CN103907534B - 植物组织培养时的新类型外植体及其灭菌方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种植物组织培养时的新类型外植体，以植物生长季的嫩梢为外植体。所述嫩梢为植物生长季自植物茎顶偏下5～10cm长的一段新梢或枝条。本发明还公开了一种嫩梢外植体的灭菌方法，先利用大蒜配置的灭菌水溶液；再将嫩梢浸入溶液中灭菌。本发明以生长季的嫩梢作为外植体进行组织培养，拓展了植物组织培养外植体的使用范围；拓展了自然条件下外植体的接种时间；与传统的叶芽和茎段组织培养相比，生长季的嫩梢结合大蒜水溶液灭菌，缩短了组织培养的时间，降低了组织培养的成本，操作更加简单。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，更具体地说，涉及植物组织培养过程中外植体的选择。
背景技术
能被诱发产生无性增殖系的器官或组织切段称作外植体。目前科学研究和生产实践中所使用的外植体有叶芽、着生叶芽的茎段、根段、叶片、原生质体、胚、胚乳、花药、子房等。
植物外植体的选择，需要根据生长季、植物恰当局部位置的选择进行。现有技术中，本领域技术人员大多选用休眠期的枝条作为外植体，而不选用生长季的新梢。因为现有技术的灭菌溶剂对植物嫩梢损害较大，嫩梢无法存活。因此本领域技术人员不会选用嫩梢做外植体。此处，所述嫩梢为植物生长季自植物茎顶偏下5～10cm长的一段新梢或枝条，因此作为新梢前端的部分的嫩梢，如果需要用作外植体，需要选择温和的灭菌溶剂。
发明内容
本发明以生长季的嫩梢为外植体，经过适宜的灭菌剂处理，用于植物的组织培养。为此本发明提供了一种适合本发明的外植体——植物嫩梢灭菌的溶液，植物嫩梢经过适宜的灭菌剂的处理后，可以正常地生长发育，实现持续繁殖，能够满足植物组织培养的需要，实现植物组织培养的目的。本发明扩大外植体的使用范围，增加外植体的种类；延长自然条件下外植体的接种时间，提高植物组织培养的效率和成功率；降低植物组织培养的成本；使植物组织培养的操作进一步简化。
为了达到上述目的，本发明提供一种植物组织培养时的新类型外植体，以植物生长季的嫩梢为外植体。
此处，所述嫩梢为植物生长季自植物茎顶偏下5～10cm长的一段新梢或枝条；优选为2～3cm长的一段新梢或枝条。
植物嫩梢，由于抗外界环境干扰的能力较差，现有技术的灭菌溶液对其伤害较大，因此限制了嫩梢作为外植体使用的可能。为此，本发明提供了一种新型的灭菌溶液，并提供了一种灭菌方法，包括如下步骤：
1、利用大蒜配置的灭菌水溶液；
2、将嫩梢浸入溶液中灭菌。
步骤1中的溶液配置方法多样，如大蒜烘干、粉碎、添水配置的方法，再比如大蒜切碎、水中浸泡的方法。本发明提供的一种优选方式：以去皮大蒜捣成泥，与无菌单蒸水按重量体积比配置成1～9:1的溶液。
本发明经过研究发现，处于生长期的植物嫩梢经过适宜的灭菌剂的处理，也可以作为植物组织培养的外植体。生长季的嫩梢正处于旺盛的生长发育阶段，如果能克服此期取材容易污染的问题，就可以作为外植体进行组织培养。本发明拓展了植物组织培养外植体的使用范围；拓展了自然条件下外植体的接种时间；与传统的叶芽和茎段组织培养相比，生长季的嫩梢结合大蒜水溶液灭菌，缩短了组织培养的时间，降低了组织培养的成本，操作更加简单。具体优点如下：
1.采用生长季茎上最前端2～3cm长的嫩梢作为外植体，用1：1（W/V）大蒜水溶液（大蒜：无菌单蒸水为1：1，去皮大蒜捣成浆加无菌单蒸水搅拌2min，然后室温下放置30min后，备用）浸泡30min进行灭菌处理。
2.拓展了植物组织培养外植体的使用范围，将生长季的嫩梢作为一种外植体，付诸使用，并获得成功。
3.拓展了自然条件下外植体的接种时间，使以往生长季，尤其是夏季难以灭菌的困难得到克服。
4.与传统的叶芽和茎段组织培养相比，生长季的嫩梢结合大蒜水溶液灭菌，缩短了组织培养的时间（因为所取得嫩梢在田间已经进行了一段时间的生长），组织培养的成本降低（缩短了培养时间、灭菌成本降低），操作更加简单（可以将准备灭菌的外植体直接浸泡在大蒜水溶液中，而不需要其它前处理，如用水冲洗、去鳞片等）。
具体实施方式
本发明在生长季取植物的嫩梢，将其浸入到大蒜水溶液中灭菌，接种到适宜的培养基上进行培养，一段时间以后观察、统计和分析嫩梢的无菌情况、生长发育情况等。植物嫩梢，由于抗外界环境干扰的能力较差，现有技术的灭菌溶液对其伤害较大，因此限制了嫩梢作为外植体使用的可能。为此，本发明提供了一种新型的灭菌溶液——利用大蒜配置的水溶液。具体以去皮大蒜捣成泥，与无菌单蒸水按重量体积比配置成1～9:1的溶液。该灭菌溶液温和，适用于植物嫩梢作为外植体的灭菌。此处，所述嫩梢为植物生长季自植物茎顶偏下5～10cm长的一段新梢或枝条。具体工艺过程如下：
1.在生长季取甜樱桃、桃、月季的新梢。
2.将新梢浸入到1：1（W/V）大蒜水溶液（大蒜：无菌单蒸水为1：1，去皮大蒜捣成浆加无菌单蒸水搅拌2min，然后室温下放置30min后，备用）浸泡30min，取出后用无菌单蒸水冲洗3次，最后用无菌滤纸吸干水分。
3.接种到适宜的初代培养基（培养基配方为：MS+6-BA0.2mg/L+IBA0.05mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH5.8）上进行培养。
4.观察并统计叶芽的萌芽率、嫩梢的平均无菌率（灭菌率可达100%）。
5.在初代培养的基础上，继续进行继代培养、生根培养以及驯化移栽等。
嫩梢作为外植体，由于抗外界环境干扰的能力较差，因此，现有技术的灭菌溶液对其伤害较大，因此限制了嫩梢作为外植体使用的可能。为此，本发明提供了一种新型的灭菌溶液——利用大蒜配置的水溶液，不伤害外植体。具体以去皮大蒜捣成泥，与无菌单蒸水按重量体积比配置成1～9:1的溶液。该灭菌溶液温和，适用于植物嫩梢作为外植体的灭菌。此处，所述嫩梢为植物生长季自植物茎顶偏下5～10cm长的一段新梢或枝条。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种植物组织培养时外植体的灭菌方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、利用大蒜配置的灭菌水溶液；
S2、将嫩梢浸入溶液中灭菌；
步骤S1的具体方法为：去皮大蒜捣成泥，与无菌单蒸水按重量体积比配制成1～9:1的溶液；
步骤S2所述嫩梢为植物生长季自植物茎顶偏下5～10cm长的一段新梢或枝条。
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