CN107027632A - 以叶片为外植体的万象离体快繁方法 - Google Patents

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季陈
张克中
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Abstract

本发明的目的是为克服传统万象繁殖方法存在的繁殖速度慢，成活率低等缺点，提供一种万象离体快速繁殖的方法，使万象在相对短的时间内产生大量遗传背景稳定，株型一致的再生植株。以万象植株叶片切块为外植体，可以在不影响母株正常发育及繁殖的情况下使万象在相对短的时间内大规模繁殖，并且取材不受季节限制，再生周期短，愈伤组织诱导率高，丛生芽分化率高，植株移栽后生长状态良好。非常适用于万象稀缺品种的快速繁殖，平均单株再生苗的成本低，非常适合工厂化生产。

Description

以叶片为外植体的万象离体快繁方法
技术领域
本发明属于花卉繁殖方法，具体涉及花卉的无性快速繁殖方法。
背景技术
万象，是百合科，十二卷属，多年生草本植物，原产于南非，喜温暖干燥和阳光充足环境，不耐寒，怕高温和强光，耐半阴。万象是一种珍稀品种，肉质叶片呈半圆筒状，酷似象腿，具有很高的观赏价值和市场价值。万象的传统繁殖方法，多采用扦插繁殖和分株繁殖，此无性繁殖方法可以保持植株的性状稳定，但是繁殖周期长，生产效率较低，极大的影响了扩繁效率。植物组织培养即植物离体培养技术，根据植物细胞的全能性，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等)、组织(如形成层、表皮、皮层、胚乳等)或细胞(如大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生体，在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，形成完整的植株或产生具有经济价值的其它产品的技术。由植物组织培养所产生的再生植株除了极低的变异外，基本都能保持亲本(外植体来源植株)的优良性状。植株组织培养技术发明以来已经取得了很大的进展。利用植物组织培养技术离体快速繁殖万象可以大规模产生株型齐整的植株，进一步满足市场需求。前人所做的万象组培实验虽然也有成功的先例，但是愈伤组织丛生芽诱导分化率低，导致产出效率低，极大阻碍了万象的组织培养离体快繁在实际生产的大规模应用，并不具备市场化生产条件。本发明可使万象在一年以内实现快速繁殖，而且繁殖效率高，非常适合工厂化生产。
发明内容
本发明的目的是为克服传统万象繁殖方法存在的繁殖速度慢，成活率低等缺点；也为了克服前人万象组织培养试验中丛生芽诱导分化率低，再生周期长，不适合工厂化生产等缺点。提供一种万象离体快速繁殖的方法，使万象在相对短的时间内产生大量遗传背景稳定，株型一致的再生植株。
本发明所采用的技术方案是：
1.外植体接种及愈伤组织诱导：取万象植株的幼嫩叶片，放入无菌超净台中，用75％(体积/体积)酒精浸泡30～60s，用无菌水冲洗2～3次后，迅速倒入1.5～3％(质量/体积)次氯酸钠溶液中浸泡8～10min，倾去次氯酸钠溶液，再用无菌水冲洗4～5次，将处理好的万象叶片，横切成1cm左右小段；接种在含6-BA 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、KT 1mg/L蔗糖3.0％(质量/体积)，琼脂6.0％(质量/体积)，pH值为5.6～6.0的MS固体培养基上，光照强度为1500～2000Lux，光照时间每天12～14小时，培养温度在24℃～28℃，40～50天继代一次，待长出黄绿色粒状愈伤时即可诱导分化。
2.丛生芽的诱导：将愈伤转接到诱导分化培养基：MS+KT0.5mg/L+6-BA(0.1～0.2mg/L)+NAA(0～0.1mg/L)+20.0％天然椰汁(体积/体积)，琼脂6.0％(质量/体积)，pH值为5.6～6.0的MS培养基上。光照强度为1500～2000Lux，光照时间每天12～14小时，培养温度在24℃～28℃，50～60天继代一次，该愈伤分化能力可持续一年以上。从一块愈伤经过反复继代可分化出600株左右的再生苗。
3.壮苗培养：再生苗转到1/2MS+20％天然椰汁(体积/体积)，pH值为5.6～6.0的壮苗培养基上，光照强度1500～2000Lux，光照时间每天12～14小时，培养温度在24℃～28℃。
4.再生植株移栽：壮苗植株长到3～4厘米后，将壮苗植株的组培瓶拿到温室中打开，使壮苗植株适应温室环境5～7天后，将壮苗植株从组培瓶中取出，将培养基清洗干净，移栽至100％蛭石或是赤玉土栽培基质中，栽培基质需要经过121℃灭菌30～60分钟。7～15天左右浇一次透水便可成活。
本发明使万象在相对较短的时间内大量产生基因背景相同、株型统一的再生植株。以万象植株叶片切块为外植体，通过特殊的培养基选配和搭配以及外界的环境协同配合作用脱分化率可达65.5％，丛生芽诱导率可达86.3％，叶片外植体产生的愈伤组织，分化后产生丛生芽，丛生芽经继代后可分化出600株左右的再生苗，再生苗的壮苗存活率可达96％，在适宜环境下移栽成活率达100％。本发明可以在不影响母株正常发育及繁殖的情况下使万象在相对短的时间内大规模繁殖，并且取材不受季节限制，再生周期短，愈伤组织诱导率高，丛生芽分化率高，植株移栽后生长状态良好。非常适用于万象稀缺品种的快速繁殖，平均单株再生苗的成本极低，非常适合工厂化生产。
具体实施方式
下面将结合实例对本发明做进一步的说明，但本发明的内容不仅限于以下2个实施例：
实施例一：
选择稻妻万象叶片为外植体进行离体快繁。
1.外植体接种及愈伤组织诱导：取稻妻万象植株的幼嫩叶片，放入无菌超净台中，用75％(体积/体积)酒精浸泡45s，用无菌水冲洗2～3次后，迅速倒入2.5％(质量/体积)次氯酸钠溶液中浸泡9min，倾去次氯酸钠溶液，再用无菌水冲洗4～5次，将处理好的万象叶片，横切成1cm左右小段；接种在含6-BA 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、KT 1mg/L蔗糖3.0％(质量/体积)，琼脂6.0％(质量/体积)，pH值为6.0的MS固体培养基上，光照强度为2000Lux，光照时间每天12小时，培养温度在25℃，45天继代一次，待长出黄绿色粒状愈伤时即可诱导分化。
2.丛生芽的诱导：将愈伤转接到诱导分化培养基：MS+KT 0.5mg/L+6-BA 0.2mg/L+20.0％天然椰汁(体积/体积)，琼脂6.0％(质量/体积)，pH值为6.0的MS培养基上。光照强度为2000Lux，光照时间每天12小时，培养温度在25℃，60天继代一次，该愈伤分化能力可持续一年以上。从一块愈伤经过反复继代可分化出586株的再生苗。
3.壮苗培养：再生苗转到1/2MS+20％天然椰汁(体积/体积)，pH值为6.0的壮苗培养基上，光照强度2000Lux，光照时间每天12小时，培养温度在25℃。
4.再生植株移栽：壮苗植株长到3～4厘米后，将壮苗植株的组培瓶拿到温室中打开，使壮苗植株适应温室环境6天后，将壮苗植株从组培瓶中取出，将培养基清洗干净，移栽至100％蛭石栽培基质中，蛭石基质需要经过121℃灭菌60分钟。15天左右浇一次透水便可成活。
实施例二：
选择雪国万象叶片为外植体进行离体快繁。
1.外植体接种及愈伤组织诱导：取雪国万象植株的幼嫩叶片，放入无菌超净台中，用75％(体积/体积)酒精浸泡60s，用无菌水冲洗2～3次后，迅速倒入3％(质量/体积)次氯酸钠溶液中浸泡8min，倾去次氯酸钠溶液，再用无菌水冲洗4～5次，将处理好的万象叶片，横切成1cm左右小段；接种在含6-BA 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、KT 1mg/L蔗糖3.0％(质量/体积)，琼脂6.0％(质量/体积)，pH值为5.8的MS固体培养基上，光照强度为1500Lux，光照时间每天14小时，培养温度在28℃，50天继代一次，待长出黄绿色粒状愈伤时即可诱导分化。
2.丛生芽的诱导：将愈伤转接到诱导分化培养基：MS+KT 0.5mg/L+6-BA 0.1mg/L+NAA0.1mg/L+20.0％天然椰汁(体积/体积)，琼脂6.0％(质量/体积)，pH值为5.8的MS培养基上。光照强度为1500Lux，光照时间每天14小时，培养温度在28℃，50天继代一次，该愈伤分化能力可持续一年以上。从一块愈伤经过反复继代可分化出600株左右的再生苗。
3.壮苗培养：再生苗转到1/2MS+20％天然椰汁(体积/体积)，pH值为5.8的壮苗培养基上，光照强度1500Lux，光照时间每天14小时，培养温度在28℃。
4.再生植株移栽：壮苗植株长到3～4厘米后，将壮苗植株的组培瓶拿到温室中打开，使壮苗植株适应温室环境7天后，将壮苗植株从组培瓶中取出，将培养基清洗干净，移栽至100％赤玉土栽培基质中，赤玉土基质需要经过121℃灭菌45分钟。7天左右浇一次透水便可成活。
以万象植株叶片切块为外植体，脱分化率可达65.5％，丛生芽诱导率可达86.3％，现对于现有技术的普通培养基提高12％左右。叶片外植体产生的愈伤组织，分化后产生丛生芽，丛生芽经继代后可分化出600株左右的再生苗，再生苗的壮苗存活率可达96％，在适宜环境下移栽成活率达100％，现对于现有技术的普通培养基提高15％左右。本发明可以在不影响母株正常发育及繁殖的情况下使万象在相对短的时间内大规模繁殖，并且取材不受季节限制，再生周期短，愈伤组织诱导率高，丛生芽分化率高，植株移栽后生长状态良好。非常适用于万象稀缺品种的快速繁殖，平均单株再生苗的成本极低，非常适合工厂化生产。

Claims (6)

1.以叶片为外植体的玉露离体快繁方法，其特征在于：包括下列步骤：
1)外植体接种及愈伤组织诱导：取万象植株的幼嫩叶片，放入无菌超净台中，用75％(体积/体积)酒精浸泡30～60s，用无菌水冲洗2～3次后，迅速倒入1.5～3％(质量/体积)次氯酸钠溶液中浸泡8～10min，倾去次氯酸钠溶液，再用无菌水冲洗4～5次，将处理好的万象叶片，横切成1cm左右小段；MS固体培养基上，待长出黄绿色粒状愈伤时即可诱导分化；
2)丛生芽的诱导：将愈伤转接到诱导分化培养基，该愈伤分化能力可持续一年以上，从一块愈伤经过反复继代可分化出600株左右的再生苗；
3)壮苗培养：再生苗转到壮苗培养基上；
4)再生植株移栽：壮苗植株长到3～4厘米后，将壮苗植株的组培瓶拿到温室中打开，使壮苗植株适应温室环境5～7天后，将壮苗植株从组培瓶中取出，将培养基清洗干净，移栽至100％蛭石或是赤玉土栽培基质中，栽培基质需要经过121℃灭菌30～60分钟，7～15天左右浇一次透水便可成活。
2.如权利要求1所述的离体快繁方法，其特征在于：1)所述外植体接种及愈伤组织诱导中MS固体培养基包含6-BA 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、KT 1mg/L蔗糖3.0％(质量/体积)，琼脂6.0％(质量/体积)。
3.如权利要求1所述的离体快繁方法，其特征在于：2)所述丛生芽的诱导中诱导分化培养基包含：MS+KT0.5mg/L+6-BA(0.1～0.2mg/L)+NAA(0～0.1mg/L)+20.0％天然椰汁(体积/体积)，琼脂6.0％(质量/体积)。
4.如权利要求1所述的离体快繁方法，其特征在于：3)所述壮苗培养：再生苗转到1/2MS+20％天然椰汁(体积/体积)，pH值为5.6～6.0的壮苗培养基上。
5.如权利要求1所述的离体快繁方法，其特征在于：所述光照强度为1500～2000Lux，光照时间每天12～14小时，培养温度在24℃～28℃，40～50天继代一次。
6.如权利要求1所述的离体快繁方法，其特征在于：4)再生植株移栽：壮苗植株长到3～4厘米后，将壮苗植株的组培瓶拿到温室中打开，使壮苗植株适应温室环境5～7天后，将壮苗植株从组培瓶中取出，将培养基清洗干净，移栽至100％蛭石或是赤玉土栽培基质中，栽培基质需要经过121℃灭菌30～60分钟，7～15天左右浇一次透水便可成活。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109729980A (zh) * 2019-03-15 2019-05-10 江苏农林职业技术学院 一种基于led光源的毛汉十二卷组培快繁方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103125394A (zh) * 2013-03-13 2013-06-05 浙江省农业科学院 一种阿旁宫寿组培再生体系建立的方法
CN103141387A (zh) * 2013-03-08 2013-06-12 浙江省农业科学院 一种万象组织培养的方法
CN104756871A (zh) * 2015-04-22 2015-07-08 南京晓庄学院 一种青鸟寿的组织培养方法
CN105010147A (zh) * 2015-08-14 2015-11-04 泓柯（天津）农业科技有限公司 一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基及组培方法
CN105746352A (zh) * 2016-03-10 2016-07-13 浙江大学 多肉植物巨大赤线ho1的组织培养法
CN106305417A (zh) * 2016-08-19 2017-01-11 天津市园林花卉示范中心 一种截形十二卷瓶外生根组培育苗方法
CN106577294A (zh) * 2016-12-24 2017-04-26 河南中医药大学 一种姬玉露的离体快速繁殖方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103141387A (zh) * 2013-03-08 2013-06-12 浙江省农业科学院 一种万象组织培养的方法
CN103125394A (zh) * 2013-03-13 2013-06-05 浙江省农业科学院 一种阿旁宫寿组培再生体系建立的方法
CN104756871A (zh) * 2015-04-22 2015-07-08 南京晓庄学院 一种青鸟寿的组织培养方法
CN105010147A (zh) * 2015-08-14 2015-11-04 泓柯（天津）农业科技有限公司 一种用于增加十二卷属多肉植物组培繁殖速度的专用培养基及组培方法
CN105746352A (zh) * 2016-03-10 2016-07-13 浙江大学 多肉植物巨大赤线ho1的组织培养法
CN106305417A (zh) * 2016-08-19 2017-01-11 天津市园林花卉示范中心 一种截形十二卷瓶外生根组培育苗方法
CN106577294A (zh) * 2016-12-24 2017-04-26 河南中医药大学 一种姬玉露的离体快速繁殖方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Y. OGIHARA等: "Tissue culture in Haworthia Part 4 genetic characterization of plants regenerated from callus", 《THEOR. APPL.GENET.》 *
李胜等: "《植物组织培养》", 31 July 2015, 中国林业出版社 *
杨娟等: "多肉植物十二卷花影寿离体快繁技术研究", 《上海农业科技》 *
蒯娟等: "条纹十二卷的组织培养与快速繁殖", 《植物生理学通讯》 *
郭生虎等: "百合科十二卷属玉露的组培快繁关键技术研究", 《中国农学通报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109729980A (zh) * 2019-03-15 2019-05-10 江苏农林职业技术学院 一种基于led光源的毛汉十二卷组培快繁方法

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