CN103125394A - 一种阿旁宫寿组培再生体系建立的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种阿旁宫寿组培再生体系建立的方法，具体操作步骤如下：1）培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分；2)外植体的选取及消毒；3）愈伤组织的诱导及增殖；4）不定芽的分化及增殖；5）壮苗培养；6）移栽。本发明利用植物组织培养技术对阿房宫进行再生培养，能够在短时间内获得大量遗传性状一致的优质壮苗，克服了常规繁殖方法慢的缺点，对其规模化生产和种质资源保存都具有积极意义，同时本技术也为其遗传转化体系的建立奠定了坚实的实验基础。

Description

一种阿旁宫寿组培再生体系建立的方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术、植物茎尖培养技术，主要是一种阿旁宫寿组培再生体系建立的方法。
背景技术
阿旁宫寿属百合科十二卷属（Haworthia）多肉植物,其叶片肥厚多汁，窗面晶莹透明，并具有城墙纹理，规整美丽，为优良的多肉植物品种。由于其自然繁殖率低，且原产地不在我国，加之人类过度采掘和对其生境的破坏，目前数量较少、市售价格居高不下，使其推广受到限制。因此，利用植物组织培养技术进行阿房宫寿的快速繁殖，对于保存优良种质资源、繁殖名优珍稀品种具有重要的意义，以实现其规模化生产以满足国内外市场的需求。植物组织培养方法可以在短期内快使植物速繁殖，不仅繁殖速度块，且因为是无性繁殖可以保持与母株的一致的遗传性状。但是，在此之前还没有关于建立阿房宫寿组培再生体系的报道，更没有成功的实例。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种阿旁宫寿组培再生体系建立的方法。
本发明的目的是通过如下技术方案来完成的。该阿旁宫寿组培再生体系建立的方法主要包括如下步骤：
1）、培养基的配制：
（1）基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂5～9g/L，pH=5.8;
（2）诱导培养基：MS+6-BA4～8mg/L+NAA0.05～0.5mg/L;
（3）分化培养基：MS+6-BA0.05～0.5mg/L+NAA0.05～0.5mg/L;
（4）增殖培养基：MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L;
（5）壮苗培养基：MS+6-BA0.05～0.1mg/L+NAA0.05～0.1mg/L;
2）外植体的选取与灭菌：取阿房宫寿的幼嫩花序，将花蕾清洗消毒后备用；
3）愈伤组织的诱导及增殖：将步骤2）消毒处理后的花蕾在无菌条件下接种于诱导培养基上，经1～2个月后诱导出愈伤组织，将愈伤组织转接到新鲜的诱导培养基上进行增殖培养；
4）不定芽的分化及增殖：将步骤3）愈伤组织在无菌条件下转接到分化培养基上，培养20～40天后分化出不定芽，将不定芽丛切割成小丛后转接到增殖培养基上以丛生芽方式增殖；
5）壮苗培养：将步骤4）丛生芽在无菌条件下切割成单株后转接到壮苗培养基上，培养30～50天后其植株直径可大3～5cm;
6)移栽：将步骤5）壮苗切除根部后清洗并晾干，然后移栽至多肉植物颗粒土基质中栽培。
进一步地，本发明在所述步骤1）中，所述的培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分具体为：
（1）基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂5～9g/L，pH=5.8;
（2）诱导培养基：MS+6-BA6mg/L+NAA0.5mg/L;
（3）分化培养基：MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L;
（4）增殖培养基：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L;
（5）壮苗培养基：MS+6-BA0.05mg/L+NAA0.05mg/L;
进一步地，本发明在所述步骤2）中，所述的消毒处理是去除花序上闭合花蕾的外包片，再将花蕾连同部分花葶逐个切下，先用浓洗衣粉溶液浸泡20～60min后再用自来水冲洗干净，然后依次在体积比为70%的酒精和有效氯浓度为1%的次氯酸钠溶液中分别浸泡0.5～1min和4～7min，最后用无菌水冲洗3～5次；
进一步地，本发明在所述步骤3）中，所述消毒处理后的花蕾，先用解剖刀将其基部切伤后接种于诱导培养基上，并使伤口接触到培养基。
进一步地，本发明在所述步骤6）中，所述切除根部的壮苗清洗后置于通风避光处3～10天晾至微微皱缩后移栽至多肉植物颗粒土基质中栽培。
进一步地，本发明在所述步骤3）中，所述的培养条件是，培养温度为23±2℃、光照强度为30～60μmol·m-2·s-1、光照时间为8～10小时/天；
进一步地，本发明在所述步骤4）、5）中，所述的培养条件是，培养温度为23±2℃、光照强度为80～120μmol·m-2·s-1、光照时间为8～12小时/天；
本发明的有益效果是：利用植物组织培养技术对阿房宫进行再生培养，能够在较短时间内获得大量遗传性状一致的优质壮苗，克服了常规繁殖方法慢的缺点，对其规模化生产和种质资源保存都具有积极意义，同时本技术也为其遗传转化体系的建立奠定了坚实的实验基础。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步阐述，实施例将帮助更好地理解本发明，但本发明并不仅仅局限于下述实施例。
实施例1：
本发明提供了一种阿旁宫寿组培再生体系建立的方法，其步骤为：
1）、培养基的配制
（1）基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂5～9g/L，pH=5.8;
（2）诱导培养基：MS+6-BA4～8mg/L+NAA0.05～0.5mg/L;
（3）分化培养基：MS+6-BA0.05～0.5mg/L+NAA0.05～0.5mg/L;
（4）增殖培养基：MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L;
（5）壮苗培养基：MS+6-BA0.05～0.1mg/L+NAA0.05～0.1mg/L;
2）、外植体的选取与灭菌
取阿房宫寿的幼嫩花序为外植体材料，去除花序上闭合花蕾的外包片，再将花蕾连同部分花葶逐个切下，先用浓洗衣粉溶液浸泡10～60min后再用自来水冲洗干净，然后依次在体积比为70%的酒精和有效氯浓度为1%的次氯酸钠溶液中分别浸泡0.5～1min和4～7min，最后用无菌水冲洗3～5次；
3）、愈伤组织的诱导及增殖培养
将消毒处理后的花蕾在无菌条件下先用解剖刀将其基部切伤后接种于诱导培养基上，并使伤口接触到培养基。经1～2个月后诱导出愈伤组织，将愈伤组织转接到新鲜的诱导培养基上进行增殖培养；培养温度为23±2℃、光照强度为30～60μmol·m-2·s-1、光照时间为8～10小时/天；
4）、不定芽的分化及增殖
将愈伤组织在无菌条件下转接到分化培养基上，培养20～40天后分化出不定芽，将不定芽丛切割成小丛后转接到增殖培养基上以丛生芽方式增殖；培养温度为23±2℃、光照强度为80～120μmol·m-2·s-1、光照时间为8～12小时/天；
5）、壮苗培养
将增殖丛生芽在无菌条件下切割成单株后转接到壮苗培养基上，培养30～50天后其植株直径可大3～5cm;培养温度为23±2℃、光照强度为80～120μmol·m-2·s-1、光照时间为8～12小时/天；
6)、移栽
切除壮苗根部并清洗后置于通风避光处3～10天晾至微微皱缩后移栽至多肉植物颗粒土基质中栽培,浇水后覆膜遮荫，之后逐渐揭开薄膜使幼苗适应外境，移栽成活率大于95%。
实施例2：
本发明提供了一种阿旁宫寿组培再生体系建立的方法，其步骤为：
1）、培养基的配制
（1）基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂5～9g/L，pH=5.8;
（2）诱导培养基：MS+6-BA6mg/L+NAA0.5mg/L;
（3）分化培养基：MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L;
（4）增殖培养基：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L;
（5）壮苗培养基：MS+6-BA0.05mg/L+NAA0.05mg/L;
2）、外植体的选取与灭菌
取阿房宫寿的幼嫩花序为外植体材料，去除花序上闭合花蕾的外包片，再将花蕾连同部分花葶逐个切下，先用浓洗衣粉溶液浸泡10～60min后再用自来水冲洗干净，然后依次在体积比为70%的酒精和有效氯浓度为1%的次氯酸钠溶液中分别浸泡0.5～1min和4～7min，最后用无菌水冲洗3～5次；
3）、愈伤组织的诱导及增殖培养
将消毒处理后的花蕾在无菌条件下先用解剖刀将其基部切伤后接种于诱导培养基上，并使伤口接触到培养基。经1～2个月后诱导出愈伤组织，将愈伤组织转接到新鲜的诱导培养基上进行增殖培养；培养温度为23±2℃、光照强度为30～60μmol·m-2·s-1、光照时间为8～10小时/天；
4）、不定芽的分化及增殖
将愈伤组织在无菌条件下转接到分化培养基上，培养20～40天后分化出不定芽，将不定芽丛切割成小丛后转接到增殖培养基上以丛生芽方式增殖；培养温度为23±2℃、光照强度为80～120μmol·m-2·s-1、光照时间为8～12小时/天；
5）、壮苗培养
将增殖丛生芽在无菌条件下切割成单株后转接到壮苗培养基上，培养30～50天后其植株直径可大3～5cm;培养温度为23±2℃、光照强度为80～120μmol·m-2·s-1、光照时间为8～12小时/天；
6)、移栽
切除壮苗根部并清洗后置于通风避光处3～10天晾至微微皱缩后移栽至多肉植物颗粒土基质中栽培,浇水后覆膜遮荫，之后逐渐揭开薄膜使幼苗适应外境，移栽成活率大于95%。
最后需要说明的是，除本实施例外，本发明还可以有其它实施方式和变形，以上列举的仅是本发明的具体实施例子。凡本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种阿旁宫寿组培再生体系建立的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤： 
1）、培养基的配制： 
（1）基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂5～9g/L，pH=5.8； 
（2）诱导培养基：MS+6-BA4～8mg/L+NAA0.05～0.5mg/L； 
（3）分化培养基：MS+6-BA0.05～0.5mg/L+NAA0.05～0.5mg/L； 
（4）增殖培养基：MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L； 
（5）壮苗培养基：MS+6-BA0.05～0.1mg/L+NAA0.05～0.1mg/L； 
2）外植体的选取与消毒：取阿房宫寿的幼嫩花序，将花蕾清洗消毒后备用； 
3）愈伤组织的诱导及增殖：将步骤2）消毒处理后的花蕾在无菌条件下接种于诱导培养基上，经1～2个月后诱导出愈伤组织，将愈伤组织转接到新鲜的诱导培养基上进行增殖培养； 
4）不定芽的分化及增殖：将步骤3）愈伤组织在无菌条件下转接到分化培养基上，培养20～40天后分化出不定芽，将不定芽丛切割成小丛后转接到增殖培养基上以丛生芽方式增殖； 
5）壮苗培养：将步骤4）丛生芽在无菌条件下切割成单株后转接到壮苗培养基上，培养30～50天后其植株直径可大3～5cm； 
6)移栽：将步骤5）壮苗切除根部后清洗并晾干，然后移栽至多肉植物颗粒土基质中栽培。 
2.根据权利要求1所述的阿旁宫寿组培再生体系建立的方法，其特征在于：在所述步骤1）中，所述的培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分具体为： 
（1）基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂5～9g/L，pH=5.8; 
（2）诱导培养基：MS+6-BA6mg/L+NAA0.5mg/L; 
（3）分化培养基：MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L; 
（4）增殖培养基：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L; 
（5）壮苗培养基：MS+6-BA0.05mg/L+NAA0.05mg/L。 
3.根据权利要求1所述的阿旁宫寿组培再生体系建立的方法，其特征在于：在所述步骤2）中，所述的消毒处理是去除花序上闭合花蕾的外包片，再将花蕾连同部分花葶逐个切下，先用洗衣粉溶液浸泡20～60min后再用自来水冲洗干净，然后依次在体积比为70%的酒精和有效氯浓度为1%的次氯酸钠溶液中分别浸泡0.5～1min和4～7min，最后用无菌水冲洗3～5次。 
4.根据权利要求1所述的阿旁宫寿组培再生体系建立的方法，其特征在于：在所述步骤3）中，所述消毒处理后的花蕾，先用解剖刀将其基部切伤后接种于诱导培养基上，并使伤口接触到培养基。 
5.根据权利要求1所述的阿旁宫寿组培再生体系建立的方法，其特征在于：在所述步骤6）中，所述切除根部的壮苗清洗后置于通风避光处3～10天晾至微微皱缩后移栽至多肉植物颗粒土基质中栽培。 
6.根据权利要求1所述的阿旁宫寿组培再生体系建立的方法，其特征在于：在所述步骤3）中，所述的培养条件是，培养温度为23±2℃、光照强度为30～60μmol·m-2·s-1、光照 时间为8～10小时/天。 
7.根据权利要求1所述的阿旁宫寿组培再生体系建立的方法，其特征在于：在所述步骤4）、5）中，所述的培养条件是，培养温度为23±2℃、光照强度为80～120μmol·m-2·s-1、光照时间为8～12小时/天。 
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