CN107873518A

CN107873518A - 一种粉防己种苗的组培方法

Info

Publication number: CN107873518A
Application number: CN201711305198.4A
Authority: CN
Inventors: 韦祥意
Original assignee: GUILIN SUNNYLIGE MODERN BIOTECHNOLOGY Inc
Current assignee: GUILIN SUNNYLIGE MODERN BIOTECHNOLOGY Inc
Priority date: 2017-12-11
Filing date: 2017-12-11
Publication date: 2018-04-06
Anticipated expiration: 2037-12-11
Also published as: CN107873518B

Abstract

本发明公开了一种粉防己种苗的组培方法，包括选取粉防己带腋芽茎段作为外植体，灭菌后接种到MS培养基中进行培养，然后进行诱导培养、继代培养、生根培养和炼苗。本发明通过诱导培养、继代培养和生根培养几个阶段的培养的组织培养方法及各组织培养阶段选择适宜的培养基，有效缩短粉防己育苗时间，提高粉防己种苗质量，在短时间内获得大量优质粉防己种苗，且该方法有效解决了粉防己繁育对块根需求量大、种子育苗发芽率低的问题。

Description

一种粉防己种苗的组培方法

技术领域

本发明涉及中药材栽培技术领域，具体而言，涉及一种粉防己种苗的组培方法。

背景技术

粉防己，又名汉防己、白木香，为防己科，千金藤属植物，多年生落叶缠绕藤本，茎纤细，有纵条纹。粉防己药用部分为粉防己干燥块茎，粉防己性寒，味苦，利水消肿，祛风止痛，用于水肿脚气、小便不利、风湿痹痛、湿疹疮毒、高血压症。

目前粉防己主要以野生采集为主，由于粉防己的药用价值较高，需求量越来越大，过度采挖以及野生环境的破坏，野生资源储量越来越少，只靠野生资源难以满足市场需求。

粉防己生长周期长，种子发芽率低，分根繁殖对块根需求量大，且容易造成品种退化、病虫害加重，经济效益差，难以形成大规模种植。粉防己种苗问题成为制约粉防己规模化种植的瓶颈。

发明内容

有鉴于此，本发明提供的一种粉防己种苗的组培方法，更好的克服了上述现有技术存在的问题和缺陷，该方法有效解决了粉防己繁育对块根需求量大、种子育苗发芽率低的问题，有效缩短粉防己育苗时间，提高粉防己种苗质量，在短时间内获得大量优质粉防己种苗。

一种粉防己种苗的组培方法，包括以下步骤：

(1)选择粉防己带腋芽茎段作为外植体，进行灭菌处理，然后将灭菌后的所述外植体接种到MS培养基中进行培养；

(2)将无菌的所述无菌外植体转接到诱导培养基中进行诱导培养；

(3)将经所述诱导培养的外植体转接到继代培养基中进行继代培养，得到粉防己丛生芽；

(5)将所述粉防己丛生芽转接至生根培养基中进行生根培养，得到粉防己生根苗；

(5)将所述粉防己生根苗进行炼苗。

进一步地，步骤(1)中，在进行所述培养之前，先后进行清洗和灭菌，再切下茎段得到长度为1.5～2cm的带腋芽茎段。

进一步地，所述清洗包括：用水清洗30～45min；所述灭菌包括：先用75％酒精浸泡20～40s，再用混有1～2滴土温80的0.1％升汞摇晃灭菌6～8min，最后用无菌水清洗3～5次。

进一步地，步骤(1)中，所述培养采用暗培养，所述培养的温度为23～27℃，所述培养的湿度为50～55％，所述培养的时间为2～3天。

进一步地，步骤(2)中，步骤(2)中，所述诱导培养基包括MS培养基、苄氨基腺嘌呤、吲哚丁酸、蔗糖和琼脂；所述苄氨基腺嘌呤的浓度为0.3～0.5mg/L，所述吲哚丁酸的浓度为0.05～0.1mg/L，所述蔗糖的浓度为25～35g/L，所述琼脂的浓度为5～7g/L；

所述诱导培养包括：先暗培养7天，再在光照强度为1500～2000lx的条件下光照培养20～30天，光照时间为8～10h/d；所述诱导培养的温度为23～27℃，所述诱导培养的湿度为50～55％。

进一步地，步骤(3)中，所述继代培养基包括MS培养基、苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖和琼脂；所述苄氨基腺嘌呤的浓度为0.3-0.5mg/L，所述萘乙酸的浓度为0.05～0.1mg/L，所述蔗糖的浓度为25～30g/L，所述琼脂的浓度为5～7g/L；

所述继代培养包括：先暗培养7天，再在光照强度为1500～2000lx的条件下光照培养25～35天，光照时间为8～10h/d；所述继代培养的温度为23～27℃，所述继代培养的湿度为50～55％。

进一步地，步骤(4)中，所述生根培养基包括1/2MS培养基、苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、吲哚丁酸、蔗糖、琼脂和活性炭；所述苄氨基腺嘌呤的浓度为0.03mg/L，所述萘乙酸的浓度为0.05mg/L，所述吲哚丁酸的浓度为3.0～6.0mg/L，所述蔗糖的浓度为25～30g/L，所述琼脂的浓度为4～6g/L，所述活性炭的浓度为0.2g/L；

所述生根培养包括：先暗培养15天，再在光照强度为1500～2000lx的条件下光照培养30～45天，光照时间为8～10h/d；所述生根培养的温度为23～27℃，所述生根培养的湿度为50～55％。

进一步地，所述诱导培养基、继代培养基和生根培养基的pH值为5.8～6.2。

进一步地，步骤(5)中，所述炼苗包括：将所述粉防己生根苗在营养杯中进行培养10～15天，所述培养的温度为25～30℃，所述培养的湿度为75～90％。

进一步地，所述营养杯中的基质组分按质量百分比包括：酒精渣20～30％，蛭石35～45％，珍珠岩20～30％，鸡粪15～20％。

与现有技术相比，本发明的一种粉防己种苗的组培方法的有益效果是：

(1)本发明通过诱导培养、继代培养和生根培养几个阶段的培养的组织培养方法及各组织培养阶段选择适宜的培养基，有效缩短粉防己育苗时间，提高粉防己种苗质量，在短时间内获得大量优质粉防己种苗，且该方法有效解决了粉防己繁育对块根需求量大、种子育苗发芽率低的问题。

为使本发明的上述目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，作详细说明如下。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面结合实施例的方式对本发明的技术方案做详细说明，在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。

但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。

如本文所用之术语：

本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。

当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。

“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)。

一种粉防己种苗的组培方法，包括以下步骤：

(5)将所述粉防己生根苗进行炼苗。

优选地，步骤(1)中，在进行所述培养之前，先后进行清洗和灭菌，再切下茎段得到长度为1.5～2cm的带腋芽茎段。

上述选取粉防己外植体具体包括：选择生长健壮、无病虫害的粉防己，于3月初取新长出的茎段中选择带腋芽茎段，由先至后依次进行清洗和灭菌，再剪切至长度为1.5～2cm如1.5cm、1.6cm、1.7cm、1.8cm、1.9cm或2cm等。

优选地，所述清洗包括：用水清洗30～45min；所述灭菌包括：先用75％酒精浸泡20～40s如20s、25s、30s、35s或40s等，再用混有1～2滴土温80的0.1％升汞摇晃灭菌6～8min如6min、7min或8min，最后用无菌水清洗3～5次如3次、4次或5次。

优选地，步骤(1)中，所述培养采用暗培养，所述培养的温度为23～27℃如23℃、24℃、25℃、26℃或27℃，所述培养的湿度为50～55％如50％、51％、52％、53％、54％或55％，所述培养的时间为2～3天。

优选地，步骤(2)中，所述诱导培养基包括MS培养基、苄氨基腺嘌呤、吲哚丁酸、蔗糖和琼脂。

所述苄氨基腺嘌呤的浓度为0.3-0.5mg/L如0.3mg/L、0.35mg/L、0.4mg/L、0.45mg/L或0.5mg/L，所述吲哚丁酸的浓度为0.05～0.1mg/L如0.05mg/L、0.06mg/L、0.07mg/L、0.08mg/L、0.09mg/L或0.1mg/L，所述蔗糖的浓度为25～35g/L，所述琼脂的浓度为5～7g/L如5g/L、5.5g/L、6g/L、6.5g/L或7g/L。

所述诱导培养包括：先暗培养7天，再在光照强度为1500～2000lx如1500lx、1600lx、1700lx、1800lx、1900lx或2000lx的条件下进行光照培养20～30天如20天、23天、25天、28天或30天等，光照时间为8～10h/d如8h/d、8.5h/d、9h/d、9.5h/d或10h/d；所述诱导培养的温度为23～27℃如23℃、24℃、25℃、26℃或27℃，所述诱导培养的湿度为50～55％如50％、51％、52％、53％、54％或55％。

优选地，步骤(3)中，所述继代培养基包括MS培养基、苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖和琼脂。

所述苄氨基腺嘌呤的浓度为0.3-0.5mg/L如0.3mg/L、0.35mg/L、0.4mg/L、0.45mg/L或0.5mg/L，所述萘乙酸的浓度为0.05～0.1mg/L如0.05mg/L、0.06mg/L、0.07mg/L、0.08mg/L、0.09mg/L或0.1mg/L，所述蔗糖的浓度为25～30g/L，所述琼脂的浓度为5～7g/L如5g/L、5.5g/L、6g/L、6.5g/L或7g/L。

所述继代培养包括：先暗培养7天，再在光照强度为1500～2000lx如1500lx、1600lx、1700lx、1800lx、1900lx或2000lx的条件下光照培养25～35天如25天、28天、30天、32天或35天等，光照时间为8～10h/d如8h/d、8.5h/d、9h/d、9.5h/d或10h/d；所述继代培养的温度为23～27℃如23℃、24℃、25℃、26℃或27℃，所述继代培养的湿度为50～55％如50％、51％、52％、53％、54％或55％。

优选地，步骤(4)中，所述生根培养基包括1/2MS培养基、苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、吲哚丁酸、蔗糖、琼脂和活性炭。

所述苄氨基腺嘌呤的浓度为0.03mg/L，所述萘乙酸的浓度为0.05mg/L，所述吲哚丁酸的浓度为3.0～6.0mg/L如3.0mg/L、4.0mg/L、5.0mg/L或6.0mg/L，所述蔗糖的浓度为25～30g/L，所述琼脂的浓度为4～6g/L，所述活性炭的浓度为0.2g/L；

所述生根培养包括：先暗培养15天，再在光照强度为1500～2000lx如1500lx、1600lx、1700lx、1800lx、1900lx或2000lx的条件下光照培养30～45天如30天、35天、40天或45天等，光照时间为8～10h/d如8h/d、8.5h/d、9h/d、9.5h/d或10h/d；所述生根培养的温度为23～27℃如23℃、24℃、25℃、26℃或27℃，所述生根培养的湿度为50～55％如50％、51％、52％、53％、54％或55％。

上述，需要理解的是，MS培养基为组织的生长提供所需的碳源、氮源、水、无机物和生长因子。

所述MS培养基包括大量元素、微量元素和有机化合物，具体的配方如下：

大量元素的组分及其对应的浓度为：硝酸钾1900mg/L、硝酸铵1650mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、二水氯化钙440mg/L；

微量元素的组分及其对应的浓度为：碘化钾0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠浓度为37.3mg/L。

有机化合物的组分及其对应的浓度为：肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、甘氨酸2.0mg/L。

上述，可以理解的是，6-苄氨基腺嘌呤(6-Benzylaminopurine)，简称6-BA。可以理解的是，6-苄氨基腺嘌呤有味6-BA，是人工合成的细胞分裂素。6-BA具有抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质的分解，保绿防老；将氨基酸、生长素、无机盐等向处理部位调运等多种效能。6-苄氨基腺嘌呤作为一种植物生长调节剂，具有促进促进外植体形成丛生芽的作用。

可以理解的是，吲哚丁酸亦作为一种植物生长调节剂，具有促进促进外植体形成丛生芽的作用。

吲哚丁酸可以作为植物主根生长促进剂，常用于木本和草本植物的浸根移栽，硬枝杆插，能加速根的生长，提高植物生根的百分率，也可用于植物种子的浸种和拌种，可提高发芽率和成活率。高浓度吲哚丁酸也可促进部分组培苗的增殖。

可以理解的是，萘乙酸(1-Naphthaleneacetic acid)，简称NAA。萘乙酸是促进植物根系生长的植物生长调节剂，也是萘乙酰胺的中间体。萘乙酸具有促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根，增加坐果，防止落果，改变雌、雄花比率等。萘乙酸可经叶片、树枝的嫩表皮、种子进入到植物体内，随同营养流输导到作用部位。通常用于小麦、水稻、棉花、茶、桑、番茄、苹果、瓜类、马铃薯、林木等，是一种良好的植物生长刺激素。

可以理解的是，蔗糖为细胞的分裂、扩大、增至提供必要的能量。

可以理解的是，香蕉泥中含有大量的糖类，并且，在香蕉泥中含有植物激素，比如细胞分裂素，生长素，乙烯和赤霉素，可为植物组织细胞分裂分化提供能源。

可以理解的是，琼脂粉是从植物里提取出来的藻胶。琼脂因为有特殊的胶凝性质，尤其有显着的稳固性、滞度和滞后性，并且易吸收水分，有特殊的稳定效应；具有增量剂、增稠剂、乳化剂、胶凝剂、稳定剂、赋形剂、助悬剂、水分保持剂等功效。琼脂粉主要作用是固化培养基，起支撑作用。

优选地，所述诱导培养基、继代培养基和生根培养基的pH值为5.8～6.2如5.8、5.9、6.0、6.1或6.2。

优选地，步骤(5)中，所述炼苗包括：将所述粉防己生根苗转移至营养杯中培养10～15天如10天、11天、12天、13天、14天或15天；所述培养的温度为25～30℃如25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃，所述培养的湿度为75～90％如75％、78％、80％、85％、88％或90％。

优选地，所述营养杯中的基质组分按质量百分比包括：

酒精渣20～30％如20％、22％、25％、28％或30％等；

蛭石35～45％如35％、38％、40％、42％或45％等；

珍珠岩20～30％如20％、22％、25％、28％或30％等；

鸡粪15～20％如15％、16％、17％、18％、19％或20％等。

为了便于理解本发明，下面结合实施例来进一步说明本发明的技术方案。申请人声明，本发明通过下述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于下述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明应依赖下述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

实施例1

一种粉防己种苗的组培方法，包括以下步骤：

(1)外植体的选取：选择生长健壮、无病虫害的粉防己，于3月初取新长出的茎段中选择带腋芽茎段，先在自来水下冲洗30min；然后在超净工作台上灭菌，此灭菌为先用75％酒精浸泡20s，再用混有1～2滴土温80的0.1％升汞摇晃灭菌6min，最后用无菌水清洗3次；再用无菌刀片切下茎段，得到长1.5cm的带腋芽茎段。

(2)将上述长1.5cm的带腋芽茎段接种到MS培养基中，在温度为23℃和湿度为50％的条件下暗培养2天，然后剔除表面污染细菌、真菌或者失活的外植体，得到无菌外植体。

(3)诱导培养：将上述无菌外植体转接到诱导培养基中，在温度为23℃和湿度为50％的条件下，先暗培养7天，再在光照强度为1500lx的条件下进行光照培养20天，光照时间为8h/d；该诱导培养基为：MS基本培养基+0.3mg/L苄氨基腺嘌呤+0.1mg/L吲哚丁酸+25g/L蔗糖+7g/L琼脂，该诱导培养基的pH值为5.8。

(4)继代培养：将上述经过诱导培养的外植体转接到继代培养基中，在温度为23℃和湿度为50％的条件下，先暗培养7天，再在光照强度为1500lx的条件下进行光照培养25天，光照时间为8h/d，得到粉防己丛生芽；该继代培养基为：MS基本培养基+0.3mg/L苄氨基腺嘌呤+萘乙酸0.1mg/L+25g/L蔗糖+7g/L琼脂，该继代培养基的pH值为5.8。

(5)生根培养：将上述粉防己丛生芽转接到生根培养基中，在温度为23℃和湿度为50％的条件下，先暗培养15天，再在光照强度为1500lx的条件下进行光培养30天，光照时间为8h/d，得到粉防己生根苗；该生根培养基为：1/2MS基本培养基+0.03mg/L苄氨基腺嘌呤+0.05mg/L萘乙酸+3.0g/L吲哚丁酸+25g/L蔗糖+4g/L琼脂+0.2g/L活性炭，该生根培养基的pH值为5.8。

(6)炼苗：将所述粉防己生根苗转移至营养杯中培养10天，保持培养的温度为25℃，湿度为75％，得到粉防己种苗；该营养杯中的基质组分按质量百分比包括酒精渣20％，蛭石45％，珍珠岩20％，鸡粪15％。

(7)移栽：将上述经炼苗后的粉防己种苗移栽至大田。

实施例2

一种粉防己种苗的组培方法，包括以下步骤：

(1)外植体的选取：选择生长健壮、无病虫害的粉防己，于3月初取新长出的茎段中选择带腋芽茎段，先在自来水下冲洗40min；然后在超净工作台上灭菌，此灭菌为先用75％酒精浸泡30s，再用混有1～2滴土温80的0.1％升汞摇晃灭菌7min，最后用无菌水清洗4次；再用无菌刀片切下茎段，得到长1.8cm的带腋芽茎段。

(2)将上述长1.8cm的带腋芽茎段接种到MS培养基中，在温度为25℃和湿度为52％的条件下暗培养3天，然后剔除表面污染细菌、真菌或者失活的外植体，得到无菌外植体。

(3)诱导培养：将上述无菌外植体转接到诱导培养基中，在温度为25℃和湿度为52％的条件下，先暗培养7天，再在光照强度为1800lx的条件下进行光培养25天，光照时间为9h/d；该诱导培养基为：MS基本培养基+0.4mg/L苄氨基腺嘌呤+0.08mg/L吲哚丁酸+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，该诱导培养基的pH值为6.0。

(4)继代培养：将上述经过诱导培养的外植体转接到继代培养基中，在温度为25℃和湿度为52％的条件下，先暗培养7天，再在光照强度为1800lx的条件下进行光照培养30天，光照时间为9h/d，得到粉防己丛生芽；该继代培养基为：MS基本培养基+0.4mg/L苄氨基腺嘌呤+萘乙酸0.08mg/L+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，该继代培养基的pH值为6.0。

(5)生根培养：将上述粉防己丛生芽转接到生根培养基中，在温度为25℃和湿度为52％的条件下，先暗培养15天，再在光照强度为1800lx的条件下进行光照培养35天，光照时间为9h/d，得到粉防己生根苗；该生根培养基为：1/2MS基本培养基+0.03mg/L苄氨基腺嘌呤+0.05mg/L萘乙酸+5.0g/L吲哚丁酸+30g/L蔗糖+5g/L琼脂+0.2g/L活性炭，该生根培养基的pH值为5.8。

(6)炼苗：将所述粉防己生根苗转移至营养杯中培养12天，保持培养的温度为28℃，湿度为80％，得到粉防己种苗；该营养杯中的基质组分按质量百分比包括酒精渣25％，蛭石30％，珍珠岩25％，鸡粪20％。

(7)移栽：将上述经炼苗后的粉防己种苗移栽至大田。

实施例3

一种粉防己种苗的组培方法，包括以下步骤：

(1)外植体的选取：选择生长健壮、无病虫害的粉防己，于3月初取新长出的茎段中选择带腋芽茎段，先在自来水下冲洗45min；然后在超净工作台上灭菌，此灭菌为先用75％酒精浸泡40s，再用混有1～2滴土温80的0.1％升汞摇晃灭菌8min，最后用无菌水清洗5次；再用无菌刀片切下茎段，得到长2cm的带腋芽茎段。

(2)将上述长1.5cm的带腋芽茎段接种到MS培养基中，在温度为27℃和湿度为55％的条件下暗培养3天，然后剔除表面污染细菌、真菌或者失活的外植体，得到无菌外植体。

(3)诱导培养：将上述无菌外植体转接到诱导培养基中，在温度为27℃和湿度为55％的条件下，先暗培养7天，再在光照强度为2000lx的条件下进行光照培养30天，光照时间为10h/d；该诱导培养基为：MS基本培养基+0.5mg/L苄氨基腺嘌呤+0.05mg/L吲哚丁酸+35g/L蔗糖+5g/L琼脂，该诱导培养基的pH值为6.2。

(4)继代培养：将上述经过诱导培养的外植体转接到继代培养基中，在温度为27℃和湿度为55％的条件下，先暗培养7天，再在光照强度为2000lx的条件下进行光照培养35天，光照时间为10h/d，得到粉防己丛生芽；该继代培养基为：MS基本培养基+0.5mg/L苄氨基腺嘌呤+0.05mg/L萘乙酸+28g/L蔗糖+5g/L琼脂，该继代培养基的pH值为6.2。

(5)生根培养：将上述粉防己丛生芽转接到生根培养基中，在温度为27℃和湿度为55％的条件下，先暗培养15天，再在光照强度为2000lx的条件下进行光照培养45天，光照时间为10h/d，得到粉防己生根苗；该生根培养基为：1/2MS基本培养基+0.03mg/L苄氨基腺嘌呤+0.05mg/L萘乙酸+6.0g/L吲哚丁酸+28g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.2g/L活性炭，该生根培养基的pH值为6.2。

(6)炼苗：将所述粉防己生根苗转移至营养杯中培养15天，保持培养的温度为30℃，湿度为90％，得到粉防己种苗；该营养杯中的基质组分按质量百分比包括酒精渣30％，蛭石35％，珍珠岩20％，鸡粪15％。

(7)移栽：将上述经炼苗后的粉防己种苗移栽至大田。

对实施例1～3的外植体灭菌污染率、从生芽出芽率、继代培养增殖系数、生根率和炼苗成活率进行相关的测试，结果如下表1所示。

表1

上述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明配方及制备工艺可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种粉防己种苗的组培方法，其特征在于：包括以下步骤：

(5)将所述粉防己生根苗进行炼苗。

2.根据权利要求1所述的粉防己种苗的组培方法，其特征在于：步骤(1)中，在进行所述培养之前，先后进行清洗和灭菌，再切下茎段得到长度为1.5～2cm的带腋芽茎段。

3.根据权利要求2所述的粉防己种苗的组培方法，其特征在于：所述清洗包括：用水清洗30～45min；所述灭菌包括：先用75％酒精浸泡20～40s，再用混有1～2滴土温80的0.1％升汞摇晃灭菌6～8min，最后用无菌水清洗3～5次。

4.根据权利要求1所述的粉防己种苗的组培方法，其特征在于：步骤(1)中，所述培养采用暗培养，所述培养的温度为23～27℃，所述培养的湿度为50～55％，所述培养的时间为2～3天。

5.根据权利要求1所述的粉防己种苗的组培方法，其特征在于：步骤(2)中，所述诱导培养基包括MS培养基、苄氨基腺嘌呤、吲哚丁酸、蔗糖和琼脂；所述苄氨基腺嘌呤的浓度为0.3～0.5mg/L，所述吲哚丁酸的浓度为0.05～0.1mg/L，所述蔗糖的浓度为25～35g/L，所述琼脂的浓度为5～7g/L；

6.根据权利要求1所述的粉防己种苗的组培方法，其特征在于：步骤(3)中，所述继代培养基包括MS培养基、苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖和琼脂；所述苄氨基腺嘌呤的浓度为0.3-0.5mg/L，所述萘乙酸的浓度为0.05～0.1mg/L，所述蔗糖的浓度为25～30g/L，所述琼脂的浓度为5～7g/L；

7.根据权利要求1所述的粉防己种苗的组培方法，其特征在于：步骤(4)中，所述生根培养基包括1/2MS培养基、苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、吲哚丁酸、蔗糖、琼脂和活性炭；所述苄氨基腺嘌呤的浓度为0.03mg/L，所述萘乙酸的浓度为0.05mg/L，所述吲哚丁酸的浓度为3.0～6.0mg/L，所述蔗糖的浓度为25～30g/L，所述琼脂的浓度为4～6g/L，所述活性炭的浓度为0.2g/L；

8.根据权利要求1所述的粉防己种苗的组培方法，其特征在于：所述诱导培养基、继代培养基和生根培养基的pH值为5.8～6.2。

9.根据权利要求1所述的粉防己种苗的组培方法，其特征在于：步骤(5)中，所述炼苗包括：将所述粉防己生根苗在营养杯中进行培养10～15天，所述培养的温度为25～30℃，所述培养的湿度为75～90％。

10.根据权利要求9所述的粉防己种苗的组培方法，其特征在于：所述营养杯中的基质组分按质量百分比包括：酒精渣20～30％，蛭石35～45％，珍珠岩20～30％，鸡粪15～20％。