CN107484666A

CN107484666A - 一种白芍的组织培养快繁方法

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Publication number: CN107484666A
Application number: CN201710971624.1A
Authority: CN
Inventors: 陈培党
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2017-10-18
Filing date: 2017-10-18
Publication date: 2017-12-19

Abstract

本发明公开了一种白芍的组织培养快繁方法，白芍属多年生草木，根肥大，圆柱形，表面黑褐色或棕黄色。茎直立，光滑无毛。叶互生，下部茎生叶，小叶片狭卵形、椭圆形或披针形，顶端尖，基部楔形，叶面无毛。5~6月开花，8月结果，果实由3~5个小分果组成。根可入药，夏、秋季采，锅内煮至无硬心后除去外皮，或先除外皮再煮，晒干备用。白芍味苦、酸，性微寒。具有平肝止痛，养血调经，剑阴止汗功效。以白芍带腋芽茎段为外植体建立白芍离体快繁体系，为解决白芍规模化生产奠定基础。本发明以带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现白芍的组织培养快速繁殖，为白芍的产业化发展提供技术支持。

Description

一种白芍的组织培养快繁方法

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种白芍的组织培养快繁方法。

背景技术

白芍又名：白芍药、杭芍、川芍、毫芍。属多年生草木，高40~80厘米。根肥大，圆柱形，表面黑褐色或棕黄色。茎直立，光滑无毛。叶互生，下部茎生叶，小叶片狭卵形、椭圆形或披针形，顶端尖，基部楔形，叶面无毛。5~6月开花，花朵大而美丽，白色，有时有深紫色或红色斑块，数朵生于枝顶或枝端，花瓣倒卵形。8月结果，果实由3~5个小分果组成，无毛、先端钩状向外畜弯。根可入药，夏、秋季采，锅内煮至无硬心后除去外皮，或先除外皮再煮，晒干备用。生长于全国大部分地区有分布，多生于山坡、草丛、林下。白芍味苦、酸，性微寒。具有平肝止痛，养血调经，剑阴止汗功效。传统的白芍获取方法是野外采挖野生植物资源，易造成水土流失和严重土壤沙漠化。此外，白芍种子主要来自野生，其品种混杂，种子稀缺，发芽极低，野生白芍资源已不能适应规模化和标准化生产的需要，成为白芍产业发展的最大瓶颈。国内外在植物资源、化学成分分析、生药鉴定、药理作用和临床应用、愈伤组织培养及再分化等方面做了大量的工作。但是，生产中仍然存在许多理论和实践急需解决的问题。为了谋求产业的发展，引领白芍产业走向高技术、高规格、高水准的科技之路，组织培养已经成为目前研究和开发的热点。为促进白芍产业化的发展。因此，非常有必要建立白芍离体再生体系，为白芍的产业化发展提供技术支持和提供优良种苗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以白芍带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现白芍的组织培养快速繁殖，为发展中药材产品特别是白芍种苗提供技术支撑，制作容易，操作简单，粗壮种苗，良好生长环境，丰产增收的一种白芍的组织培养快繁方法。

本发明的一种白芍的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

（1）外植体的处理：选取健壮白芍植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成5厘米长的带有4个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗4h，再用毛轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗4h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒35s后用无菌水洗8次，再用0.1%升汞溶液消毒15min，用无菌水冲洗9次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；

（2）丛生芽导：将步骤（1）处理后的带腋芽茎段切成4cm小段并接种到诱导培养基上,先在25℃条件下全暗培养8天，然后置于每天光照15小时，光照强度为3200lx，直至诱导形成丛生芽；

（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的嫩芽长至约4cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为5200lx，置于培养温度为25℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽；

（4）生根培养：当步骤（2）或（3）的丛生芽长至5cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培养基中进行生根培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为2500lx，培养温度为25℃的条件下培养直至长出根；

（5）试管苗移栽：当小苗长出的新根系长达5cm左右时，并且长出侧根，苗高5cm以上时，将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入经灭菌过的蛭石中。

步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+5mg/L NAA+4mg/L 6-BA+3mg/L KT+5%蔗糖+0.8%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.8。

步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+5.0mg/L 6-BA+1.3mg/L NAA+5%蔗糖+0.8%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.8。

步骤（5）所述的生根培养基为：MS+15mg/L KH₂PO₄+4.0%蔗糖+0.6%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.8。

本发明的优点是:以白芍带腋芽茎段为外植体建立白芍离体快繁体系，为解决白芍规模化生产奠定基础。本发明以带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现了白芍的组织培养快速繁殖，为白芍的产业化发展提供技术支持。技术易撑握，操作方便，得到的种苗健壮，生长发芽快，种苗品种纯正，发芽率高，种苗能满足市场需要。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1：

（1）外植体的处理：选取健壮白芍植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成4厘米长的带有2个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗6h，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗1h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒8s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒8min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。

（2）丛生芽导：将步骤（1）处理后的带腋芽茎段切成4.0cm小段并接种到诱导培养基上,先在35℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2600lx条件下培养20天每个腋芽茎段有6个丛生芽。诱导培养基为：MS+ 4mg/L NAA+ 2mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+4.55%蔗糖+6.6%琼脂+0.4%活性炭，pH值为5.8。

（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的嫩芽长至约5cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在29℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照15小时，光照强度为3100lx，置于培养温度为29℃的条件下培养20天增殖倍数达到8倍。多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽。所述的增殖培养基为：MS+1.1mg/L 6-BA+0.7mg/L NAA+4.6%蔗糖+0.9%琼脂+0.4%活性炭，pH值为5.8。

（4）生根培养：当步骤（2）或（3）的丛生芽长至4cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培养基中进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照16小时，光照强度为2400lx，培养温度为29℃的条件下培养6天即可见根形成，诱导率达99.5%，平均根数达8条，根系为淡棕色、细长、分枝数少，培养20天后根长平均可达到8cm左右。所述的生根培养基为：MS+16mg/L KH₂PO₄+2.38%蔗糖+0.6%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.8。

（5）试管苗移栽：当小苗长出的新根系长达6cm左右时，并且长出侧根，苗高8cm以上时，将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入经灭菌过的蛭石中，成活率达98%以上。

实施例2：

（1）外植体的处理：选取健壮白芍植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成8厘米长的带有5个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗8h，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗5h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒13s后用无菌水洗8次，再用0.1%升汞溶液消毒10min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。

（2）丛生芽导：将步骤（1）处理后的带腋芽茎段切成4cm小段并接种到诱导培养基上,先在29℃条件下全暗培养8天，然后置于每天光照16小时，光照强度为2400lx条件下培养24天每个腋芽茎段有8个丛生芽。诱导培养基为：MS+ 4.7mg/L NAA+1.6mg/L 6-BA+0.8mg/L KT+4.4%蔗糖+0.6%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.8。

（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的嫩芽长至约5cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在29℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3100lx，置于培养温度为29℃的条件下培养20天增殖倍数达到9倍。多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽。所述的增殖培养基为：MS+1.8mg/L 6-BA+0.9mg/L NAA+4.6%蔗糖+0.6%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.8。

（4）生根培养：当步骤（2）或（3）的丛生芽长至5cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培养基中进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照16小时，光照强度为2400lx，培养温度为29℃的条件下培养8天即可见根形成，诱导率达100%，平均根数达6条，根系为淡棕色、细长、分枝数少，培养20天后根长平均可达到8cm左右。所述的生根培养基为：MS+16mg/L KH₂PO₄+2.6%蔗糖+0.6%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.8。

（5）试管苗移栽：当小苗长出的新根系长达6cm左右时，并且长出侧根，苗高8cm以上时，将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入经灭菌过的蛭石中，成活率达95%以上。

Claims

1.一种白芍的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

2.根据权利要求1所述的一种白芍的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+5mg/L NAA+4mg/L 6-BA+3mg/L KT+5%蔗糖+0.8%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.8。

3. 根据权利要求1所述的一种白芍的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+5.0mg/L 6-BA+1.3mg/L NAA+5%蔗糖+0.8%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.8。

4. 根据权利要求1所述的一种白芍的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（5）所述的生根培养基为：MS+15mg/L KH₂PO₄+4.0%蔗糖+0.6%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.8。