干。
优选地,第一步中所述消毒在无菌室超净台上进行,其步骤为:先用质量百分比浓度为75%乙醇的对清洗后的花枝处理60秒,然后用与水的质量比为1:50的洁尔敏溶液处理15分钟,最后用质量百分比浓度为0.1%的氯化汞溶液处理15分钟,用无菌水冲洗三遍。
优选地,第二步中所述发生培养基及第三步中所述第二培养基的成份相同,为加入了0.5-2.0mg/L的6-氨基腺嘌呤、0.005-0.2mg/L的荼乙酸、0.05-0.1mg/L的赤霉素、质量百分比为3%的蔗糖及5.5g/L琼脂粉的MS培养基。
优选地,第二步中所述初始诱导培养、第三步中所述增殖及第四步中所述生根培养的培养温度为25度,光照强度为3000LX,光照时间为12小时/天。
优选地,第三步中所述第三培养为加入了0.1-0.2mg/L的荼乙酸、0.05-0.1mg/L的吲哚丁酸、质量百分比为2%的蔗糖及5.5g/L琼脂粉的1/2MS培养基。
优选地,第五步中所述炼苗培养的培养基质为泥炭和珍珠岩,泥炭与珍珠岩之间的质量比为1:1,其具体步骤为:将幼苗载入培养基质后浇足活棵水,用尼龙薄膜覆盖防止幼苗失水萎焉,3天后揭去尼龙薄膜逐步炼苗。
优选地,所述逐步炼苗的步骤为:在前7天内,每天叶面喷水2-3次,7天后早晚各喷一次,15天后用质量百分比浓度为0.1%的硝酸铵加质量百分比浓度为0.1%的磷酸二氢钾追肥,叶面及根际施肥同时进行,15天后根据基枝含水量适当浇水,保持不干不浇,浇则浇透,3个月后,试管苗可以移栽至各种容器内作盆栽培育。
本发明利用组织培养技术对十二卷属植物进行工厂化快速繁殖,具有用料少,繁殖快以及提纯复壮脱病毒等优点,可加快繁殖种苗速度,周年生产出优质种苗,对该品名花卉的开发生产具有积极意义。
具体实施方式
为使本发明更明显易懂,兹以优选实施例作详细说明如下。
实施例1
本发明提供了一种十二卷类多肉植物的离体培养方法,其步骤为:
第一步:外植体的选择与消毒
在春夏季节,选取十二卷多肉植物刚抽生的呈半木质化的花枝,自基部整枝剪下,用洗洁精清洗两遍,用纱布包裹后置于自来水龙头下冲洗3小时后沥干。在无菌室超净台上消毒,先用质量百分比浓度为75%的乙醇处理60秒,然后用与水的质量比为1:50的洁尔敏溶液处理15分钟,最后用质量百分比浓度为0.1%的氯化汞处理15分钟,用无菌水冲洗三遍。
第二步:无菌系的建立
在超净台上将消毒过的花枝切成1厘米左右的茎段,接种于发生培养基上,进行初始诱导培养。培养基为加入了0.5mg/L的6-氨基腺嘌呤(英文简称为6-BA)、0.005mg/L荼乙酸(英文简称为NAA)、0.05mg/L的赤霉素(英文简称为GA)、质量百分比为3%的蔗糖及5.5g/L琼脂粉的MS培养基,PH值为5.8,培养温度为25度(24小时恒温),光照强度为3000LX,光照时间为12小时/天;
第三步:无菌系丛生芽的继代增殖
将初始培养获得的无菌芽切下,接种于第二培养基,30天后在基部叶腋间分化出腋芽(丛生芽),继续切割后不断增殖,以后每30天增殖一次,增值率为1:2.5-3。第二培养基为加入了0.5mg/L的6-BA、0.05mg/L的GA、0.005mg/L的NAA、质量百分比为3%的蔗糖及5.5g/L的琼脂粉的MS培养基,PH值为5.8,培养温度为25度,光照强度为3000LX,光照时间为12小时/天。
第四步:生根培养
将丛生芽切成单芽,接种于第三培养基,越3-4周后在基部分分化出不定根,试管苗培育成功。第三培养基为加入了0.1mg/L的NAA、0.05mg/L的吲哚丁酸(英文简称为IBA)、质量百分比为2%的蔗糖、5.5g/L的琼脂粉的1/2MS培养基,PH值为5.8,培养温度为25度,光照强度为3000LX,光照时间为12小时/天。
第五步:试管苗炼苗培养
将生根的十二卷试管苗在苗床上作炼苗培养。培养基质为泥炭和珍珠岩,泥炭和珍珠岩之间的质量比为1:1,将幼苗载入后浇足活棵水,用尼龙薄膜覆盖防止幼苗失水萎焉,3天后揭去尼龙薄膜逐步炼苗。前7天内,每天叶面喷水2-3次,7天后早晚各喷一次,15天后用质量百分比浓度为0.1%的硝酸铵加质量百分比浓度为0.1%的磷酸二氢钾追肥(叶面及根际施肥同时进行)。15天后可根据基枝含水量适当浇水,保持不干不浇,浇则浇透。3个月后,试管苗可以移栽至各种容器内作盆栽培育。
实施例2
本发明提供了一种十二卷类多肉植物的离体培养方法,其步骤为:
第一步:外植体的选择与消毒
在春夏季节,选取十二卷多肉植物刚抽生的呈半木质化的花枝,自基部整枝剪下,用洗洁精清洗两遍,用纱布包裹后置于自来水龙头下冲洗3小时后沥干。在无菌室超净台上消毒,先用质量百分比浓度为75%的乙醇处理60秒,然后用与水的质量比为1:50的洁尔敏溶液处理15分钟,最后用质量百分比浓度为0.1%的氯化汞处理15分钟,用无菌水冲洗三遍。
第二步:无菌系的建立
在超净台上将消毒过的花枝切成1厘米左右的茎段,接种于发生培养基上,进行初始诱导培养。培养基为加入了2.0mg/L的6-BA、0.2mg/L的 NAA、0.05-0.1mg/L的GA、质量百分比为3%的蔗糖及5.5g/L琼脂粉的MS培养基,PH值为5.8,培养温度为25度(24小时恒温),光照强度为3000LX,光照时间为12小时/天;
第三步:无菌系丛生芽的继代增殖
将初始培养获得的无菌芽切下,接种于第二培养基,30天后在基部叶腋间分化出腋芽(丛生芽),继续切割后不断增殖,以后每30天增殖一次,增值率为1:2.5-3。第二培养基为加入了2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的GA、0.2mg/L的NAA、质量百分比为3%的蔗糖及5.5g/L的琼脂粉的MS培养基,PH值为5.8,培养温度为25度,光照强度为3000LX,光照时间为12小时/天。
第四步:生根培养
将丛生芽切成单芽,接种于第三培养基,越3-4周后在基部分分化出不定根,试管苗培育成功。第三培养基为加入了0.2mg/L的NAA、0.1mg/L的IBA、质量百分比为2%的蔗糖、5.5g/L的琼脂粉的1/2MS培养基,PH值为5.8,培养温度为25度,光照强度为3000LX,光照时间为12小时/天。
第五步:试管苗炼苗培养
将生根的十二卷试管苗在苗床上作炼苗培养。培养基质为泥炭和珍珠岩,泥炭和珍珠岩之间的质量比为1:1,将幼苗载入后浇足活棵水,用尼龙薄膜覆盖防止幼苗失水萎焉,3天后揭去尼龙薄膜逐步炼苗。前7天内,每天叶面喷水2-3次,7天后早晚各喷一次,15天后用质量百分比浓度为0.1%的硝酸铵加质量百分比浓度为0.1%的磷酸二氢钾追肥(叶面及根际施肥同时进行)。15天后可根据基枝含水量适当浇水,保持不干不浇,浇则浇透。3个月后,试管苗可以移栽至各种容器内作盆栽培育。
Claims (8)
1.一种十二卷类多肉植物的离体培养方法,其特征在于,步骤为:
第一步:外植体的选择与消毒
在春夏季节,选取十二卷多肉植物刚抽生的呈半木质化的花枝,自基部整枝剪下,清洗干净后,消毒;
第二步:无菌系的建立
将消毒过的花枝切成0.5-1.5厘米的茎段,接种于发生培养基上,进行初始诱导培养;
第三步:无菌系丛生芽的继代增殖
将初始培养获得的无菌芽切下,接种于第二培养基进行增殖,待在基部叶腋间分化出腋芽后,该腋芽即为丛生芽,继续切割后不断增殖;
第四步:生根培养
将丛生芽切成单芽,接种于第三培养基进行生根培养,在基部分分化出不定根后,试管苗培育成功;
第五步:试管苗炼苗培养
将生根的十二卷试管苗在苗床上作炼苗培养。
2.如权利要求1所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法,其特征在于,第一步中所述清洗的步骤为:用洗洁精将剪下的花枝清洗两遍,用纱布包裹后用水冲洗3小时后沥干。
3.如权利要求1所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法,其特征在于,第一步中所述消毒在无菌室超净台上进行,其步骤为:先用质量百分比浓度为75%乙醇的对清洗后的花枝处理60秒,然后用与水的质量比为1:50的洁尔敏溶液处理15分钟,最后用质量百分比浓度为0.1%的氯化汞溶液处理15分钟,用无菌水冲洗三遍。
4.如权利要求1所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法,其特征在于,第二步中所述发生培养基及第三步中所述第二培养基的成份相同,为加入了0.5-2.0mg/L的6-氨基腺嘌呤、0.005-0.2mg/L的荼乙酸、0.05-0.1mg/L的赤霉素、质量百分比为3%的蔗糖及5.5g/L琼脂粉的MS培养基。
5.如权利要求1所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法,其特征在于,第二步中所述初始诱导培养、第三步中所述增殖及第四步中所述生根培养的培养温度为25度,光照强度为3000LX,光照时间为12小时/天。
6.如权利要求1所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法,其特征在于,第三步中所述第三培养为加入了0.1-0.2mg/L的荼乙酸、0.05-0.1mg/L的吲哚丁酸、质量百分比为2%的蔗糖及5.5g/L琼脂粉的1/2MS培养基。
7.如权利要求1所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法,其特征在于,第五步中所述炼苗培养的培养基质为泥炭和珍珠岩,泥炭与珍珠岩之间的质量比为1:1,其具体步骤为:将幼苗载入培养基质后浇足活棵水,用尼龙薄膜覆盖防止幼苗失水萎焉,3天后揭去尼龙薄膜逐步炼苗。
8.如权利要求7所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法,其特征在于,所述逐步炼苗的步骤为:在前7天内,每天叶面喷水2-3次,7天后早晚各喷一次,15天后用质量百分比浓度为0.1%的硝酸铵加质量百分比浓度为0.1%的磷酸二氢钾追肥,叶面及根际施肥同时进行,15天后根据基枝含水量适当浇水,保持不干不浇,浇则浇透,3个月后,试管苗可以移栽至各种容器内作盆栽培育。
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