CN102860258B

CN102860258B - 樟树无性系组培繁育方法

Info

Publication number: CN102860258B
Application number: CN201210346936.0A
Authority: CN
Inventors: 曾令海; 周丽华; 何波祥; 连辉明; 蔡燕灵; 张谦; 蔡静如
Original assignee: Guangdong Academy of Forestry
Current assignee: Guangdong Academy of Forestry
Priority date: 2012-09-19
Filing date: 2012-09-19
Publication date: 2014-05-07
Anticipated expiration: 2032-09-19
Also published as: CN102860258A

Abstract

本发明涉及一种樟树无性系组培繁育方法，属于林木组培繁育技术领域，该方法步骤为：外植体材料的消毒→芽的诱导→芽的增殖→生根诱导→生根苗的炼苗→组培苗的移栽与管理，具体方法是将当年生的嫩梢去掉叶片，切成每段带有1～2个腋芽的茎段，将茎段消毒，用诱导培养基进行诱导培养，新芽再进行增殖培养、生根培养，培育出的生根苗进行炼苗驯化，最后将经驯化的苗移栽到消毒的基质上，进行移栽苗的管理；采用该方法育苗不受季节、天气等自然因素的影响，生产成本低，节约土地资源，提高育苗效率，同时采用该方法能有效防止褐化现象，有效增殖率高，生根苗生长整齐，培养周期短，组培苗移栽成活率高，苗期培育周期短，该项技术有着非常重要的意义。

Description

樟树无性系组培繁育方法

技术领域

本发明涉及一种组培繁育方法，具体涉及樟树无性系组培繁育方法，属于林木组培繁育技术领域。

背景技术

樟树（Cinnamomum camphora(L.)Presl），属樟科樟属树种，是常绿乔木，是国家二级保护树种。在华南地区，樟树是著名的多用途乡土珍贵树种和经济树种，分布范围广，开发利用程度高，家喻户晓，一直受到人们的高度重视。它除了是珍贵用材外，还可以提炼冰片、樟油等，其深加工产品在医药、光学及工业上应用广泛，与人们的生产和生活息息相关。目前可供木材和樟油提取的资源已经极为有限。天然分布的樟树大都是低产低质次生林，且多为零星分布，可利用的资源甚少。较好的樟树一般都是房前屋后的风水林、城市景观和道路绿化树木。近年来，随着人们环保意识和商品林建设能力的提高，大规模造林绿化广泛开展，樟树人工林开始大量发展，樟树良种苗木市场巨大。

以往樟树苗木培育技术主要有二种，一是种子培育，即在樟子种子成熟期，从樟树上采摘果实，把果实经地过去皮处理，得到种子，然后通过对种子适当的处理进步播种催芽培育苗木；其二是扦插繁育，即从樟树上采摘半木质化的穗条，用激素处理穗条后，把穗条插入适当的基质中培育苗木。

樟树苗木的培育主要依靠种子繁育实生苗。但种子繁育苗木存在如下缺点，一是种子育苗季节性强，一年一茬，种子保存时间不长，半年之后发芽率大幅下降；二是经科学选育的良种一般种子都很少，难以满足生产应用的需求，而营建种子园投资大，周期长；三是种子培育苗木不能培育无性系，生产上林份分化大，林相参差不齐，对经过选择表现优良的单株，无法实现规模利用。

樟树扦插繁育的缺点是，一是老树穗条成活率低，因此需要营建扦插用的采穗圃，经过修剪矮化，培育合适的冠形，多产穗条。采穗圃需要精细化管理，必须投入大量的人工，在劳动力成本日渐高涨的今日，采穗圃管理成本难以承受；二是采穗母株容易老化，使用周期不长，3-5年后即要淘汰；三是扦插成活率受天气、管理、基质、生根素等诸多因素的影响，往往成活率难以保证；四是苗木价格偏高，市场难以接受。

樟树是目前我国以南方地区的主要造林树种和园林绿化树种，每年苗木用量约数亿株，樟树种苗基本上是采用种子繁育实生苗，少量扦插繁育的扦插苗。近几年随着樟树良种选育的深入，所选育出来的的良种受到种子和插穗数量的限制，良种的推广应用遭遇瓶劲。樟树无性系组培繁育技术的攻克，使得大樟树良种的大规模使用成为现实。

但是研究人员发现樟树在组织培养中存在以下几方面的问题：一是组培芽增殖时，褐化现象严重，芽尖坏死，甚至枯褐而死，有效增殖率低；二是组培生根诱导时，生根苗生长不整齐，生根苗培养周期长；三是组培苗移栽成活率低，苗期培育周期长，所以研究樟树无性系组培繁育的新技术有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的是克服现有种子繁育和扦插繁育技术的不足，提供一种樟树无性系组培繁育方法，该方法克服了樟树种子繁育受季节影响、种子发芽率低，繁殖速率慢的缺点，同时克服了扦插苗繁育的缺点，实现了樟树良种大规模繁育。

为实现上述发明的目的，本发明采取的技术方案如下：

樟树无性系组培繁育方法，包括如下步骤：

（1）外植体材料的消毒：取当年生嫩梢去掉叶片，切段，使每段为带有1～2个腋芽的茎段，茎段先用0.2%灭菌净消毒10～20min，无菌水清洗6次，再用0.1%升汞，2～5滴吐温80，处理3～5min，无菌水清洗6次，消毒后备用；消毒成功率在80%以上(见表1)。

表1 外植体材料的消毒试验

（2）芽的诱导：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到芽的诱导培养基上，经过6～15d的培养，在腋芽处开始萌动，并长出新芽，所述的诱导培养基为DCR_改＋6-BA 0.3mg+NAA 0.05～0.5mg；芽的诱导率最高达75.3%(见表2)。

表2 不同培养基对外植体腋芽诱导的影响

注：X₅和X₉为樟树的家系号

（3）芽的增殖：将步骤（2）长出的新芽培养30d后，将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，在增殖培养基培养6～15d，就会形成丛生芽，所述的增殖培养基为DCR_改＋6-BA0.5～3mg+NAA 0.05～0.5mg+IAA 0.05～2mg或DCR_改＋6-BA 0.5～4mg+NAA 0.05～1mg；有效芽的增殖系数最高为3.2(见表3和表4)。

表3 X₅在不同激素不同水平组合正交L₉（3⁴）试验的芽增殖结果分析

注：T是各因素各水平之和，各因素各水平的平均数，R是各因素各水平平均数的极差。

表4 X₉在不同激素不同水平组合正交L₉（3⁴）试验芽增殖结果分析

（4）生根诱导：步骤（3）的丛生芽的单芽长到1.5～2cm左右长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根，在生根培养基中培养7～10d，茎基部诱导出根，所述的生根培养基为1/2MS+IBA 1.5～2.5mg+IAA 1.5～2.5mg+6-BA 0～0.5mg+NAA 0.05～0.5mg；生根率最高为96.7%(见表5)。

表5 通用生根培养基试验结果

（5）生根苗的炼苗：经过生根诱导，当苗诱导生根后，将瓶苗置于有70%遮荫的大棚中炼苗30～40d后，苗高3cm以上，可进行移栽；

（6）组培苗的移栽与管理：将步骤（5）进行炼苗的樟树苗移栽至消毒的基质上，移载时，把根放进预先打好的小孔中，使根系舒展，充分压实，使根土密接，要防止栽植过深、窝根或露根，移栽后浇透水；栽植后用塑料薄膜作小拱状盖好小苗保湿，遮荫60-80%；为防止病害，移苗后当天喷防病药剂800-1000倍菌毒清液或多菌灵一次，以后每周喷药剂一次，3d后逐渐打开塑料薄膜，15天后全部打开，待小苗长出新叶时方可开始薄施肥，1个月后，可进行正常的水肥管理。采用这种移栽管理办法的移栽成活率高达90%以上(见表6)。

表6 移栽试验

步骤（6）所述的基质为泥炭土和黄心土配制而成的混合基质，其混合比为泥炭土:黄心土=1:4。

步骤（6）所述的消毒是采用0.1%高锰酸钾溶液消毒。

所述的诱导培养和增殖培养的培养基均添加蔗糖30g/L，生根阶段的培养基添加蔗糖20g/L，全部培养基均添加卡拉胶0.6～0.7%，pH值为5.8。

培养室的培养条件：培养条件25～30℃，每天光照12～16h，光照度为1500～3000lx。

本发明所采用的基本培养基DCR_改和MS的配方如表7：

表7 基本配方表

DCR基本培养基的组成如表8：

表8 基本配方表

成份	DCR（mg/L）
		NH₄NO₃	400
KNO₃	340
		KH₂PO₄	170
CaCl₂·2H₂O	85

Ca(NO₃)₂·4H₂O	556
		MgSO₄·7H₂O	370
FeSO₄·7H₂O	27.8
		Na₂-EDTA	37.3
MnSO₄·H₂O	22.3
		ZnSO₄·7H₂O	8.6
H₃BO₄	6.2
		KI	0.83
Na₂MoO₄·2H₂O	0.25
		CuSO₄·5H₂O	0.25
CoCl₂·6H₂O	0.025
		NiCl₂	0.025
肌醇	200
		甘氨酸	2
VB₁	1
		VB₆	0.5
糖	30000

本发明的有益效果是：

1.本方法具有种苗繁殖快，种苗繁殖不受季节的影响，一年四季都可培育苗木；同时解决了科学研究选育的良种应用的问题，以往良种生产单纯依赖建设种子园的方法，采用该方法节约了土地、经费以及解决了种子园投产周期长的问题。

2.本方法不需要营建扦插用的采穗圃，节约了土地，同时不必投入大量的人工，节省了成本，而且繁育种苗不受天气等自然因素的影响，成活率比较高，苗木的价格合适，推广应用前景好。

3.采用该方法，良种大规模通过组培扩繁，并推广造林，其木材的经济收入相应也大幅度提高，同时发挥更好的生态和社会效益。

4.采用该方法能有效防止褐化现象，有效增殖率高，生根苗生长整齐，培养周期短，组培苗移栽成活率高，苗期培育周期短，该项技术有着非常重要的意义。

具体实施方式

下面通过实例对本发明做进一步详细说明，这些实例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。

实施例1

樟树无性系组培繁育方法，包括如下步骤：

（1）外植体材料的消毒：取当年生嫩梢去掉叶片，切段，使每段成为带有1～2个腋芽的茎段，茎段先用0.2%灭菌净消毒10min，无菌水清洗6次，再用0.1%升汞，2～5滴吐温80，处理3min，无菌水清洗6次，消毒后备用；

（2）芽的诱导：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到芽的诱导培养基上进行诱导培养，经过6～15d的培养，在腋芽处开始萌动，并长出新芽，所述的诱导培养基为DCR_改＋6-BA0.3mg+NAA 0.05mg；

（3）芽的增殖：将步骤（2）长出的新芽培养30d后，将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，在增殖培养基培养6d，就会形成丛生芽，所述的增殖培养基为DCR_改＋6-BA 0.5mg+NAA 0.05mg+IAA 0.05mg或DCR_改＋6-BA 0.5mg+NAA 0.05mg；

（4）生根诱导：步骤（3）的丛生芽的单芽长到1.5cm左右长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根，在生根培养基中培养7d，茎基部诱导出根，所述的生根培养基为1/2MS+IBA 1.5mg+IAA1.5mg+NAA 0.05mg；

（5）生根苗的炼苗：经过生根诱导，当苗诱导生根后，将瓶苗置于有70%遮荫的大棚中炼苗30d后，苗高3cm以上，可进行移栽；

（6）组培苗的移栽与管理：将步骤（5）进行炼苗的樟树苗移栽至消毒的基质上，移植时，把根放进预先打好的小孔中，使根系舒展，充分压实，使根土密接，要防止栽植过深、窝根或露根，移栽后浇透水；栽植后用塑料薄膜作小拱状盖好小苗保湿，遮荫60-80%；为防止病害，移苗后当天喷防病药剂800倍菌毒清液或多菌灵一次，以后每周喷药剂一次，3d后逐渐打开塑料薄膜，15天后全部打开，待小苗长出新叶时方可开始薄施肥，1个月后，可进行正常的水肥管理。

实施例2

樟树无性系组培繁育方法，包括如下步骤：

（1）外植体材料的消毒：取当年生嫩梢去掉叶片，切段，使每段成为带有1～2个腋芽的茎段，茎段先用0.2%灭菌净消毒20min，无菌水清洗6次，再用0.1%升汞，2～5滴吐温80，处理5min，无菌水清洗6次，消毒后备用；

（2）芽的诱导：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到芽的诱导培养基上进行诱导培养，经过6～15d的培养，在腋芽处开始萌动，并长出新芽，所述的诱导培养基为DCR_改＋6-BA0.3mg+NAA 0.5mg；

（3）芽的增殖：将步骤（2）长出的新芽培养30d后，将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，在增殖培养基培养15d，就会形成丛生芽，所述的增殖培养基为DCR_改＋6-BA3mg+NAA 0.5mg+IAA 2mg或DCR_改＋6-BA 4mg+NAA 1mg；

（4）生根诱导：步骤（3）的丛生芽的单芽长到1.5～2cm左右长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根，在生根培养基中培养10d，茎基部诱导出根，所述的生根培养基为1/2MS+IBA 2.5mg+IAA2.5mg+6-BA 0.5mg＋NAA 0.5mg；

（5）生根苗的炼苗：经过生根诱导，当苗诱导生根后，将瓶苗置于有70%遮荫的大棚中炼苗40d后，苗高3cm以上，可进行移栽；

（6）组培苗的移栽与管理：将步骤（5）进行炼苗的樟树苗移栽至消毒的基质上，移植时，把根放进预先打好的小孔中，使根系舒展，充分压实，使根土密接，要防止栽植过深、窝根或露根，移栽后浇透水；栽植后用塑料薄膜作小拱状盖好小苗保湿，遮荫60-80%；为防止病害，移苗后当天喷防病药剂1000倍菌毒清液或多菌灵一次，以后每周喷药剂一次，3d后逐渐打开塑料薄膜，15天后全部打开，待小苗长出新叶时方可开始薄施肥，1个月后，可进行正常的水肥管理。

实施例3

樟树无性系组培繁育方法，包括如下步骤：

（1）外植体材料的消毒：取当年生嫩梢去掉叶片，切段，使每段成为带有1～2个腋芽的茎段，茎段先用0.2%灭菌净消毒15min，无菌水清洗6次，再用0.1%升汞，2～5滴吐温80，处理4min，无菌水清洗6次，消毒后备用；

（2）芽的诱导：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到芽的诱导培养基上进行诱导培养，经过10d的培养，在腋芽处开始萌动，并长出新芽，所述的诱导培养基为DCR_改＋6-BA0.3mg+NAA 0.3mg；

（3）芽的增殖：将步骤（2）长出的新芽培养30d后，将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，在增殖培养基培养10d，就会形成丛生芽，所述的增殖培养基为DCR_改＋6-BA 2.0mg+NAA 0.3mg+IAA 1.5mg或DCR_改＋6-BA 2.0mg+NAA 0.5mg；

（4）生根诱导：步骤（3）的丛生芽的单芽长到1.5～2cm左右长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根，在生根培养基中培养7～10d，茎基部诱导出根，所述的生根培养基为1/2MS+IBA 2.0mg+IAA 2.0mg+6-BA 0.25mg＋NAA 0.25mg；

（5）生根苗的炼苗：经过生根诱导，当苗诱导生根后，将瓶苗置于有70%遮荫的大棚中炼苗35d后，苗高3cm以上，可进行移栽；

（6）组培苗的移栽与管理：将步骤（5）进行炼苗的樟树苗移栽至消毒的基质上，移植时，把根放进预先打好的小孔中，使根系舒展，充分压实，使根土密接，要防止栽植过深、窝根或露根，移栽后浇透水；栽植后用塑料薄膜作小拱状盖好小苗保湿，遮荫60-80%；为防止病害，移苗后当天喷防病药剂900倍菌毒清液或多菌灵一次，以后每周喷药剂一次，3d后逐渐打开塑料薄膜，15天后全部打开，待小苗长出新叶时方可开始薄施肥，1个月后，可进行正常的水肥管理。

实施例1～3所采用的基本培养基的配方如表9：

表9 基本配方表

Claims

1.樟树无性系组培繁育方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）外植体材料的消毒：取当年生嫩梢去掉叶片，切段，使每段为带有1~2个腋芽的茎段，茎段先用0.2%灭菌净消毒10～20min，无菌水清洗6次，再用0.1%升汞，2～5滴吐温80，处理3～5min，无菌水清洗6次，消毒后备用；（2）芽的诱导：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到芽的诱导培养基上，经过6～15d的培养，在腋芽处开始萌动，并长出新芽，所述的诱导培养基为DCR_改＋6-BA 0.3mg+NAA 0.05～0.5mg；（3）芽的增殖：将步骤（2）长出的新芽培养30d后，将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，在增殖培养基培养6～15d，就会形成丛生芽，所述的增殖培养基为DCR_改＋6-BA 0.5～3mg +NAA 0.05～0.5mg +IAA 0.05～2mg或DCR_改＋6-BA 0.5～4mg +NAA 0.05～1mg；

（4）生根诱导：步骤（3）的丛生芽的单芽长到1.5～2cm长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根，在生根培养基中培养7～10d，茎基部诱导出根，所述的生根培养基为1/2MS+IBA 1.5～2.5mg +IAA 1.5～2.5mg +6-BA 0～0.5mg+NAA 0.05～0.5mg；（5）生根苗的炼苗：经过生根诱导，当苗诱导生根后，将瓶苗置于有70%遮荫的大棚中炼苗30～40d后，苗高3cm以上，进行移栽；

（6）组培苗的移栽与管理：将步骤（5）进行炼苗的樟树苗移栽至消毒的基质上，移载时，把根放进预先打好的小孔中，使根系舒展，充分压实，使根土密接，要防止栽植过深、窝根或露根，移栽后浇透水；栽植后用塑料薄膜作小拱状盖好小苗保湿，遮荫60-80%；为防止病害，移苗后当天喷防病药剂800－1000倍菌毒清液或多菌灵一次，以后每周喷药剂一次，3d后逐渐打开塑料薄膜，15天后全部打开，待小苗长出新叶时方开始薄施肥，1个月后，进行正常的水肥管理；

所述的DCR_改培养基的组成及其含量为：NH₄NO₃800 mg/L、KNO₃ 680 mg/L、KH₂PO₄ 400 mg/L、CaCl₂·2H₂O 170 mg/L、Ca(NO₃)₂·4H₂O 1112 mg/L、MgSO₄·7H₂O 740 mg/L 、FeSO₄·7H₂O 27.8 mg/L 、Na₂-EDTA 37.3 mg/L 、MnSO₄·4H₂O 22.3 mg/L 、ZnSO₄·7H₂O 8.6 mg/L 、H₃BO₄ 6.2 mg/L 、KI 0.83 mg/L 、Na₂MoO₄·2H₂O 0.25 mg/L 、CuSO₄·5H₂O 0.025 mg/L 、CoCl₂·6H₂O 0.025 mg/L 、肌醇 100 mg/L 、甘氨酸 2 mg/L 、VB₁ 0.1 mg/L 、VB₆ 0.5 mg/L 、VC 2 mg/L 、VB₃ 0.5 mg/L 、L-半胱氨酸5 mg/L、糖 30000 mg/L 。

2.根据权利要求1所述的樟树无性系组培繁育方法，其特征在于：步骤（6）所述的基质为泥炭土和黄心土配制而成的混合基质，其混合比为泥炭土:黄心土=1:4。

3.根据权利要求1所述的樟树无性系组培繁育方法，其特征在于：步骤（6）所述的消毒是采用0.1%高锰酸钾溶液消毒。

4.根据权利要求1所述的樟树无性系组培繁育方法，其特征在于：所述的诱导培养和增殖培养的培养基均添加蔗糖30g/L，生根阶段的培养基添加蔗糖20g/L，全部培养基均添加卡拉胶0.6～0.7%，pH值为5.8。

5.根据权利要求1所述的樟树无性系组培繁育方法，其特征在于：培养室的培养条件：培养条件25～30℃，每天光照12～16h，光照度为1500～3000lx。