CN103858758A

CN103858758A - 一种草莓种苗组织培养快繁技术

Info

Publication number: CN103858758A
Application number: CN201210536299.3A
Authority: CN
Inventors: 黄日静; 王春花; 姜兆彤; 史功成; 张敬强; 刁玉峰; 孙静; 纪宏宇; 杜宇斌; 朱秀珍; 谷旭琳; 佟杰; 郭文普
Original assignee: DONGGANG INSTITUTE OF STRAWBERRY
Current assignee: DONGGANG INSTITUTE OF STRAWBERRY
Priority date: 2012-12-12
Filing date: 2012-12-12
Publication date: 2014-06-18

Abstract

本发明涉及一种草莓脱毒组培快繁技术，属于农业生物工程技术领域。包括如下步骤：取草莓的匍匐茎尖为外植体，经诱导增殖、继代培养、生根培养、移栽驯化等步骤，快速繁殖脱毒组培苗。本发明通过调节培养基的配方，利用茎尖生长点诱导培养，达到不经愈伤组织生长阶段直接诱导出芽，防治了种性变异，接种操作容易；取材时间科学，接种污染率低、成活率高；脱毒简便、快捷、彻底；繁殖系数达5～8倍，速度快，成本低，实用性强等特点，适合工厂化育苗，可商品化生产。

Description

一种草莓种苗组织培养快繁技术

技术领域

本发明涉及农业生物工程技术领域，特别是涉及一种草莓种苗脱毒组培快繁技术。

背景技术

我国是一个农业大国，果树种植发展迅速，尤其草莓生产面积逐年增加。丹东市是全国最大的草莓生产基地，草莓生产技术总体水平在国内处于领先地位，但总体单位生产效益还远不如发达国家高，与全国一样属带毒生产。有史以来，栽培草莓一直采用埋压匍匐茎或分株等营养途径繁殖苗木，造成多种病毒病的感染率很高，植株对病毒没有免疫能力，到目前国内外又没有特效药剂或其他有效方法治愈草莓的病毒病，感染病毒的草莓比未感染病毒的草莓长势弱、抗性差、产量明显下降，果品品质与商品性状变劣，严重影响了这一名特优种植业的稳步发展。利用组培生物技术进行茎尖培养脱毒苗是最经济最有效的途径，辅之配套快繁技术可以满足生产上对草莓优质种苗的需要。为此我们经过十几年科技攻关，研发出草莓茎尖组培快繁技术，很好的解决了目前草莓脱毒技术繁琐、成本高、变异率大、繁殖慢，苗木短缺等问题，推广应用前景广阔、经济效益高。

发明内容

（一）要解决的技术问题

本发明要解决培养基配方、取材、外植体体灭菌、诱导增殖、生根培养、移栽驯化等关键技术，以达到安全快速繁殖优良草莓脱毒组培苗的目的。

（二）技术方案

为了解决上述技术问题，东港市草莓研究所科技人员借鉴国内外专家研究成果，组建标准化组织培养试验室与生产工厂，对草莓茎尖分生组织培养快繁技术进行了研究，发现了草莓种苗组织培养快繁技术。

本发明提供了：

1．一种草莓种苗组织培养快繁方法，该方法包括以下步骤：

（1）取材与清洗：选取第一片叶原基刚展开的匍匐茎的茎尖，掐取前端约3-4cm，放在漏筐里用自然水冲洗干净；

（2）杀菌消毒：先将冲洗后的茎尖用75%的酒精浸泡2-5min，倒出酒精后，用0.1%的氯化汞溶液浸泡5-30min，然后用无菌水冲洗2-3次；

（3）芽的诱导与增殖：将杀菌消毒处理后的茎尖，用尖镊子剥叶，露出生长点，用刀切取0.2-0.5mm，放到由MS和0.3-0.5mg/l的6BA构成的诱导培养基中进行初代培养；

（4）继代培养：将诱导出的丛生芽接到基由MS、0.2-0.4mg/l的6BA以及0.01mg/l的IBA构成的增殖培养中进行继代培养；

（5）生根培养：用由MS、0.1-0.2mg/l的6BA以及0.1-0.2mg/l的IBA构成的生根培养基培养继代苗20-30d后，得到生根苗；

（6）移栽驯化：将生根苗取出后，洗净其根部培养基，扦插到温室里装有基质的穴盘中驯化。

2．根据1所述的草莓种苗组织培养快繁方法，其中，在步骤（3）中，在温度为25℃、光照2000-3000lx、日光照时长12h下进行初代培养，培养时间为40-60d。

3．根据1所述的草莓种苗组织培养快繁方法，其中，在步骤（4）中，在温度为25℃、光照2000-3000lx、日光照时长12h下进行继代培养，培养时间为20-30d。

4．根据1所述的草莓种苗组织培养快繁方法，其中，在步骤（4）中，基质使用棉隆土壤消毒剂进行杀菌消毒处理。

5．根据1所述的草莓种苗组织培养快繁方法，其中，在步骤（4）中，扦插后，保持相对湿度为80%以上，驯化温度控制在5℃-20℃，待瓶苗长出3-5片心叶后，驯化完成。

（三）有益效果

上述技术包括取材；杀菌消毒；芽的诱导与增殖；继代培养(增殖培养)；生根培养；移栽驯化等步骤。本发明的创新点在于：1、创新改良MS培养基配方，使用最佳增殖培养基激素水平，防止激素过高带来的玻璃化苗或变异苗，减少损失。2、以匍匐茎尖为外植体，具有取材方便，病毒少，接种有效率高，遗传性稳定等特点。3、材料用自然水简单冲洗干净即可，打破理论上的长时间冲洗，极大减少时间与资源的浪费4、取材时间限定在10月以后至翌年5月份，能有效降低外植体接种污染率，大大提高成活率，极大地降低成本。5、培养基的制作以自然水取代蒸馏水，以食用白糖取代纯蔗糖大大节约生产成本。6、改进组培程序，省略专制生根培养基专门瓶内生根环节，采取调整增殖激素，边增殖边生根的方法，减少组培的综合生产成本。6、研制应用新型扦插基质，首创提高草莓扦插苗生根成活率技术。7、扦插基质中化学消毒剂隆鑫的使用，能大大降低扦插苗病虫草害的发生，大大降低了生产成本与劳动成本。

具体实施方式

根据本发明的草莓种苗组织培养快繁方法，该方法步骤如下：

（1）取材与清洗：选取匍匐茎尖。取材时间一般在每年的5月中旬前10月以后。6-9月间匍匐茎大量发生，取材容易，但此时逢高温高湿季节，材料带菌多，杀菌不彻底，外植体接种容易污染，成活率低。选取保护地或露地草莓生产田块中品种纯正母株上的匍匐茎尖（大小为第一片叶原基刚展开），从距匍匐茎尖以下3-4cm处掐取，放在漏筐里用自然水冲洗干净。试验证明：1-4月间从温室生产田取来红颜草莓的匍匐茎，即使不经自然水冲洗，接种可能零污染；7-8月间露地红颜匍匐茎，自然水冲洗时间再长，接种污染率有时仍会高达90%以上。（2）杀菌消毒：先将冲洗好的茎尖用75%的酒精进行消毒，时间一般为2-5min（依材料粗嫩度及选取季节灵活掌握）。倒出酒精后，用0.1%的氯化汞（Hgcl₂）溶液浸泡5-30min（依材料嫩粗度及选取季节灵活掌握）。将氯化汞倒出，用无菌水冲洗2-3遍。（3）芽的诱导与增殖：将处理后的无菌材料，用尖镊子剥叶，露出生长点，用刀切取0.2-0.5mm，放到诱导培养基MS+6BA（6-苄胺基腺嘌呤）0.3-0.5mg/l中进行初代培养。MS培养基配方由大量元素：硝酸钾、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙；微量元素：硼酸、硫酸猛、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁；有机成分：肌醇、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、糖、琼脂等构成。培养室温度一般25℃，光照2000-3000lx，每日光照12h，诱导时间大约为40-60d。将红颜茎尖生长点分别接种到MS+6BA0.3mg/l；MS+6BA0.4mg/l；MS+6BA0.5mg/l培养基中，培养50d后每个接点诱导出的丛生芽数会分别增至3-5倍；5-7倍；8-10倍。（4）继代培养（增殖培养）：将诱导出的丛生芽接到增殖培养基MS+6BA（6-苄胺基腺嘌呤）0.2-0.4mg/l+IBA（吲哚丁酸）0.01mg/l中进行继代培养。温度、光照和其它管理如初代培养一样，一般30d左右可以继代分瓶一次，根据品种数量确定扩繁次数。要控制激素量不易过大，继代次不能过多。将红颜丛生芽继代到MS+6BA0.2mg/l；MS+6BA0.3mg/l；MS+6BA0.4mg/l培养基中，增殖系数会达到3倍、5倍、8倍。（5）生根培养：为促进继代苗生根，要调整增殖培养基激素含量。用MS+6BA（6-苄胺基腺嘌呤）0.1-0.2mg/l+IBA（吲哚丁酸）0.1-0.2mg/l培养继代苗，大约20-30d后，将生根大苗（高约5cm）取出来扦插，小苗继续培养，边扩繁边生根。（6）移栽驯化：将生根后的瓶苗取出后，洗净其根部培养基，扦插到温室里装有基质的穴盘中驯化。基质选用病菌含量少的山皮土加草炭土同时用棉隆土壤消毒剂进行杀菌消毒处理，然后过筛，装盘铺平，浇透水。扦插后，用小眼喷壶浇水，起拱，覆盖塑料薄膜。前一周保持相对湿度80%以上，2周后可撤掉小拱膜，驯化温度最低应控制在5℃-25℃，穴盘土保持湿润，注意防虫防病及时拔出杂草。待瓶苗长出3-5片心叶后，原原种苗就驯化好了，可以移栽了。

本发明的草莓种苗组织培养快繁方法，使东港市草莓研究所优质组培苗真正走出试验室，实现大规模工厂化生产。目前年可生产销售优质脱毒组培苗2000-3000万株。按此技术方案生产的草莓脱毒组培原原种苗，从取材、接点大小、激素用量、继代次数等方面避免或控制变异出现，保证了品种的纯度。草莓研究所生产的草莓原种苗，田间生产栽培过程中从未出现类似“鬼果”或“花而不实”等变异现象。生根及驯化培养技术的改良创新，解决了东港地区冬季阴雪寡照天数多，驯化温室气温低，瓶苗成活慢，易感病的难题，大大提高了瓶苗驯化成活率（90%以上）且保证原原种苗生产质量标准。以茎尖组织培养获得脱毒苗较常规苗（未经组培脱毒）有明显的生长优势及增产效果。不同品种的草莓脱毒苗比对照能增加植株的生长量，植株株高增加7.1%-32.8%，叶面积增大3.2%-54.9%,匍匐茎数量增多18.4%-89.6%；更能提高植株的产、质量，其中增加产量达15.8%-45.1%，结果数多9.2%-18.8%，单果重增加0.87%-26.3%，成熟果实的可溶性固形物含量提高3.9-8.5%。

草莓研究所对红颜草莓脱毒苗与常规苗（对照）连续进行三年（2000、2001、2002）温室生产对比试验与草莓原种场大田繁苗试验，结果显示，脱毒苗比常规苗株高增加24.7%；叶面积增加26.2%；单果重增加29.1%；果实产量增加32.5%；果实可溶性固形物含量增加9.3%；繁殖系数提高30.9%。可见草莓组培脱毒苗比常规苗农艺性状改良，经济性状优良，繁殖力强，增产增效明显。

由于组培生产能脱去种苗病毒，恢复和提高品种优良种性，种苗生长健壮，抗病性、抗逆性增强，育苗及生产过程中可避免或减少农药使用，有利于生产无公害、绿色及有机草莓，果品质量好，商品价值高，增产增效显著。草莓种苗组织培养快繁技术的创新应用保证了东港乃至全国草莓产业的健康、高效、快速发展，经济与社会效益十分突出。

Claims

1.一种草莓种苗组织培养快繁方法，该方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的草莓种苗组织培养快繁方法，其中，在步骤（3）中，在温度为25℃、光照2000-3000lx、日光照时长12h下进行初代培养，培养时间为40-60d。

3.根据权利要求1所述的草莓种苗组织培养快繁方法，其中，在步骤（4）中，在温度为25℃、光照2000-3000lx、日光照时长12h下进行继代培养，培养时间为20-30d。

4.根据权利要求1所述的草莓种苗组织培养快繁方法，其中，在步骤（4）中，基质使用棉隆土壤消毒剂进行杀菌消毒处理。

5.根据权利要求1所述的草莓种苗组织培养快繁方法，其中，在步骤（4）中，扦插后，保持相对湿度为80%以上，驯化温度控制在5℃-20℃，待瓶苗长出3-5片心叶后，驯化完成。