KR101064947B1

KR101064947B1 - 새우난초 엽절편으로부터 재분화된 식물체의 대량생산방법

Info

Publication number: KR101064947B1
Application number: KR1020090120924A
Authority: KR
Inventors: 배기화; 최용의; 윤필용
Original assignee: 재단법인 제주테크노파크
Priority date: 2009-12-08
Filing date: 2009-12-08
Publication date: 2011-09-15
Also published as: KR20110064365A

Abstract

본 발명은 새우난초 엽절편으로부터 재분화된 식물체의 대량생산방법에 관한 것이다.

본 발명의 새우난초 식물체의 대량생산방법은 어린새우 난초를 멸균하여 무균화하는 단계와, 상기 무균화된 어린새우 난초를 1/3 MS 배지위에 치상하여 기내배양하는 단계와, 배양된 어린새우 난초의 잎을 절단하는 단계와, 생성된 어린새우 난초의 잎절편을 슈크로스, 활성탄, 인돌뷰티르산, 나프탈렌아세트산이 첨가된 1/2 MS 배지위에 치상하여 부정아를 유도하는 단계, 상기 유도된 부정아를 슈크로스와 지베렐릭산이 포함된 1/2MS 배지에 치상하여 다신초를 유도한 후 증식하는 단계와, 상기 증식된 다신초를 슈크로스와 인돌뷰티르산 또는 나프탈렌아세트산 중 선택된 1종이 첨가된 1/2MS 배지에 치상하여 유묘를 생산하는 단계와, 상기 생산된 유묘를 토양에 이식하고, 순화한 후, 온실에 옮겨 생장시켜 새우난초 식물체를 대량생산하는 단계를 포함하여 구성된다.

본 발명에 의해, 어린새우난초의 잎절편으로부터 다신초를 형성하며, 이 다신초를 이용하여 재분화된 새우난초 식물체를 대량 생산하는 방법이 제공된다.

새우난초, 재분화, 식물체, 다신초

Description

새우난초 엽절편으로부터 재분화된 식물체의 대량생산방법{THE MASS PRODUCING METHOD OF REGENERATED PLANT FROM THE LEAF SEGMENT OF CALANTHE DISCOLOR}

본 발명은 새우난초 엽절편으로부터 재분화된 식물체의 대량생산방법에 관한 것으로써, 특히 새우난초의 잎절편으로부터 생성된 다신초를 이용하여 재분화된 새우난초 식물체를 대량생산하는 방법에 관한 것이다.

새우난초속은 한국, 일본, 대만, 호주 등의 열대, 아열대 및 온대지역에 약 180 여종이 자생하고 있다.

우리나라의 자생지는 제주도와 남부도서 일부지역으로 알려져 있었지만 지구온난화의 영향으로 중부 이북지역도 자생지로 보고되고 있다.

새우난초(Calanthe discolor)는 난과 새우난초속의 다년생 초본으로 잎이 지고 난 위구경의 모양이 새우의 등처럼 골이 지고 굽었다하여 새우난초라 명명되어졌고, 속명에서 알 수 있듯이 아름다운 꽃"calos(아름답다)+anthes(꽃)"을 피우고, 꽃의 색 또한 개체마다 다른"dis(다른)+color(색)" 특징을 보여 정원 또는 화분에 식재하여 감상하거나 절화 등의 원예용으로 이용가치가 매우 높은 식물이다.

지금까지 보고된 우리나라의 새우난초의 종류는 새우난초(Calanthe discolor Lindl.), 금새우난초(C. discolor for. sieboldii (Decne.) Ohwi), 여름새우난초(C. reflexa Maxim), 왕새우난초(C. bicolor), 및 섬새우난초(C. coreana Nakai) 등이 제주도, 울릉도, 안면도, 추자도 등에 자생하고 있다.

그러나 최근 새우난초는 다른 자생식물과 같이 무분별한 채취로 인하여 자생지의 훼손이 심각하게 진행되고 있다.

이에 산림청에서 보존가치를 인정하여 금새우난초(60위), 새우난초(70위), 여름새우난초(149위)를 산림청 지정 멸종위기종으로 등재하여 보존 및 증식방법을 연구하고 있는 상태이다.

새우난초는 자연상태에서 주로 줄기 기저부에서 유도되는 신초에 의해 증식하고 있으나 증식효율이 낮을 뿐만 아니라, 인간과 동물에 의한 자생지 훼손으로 개체수가 점점 감소하고 있다.

이들 새우난초의 자생지 복원 및 원예상품화 노력은 수년전부터 이루어져 왔는데 이는 새우난초와 금새우난초의 종간교배에 의한 1대잡종 종자의 기내무균 발아에 관한 연구, 새우난초와 해오라비난초의 종자발아와 유묘생장에 미치는 배지의 영향 등의 종자발아에 관한 연구들과 액아배양을 통한 다신초유도 및 구경배양을 통한 대량증식 시스템확립 등이 있다.

전, 후자 모두 배양에 따른 증식 및 자생지외 보전이라는 공통점은 있지만 새우난초의 우량 형질전환시스템을 통한 원예종으로의 개량에는 모본과 유전적으로 특성이 동일한 우량개체를 대량으로 증식시킬 수 있는 생장점 배양 등의 개발이 필 수적으로 요구되고 있고, 형질전환을 통한 새우난초의 우수한 품종의 개발에는 배배양을 통한 개체의 확보보다는 조직배양을 통한 식물체 재분화 시스템의 확보가 무엇보다 중요하다.

이에, 본 발명은 상기와 같은 문제를 해결하기 위하여, 어린새우난초의 잎절편으로부터 다신초를 형성하되, 다신초 형성에 영향을 미치는 배양재료, 배지조건, 옥신의 종류등의 배양조건을 확립하며, 이 다신초를 이용하기 위한 재분화 조건을 확립함으로써, 재분화된 새우난초 식물체를 대량 생산하는 방법을 제공하는데 목적이 있다.

본 발명의 새우난초 식물체의 대량생산방법은 어린새우 난초를 멸균하여 무균화하는 단계와, 상기 무균화된 어린새우 난초를 1/3 MS 배지위에 치상하여 기내배양하는 단계와, 배양된 어린새우 난초의 잎을 절단하는 단계와, 생성된 어린새우 난초의 잎절편을 슈크로스(Sucrose), 활성탄(Activated charcoal), 인돌뷰티르산(Indole-3-butyric acid), 나프탈렌아세트산(Naphthalene acetic acid)이 첨가된 1/2 MS 배지위에 치상하여 부정아를 유도하는 단계, 상기 유도된 부정아를 슈크로스와 지베렐릭산(GA₃)이 포함된 1/2MS 배지에 치상하여 다신초를 유도한 후, 증식하는 단계와, 상기 증식된 다신초를 슈크로스와 인돌뷰티르산 또는 나프탈렌아세트산 중 선택된 1종이 첨가된 1/2MS 배지에 치상하여 유묘를 생산하는 단계와, 상기 생산된 유묘를 토양에 이식하고, 순화한 후, 온실에 옮겨 생장시켜 새우난초 식물체를 대량생산하는 단계를 포함하여 구성된다.

또한, 상기 부정아를 유도하는 단계에서는 슈크로스가 20 g/L, 활성탄이 0.2 g/L , 인돌뷰티르산이 3.0 mg/L, 나프탈렌아세트산이 1.0 mg/L이 첨가된 1/2 MS배지를 사용하는 것이 특징이다.

또한, 상기 다신초를 유도한 후, 증식하는 단계에서 슈크로스가 30 g/L, 지베렐릭산(GA₃)이 1.0 ~ 5.0 mg/L 가 첨가된 1/2 MS배지를 사용하는 것이 특징이다.

또한, 상기 유묘를 생산하는 단계에서 슈크로스가 30 g/L, 인돌뷰티르산 또는 나프탈렌아세트산이 0.1 ~ 3.0 mg/L가 첨가된 1/2MS 배지를 사용하는 것이 특징이다.

또한, 상기 새우난초 식물체를 대량생산 단계에서 모래 또는 펄라이트 중 선택된 1종에 원예용 상토를 1:1로 배합한 토양을 사용하는 것이 특징이다.

본 발명에 의해, 어린새우난초의 잎절편으로부터 형성된 다신초를 이용하여 재분화시킴으로써 새우난초의 효과적인 형질전환 시스템의 확립에 기초자료로 활용될 식물체를 대량 생산하는 방법이 제공된다.

본 발명은 새우난초 엽절편으로부터 재분화된 식물체의 대량생산방법에 관한 것으로써, 새우난초의 잎절편으로부터 기내 다신초 유도를 통한 재분화조건의 확립과 이를 통한 토양순화를 목적으로 수행되었다.

우선, 어린 새우난초로부터 잎, 구경, 뿌리를 달리하여 부정아을 유도한 결 과, 잎 부위는 구경이나 뿌리보다 양호한 부정아의 유도율을 보였다.

또한, 부정아 유도시 3.0 mg/L의 IBA와 1.0 mg/L의 NAA가 첨가된 배지에서 가장 높은 부정아 유도율을 보였다.

이렇게 유도된 부정아을 이용하여 GA₃의 농도에 따른 다신초 증식률을 조사한 결과, GA₃가 함유되지 않은 배지에서는 다신초가 유도되지 않았으나, GA₃가 함유된 배지에서는 다신초가 유도되었으며, 특히 3.0 mg/L의 GA₃가 포함된 배지에서 다신초 증식효과가 가장 높게 나타남을 보였다.

그 후, 상기와 같이 증식된 다신초의 최적의 발근조건을 확인하여 유묘를 생산하기 위해, IBA와 NAA의 농도를 달리하여 실험한 결과, 3.0 mg/L의 NAA가 첨가된 배지에서 가장 높은 발근수와 발근길이를 보임을 확인하였다.

이렇게 발근이 되어 모본과 유사하게 배양된 새우난초의 유묘를 기외에서 성장시킬 시 가장 적합한 상토를 알아내고자, 여러종류의 상토에서 나타나는 유묘의 신장길이, 줄기직경, 뿌리길이, 생존률을 조사한 결과, 모래 또는 펄라이트중 선택된 1종에 원예용 상토를 1:1로 혼용하여 제조된 혼용상토에서 가장 양호한 결과를 보임을 확인하였다.

이상, 상기와 같은 결과로 인해 본 발명은 향후 새우난초의 형질전환을 통한 품종개량이나 유용한 유전자를 통한 형질전환 식물체의 개발에 중요한 기초자료로 제공될 것으로 보여진다.

이하, 본 발명의 새우난초 엽절편으로부터 재분화된 식물체의 대량생산방법에 대하여 실시예를 통하여 보다 상세히 설명하나, 이들이 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.

<실시예 1> 새우난초 배양부위에 따른 부정아 유도

기내 조직배양을 통한 재분화 시스템의 확립은 초기 배양재료의 선택이 중요하다.

이에, 새우난초 역시 효과적인 재분화 시스템을 확립하기 위해 잎, 구경, 뿌리 부위 및 IBA와 NAA에 따른 부정아 유도율을 조사하였다.

1. 식물재료 및 배양조건

새우난초(Calanthe discolor Lindley)는 강원대학교 온실에서 생육하고 있는 개체를 사용하였다.

이른 봄에 올라오는 어린 새우난초를 잎, 구경, 뿌리로 나누어 흐르는 수돗물에 흙을 씻은 후 70% 에탄올에 1분, 1% 차아염소산나트륨용액에 잎, 구경은 15분, 뿌리는 30분간 침지한 후 멸균수로 5회 세척하였다.

멸균된 재료는 식물생장조절물질이 첨가되지 않은 1/3MS(Murashige and Skoog, 1962) 배지에 치상하여 무균 기내도입을 하였다.

실험에 사용한 모든 배지는 121℃, 1.5기압으로 20분간 고온·고압 멸균하여 페트리디쉬(petri dish)에 각각 30 mℓ씩 분주하여 실험에 사용하였다.

이때, 모든 데이터는 means ± 표준편차(SD, standard diviation)으로 표시하였다.

변인들의 집단간 차이를 알아보기 위해서 ANOVA를 실시하였고, 유의성이 있는 경우 Duncan's multiple range test로 사후검증을 하였다.

통계적 유의성은 P〈0.05로 설정하여 분석하였다.

2. 방법

상기 준비한 새우난초의 잎, 구경, 뿌리 부위를 각각 기내 무균도입한 후 3주간 계대배양을 하여 세균 및 곰팡이를 제거하였다.

그 후, 잎은 0.2 × 0.2 cm로 잘게 절단하여 잎절편을 형성하였고, 구경 부위는 0.2 cm두께로 횡절단하여 구경절편을 형성하였고, 뿌리는 근단을 포함하여 1 cm로 절단하여 뿌리절편을 형성하여 사용하였다.

부정아 유도배지는 1/2MS배지를 기본으로 슈크로스(sucrose) 20 g/L와 활성탄(activated charcoal) 0.2 g/L 을 첨가하고, 0, 1.0, 3.0, 및 5.0 mg/L의 인돌뷰티르산(IBA, Indole-3-butyric acid)와 0, 0.1, 0.5, 및 1.0 mg/L의 나프탈렌아세트산(NAA, Naphthalene acetic acid)을 혼용하여 배지를 제조하였다.

위에 제조된 배지위에 잎절편, 구경절편, 뿌리절편을 치상하여 6 주후 부정아 유도율을 조사하였다.

절편은 Petri dish당 10개씩, 총 30개씩 각각 치상하였고 22 ± 1℃, 1600 Lux, 16/8h의 광주기하에 배양하였다.

3. 결과

새우난초의 부정아 유도시 배양부위 및 식물생장조절제의 영향을 조사한 결과, 아래 표 1과 도 1에 나타내었다.

		부정아 유도율 requency of adventitious shoot induction(%)
인돌뷰티르산 IBA, mg/L	나프탈렌아세트산NAA, mg/L	잎(Leaf)	구경(Corn)	뿌리(Root)
0	0	0.0	0.0	0.0
1.0	0.1	22.2	6.7	0.0
	0.5	20.6	4.4	0.0
	1.0	16.7	5.1	0.0
3.0	0.1	15.6	7.4	0.0
	0.5	24.4	8.9	4.3
	1.0	45.6	12.2	5.1
5.0	0.1	25.6	9.7	5.7
	0.5	21.1	6.0	0.0
	1.0	31.1	5.1	0.0

상기 표 1에 나타난 바와 같이, 구경 및 뿌리 부위에서는 부정아 유도율이 저조했으며 잎 절편을 통한 부정아 유도율은 뿌리에 비해서는 10배 이상, 구경 절편에 비해서는 4 ~ 6배 높게 나타났다.

즉, 도 1A에 나타난 바와 같이, 뿌리의 경우 부정아 유도는 거의 일어나지 않았는데 뿌리 근단 부분이 노랗게 변하면서 부풀어 오르는 경향을 보였다.

구경 부위에서는 초록색의 부정아와 흰색의 부정아가 동시에 유도됨을 관찰 할 수 있었다(도 1B).

잎 절편에서는 초록색의 부정아가 절편 당 약 4 ~ 5개가 유도되었으며 유도됨과 동시에 신초의 분화가 빠르게 진행됨을 관찰할 수 있었다(도 1C).

또한, 잎 절편을 치상한 IBA와 NAA의 혼합배지 중에 특히 3.0 mg/L의 IBA와 1.0 mg/L의 NAA가 혼합된 배지에서 부정아 유도율이 45.6%로 현저히 높게 나타남을 확인하였다.

이와 같이 배지에 첨가하는 생장조절물질(IBA, NAA)의 종류와 농도에 따라 부정아가 유도됨으로써 신초분화 양상이 다르게 나타남을 알 수 있었으며, 신초의 분화 및 생장에는 세포의 생장과 분열을 촉진하는 옥신의 첨가가 필수적이며 사이토키닌을 혼합했을 때 신초분화를 촉진한다는 것을 알 수 있었다.

<실시예 2> GA₃의 농도에 따른 다신초유도 및 증식

다신초를 유도 및 증식상태를 확인하기 위해 상기 실시예 1과 같이 새우난초 잎절편으로부터 유도된 부정아를 지베렐릭산(GA₃)이 포함된 1/2MS 배지에 치상하여 6 주간 배양한 후 절편 당 유도된 다신초의 개수와 길이를 조사하였다.

1. 방법

잎 절편으로부터 유도된 부정아를 sucrose가 30 g/L 포함된 1/2MS배지에 0, 0.1, 0.5, 1.0, 3.0, and 5.0 mg/L의 GA₃가 단용처리된 배지위에 10개씩 각각 30개의 절편을 치상하였다.

배양 6주후에 유도된 다신초의 개수와 길이를 조사하였다.

배양은 22 ± 1℃, 1600 Lux, 16/8h의 광주기하에서 배양을 하였다.

2. 결과

새우난초의 다신초 유도 및 증식시 지베렐릭산(GA₃) 첨가량의 영향을 조사한 결과, 아래 표 2와 도 2에 나타내었다.

GA₃의 농도 (mg/L)	다신초 유도개수 No. of adventitious shoots/segment	다신초의 길이 Length of adventitious shoots (mm)
0	0.0±0.0^*d	0.0±0.0d
0.1	0.0±0.0d	0.0±0.0d
0.5	0.0±0.0d	0.0±0.0d
1.0	3.8±1.3bc	15.7±3.3bc
3.0	6.3±2.0a	36.0±6.7a
5.0	4.3±2.8b	22.3±4.7b

상기 표 2에 나타난 바와 같이, 1.0 mg/L의 GA₃가 포함된 배지부터 다신초의 증식을 관찰 할 수 있었으며, 1.0 mg/L 미만의 GA₃가 포함이 되었을 때는 유도된 부정아의 증식 및 신장을 이루어지지 않았다.

또한, 3.0 mg/L의 GA₃가 첨가된 배지는 다신초 증식이 평균 6.3개 shoot의 길이신장은 평균 36 mm로 가장 양호 하였으며 5.0 mg/L의 GA₃가 첨가된 배지에는 이보다 적은 4.3개와 22.3 mm의 수치를 나타내었다.

도 2에 나타난 바와 같이 GA₃가 1.0 mg/L이상 배지에 첨가되면 다신초의 신장이 이루어지는데, 특히 잎의 벌어지는 분화속도가 빠르며 줄기의 신장이 현저히 증가됨을 관찰 할 수 있었다.

신초로부터 다신초를 형성, 유지, 증식하는 과정에서 필요이상으로 사이토키닌에 장시간 노출될 경우 잎이 뒤틀리거나 오그라드는 현상을 비롯한 덩어리 현상을 보인다고 알려져 있다.

그러나, 본 발명에서는 GA₃를 처리한 배지에서 다신초 증식이 양호하게 나타났다.

특히 잎의 뒤틀림, 오그라듬, 덩어리짐 현상을 관찰 할 수 없었으며, 이는 GA₃의 첨가가 정상적인 개체의 증식에 효율적인 것이라는 것을 나타냄을 알 수 있다.

<실시예 3> 유묘 생산

상기 실시예 2와 같이 증식된 다신초를 이용하여 유묘를 생산할 시, 유묘의 효율적인 생장과 뿌리발달을 이루기 위해 발근에 적합한 배지를 조사하였다.

1. 방법

상기 실시예 2와 같이 증식된 다신초 중 각각의 초장이 5 ~ 8 cm로 증식된 다신초를 선택하여 모조직으로부터 분리하였다.

분리된 다신초는 1/2MS 배지에 30 g/L의 sucrose를 첨가하고 0, 0.1, 1.0, 및 3.0 mg/L의 IBA 또는 NAA를 단용처리한 배지위에 치상하였다.

실험에 사용한 개체는 5개체씩 3반복하였으며 6주후에 발달된 뿌리의 수와 길이를 각각 조사하였다.

2. 결과

1/2MS 배지에 IBA 또는 NAA를 단용처리하여 4주간 배양한 결과는 아래의 표 3과 도 3에 나타내었다.

옥신류(Auxins) mg/L		발근 형성개수 No. of rooting/segment	발근 길이 Length of rooting (mm)
IBA	NAA	발근 형성개수 No. of rooting/segment	발근 길이 Length of rooting (mm)
0.0	0.0	0.0±0.0^*bc	0.0±0.0^*de
0.1	0.0	1.0±0.0a	2.4±0.5d
1.0	0.0	1.0±0.0a	3.4±0.2c
3.0	0.0	1.0±0.0a	3.2±0.9c
0.0	0.1	1.0±0.0a	3.6±1.1b
0.0	1.0	1.0±0.0a	4.2±1.2a
0.0	3.0	1.0±0.0a	4.7±0.9a

상기 표 3에서 나타난 바와 같이, IBA 또는 NAA를 첨가한 1/2MS 배지에 뿌리를 포함하지 않는 새우난초의 유묘를 배양할 시 발근이 이루어짐을 확인하였다.

즉, 유도된 뿌리의 길이는 3.0 mg/L의 NAA가 첨가된 배지에서 4.7 cm로 가장 높게 나타났고, 옥신을 처리하지 않은 대조구에서는 발근이 이루어지지 않음을 확인하였다.

또한, 도 3에 나타난 바와 같이 본 발명에서 사용한 새우난초의 경우 초기(배양 4주) 발근율은 낮게 나타났으나(도 3A), 배지에 충분히 적응한 12주 후부터는 뿌리의 생육이 왕성한 것을 관찰할 수 있었다(도 3B).

<실시예 4> 본 발명의 새우난초 식물체의 대량생산

상기 실시예 1 내지 3에서 확인한 바와 같이, 기내에서 확립한 배양체계에 따라 발근이 이루어지고 생장 및 재분화되어 모체와 비슷한 형태로 생장한 유묘를 기외에서 생산할 시 효율적인 기외순화를 확인하고자 다양한 종류의 상토를 처리하여 생존률과 유묘신장, 줄기직경, 뿌리길이를 조사하였다.

1. 방법

상기 실시예 3에서 생산된 유묘 중 평균초장이 6~10 cm 내외, 근장 2.5 cm인 유묘를 사용하였다.

토양조성은 모래단용상토(Sand; 2 mm 채로 걸러진 모래), 모래와 원예용 상토(TKS)를 1:1로 배합한 ST혼용상토, 펄라이트 단용상토(Pearlite; 석재를 고온으로 구워 공극이 존재하며, 비중이 물보다 가벼운 돌), 펄라이트와 원예용 상토(TKS)를 1:1로 배합한 PT혼용상토, 원예용 단용상토(TKS; 질산염 2 % 이내, 아질산염 0.4 % 이내, 인산염 18 % 이내, 부엽토 30 %이내로 섞여 있는 토양)를 조성하고 관수에 의한 토양유실 및 수분증발을 막기 위해 난석을 덮어 주었다.

위 조성상에 4개체씩 3반복 처리하여 4주후에 신장률, 줄기직경, 뿌리길이, 생존률을 조사하였다.

유리온실내 생육환경은 차광 60%, 습도 50 ~ 70%로 조절하였다.

2. 결과

다양한 종류의 상토를 처리하여 생존률과 유묘의 신장길이, 줄기직경, 뿌리길이를 조사한 결과는 아래의 표 4와 도 4에 나타내었다.

상토종류	유묘의 신장길이 Plant height (cm)	줄기직경 Stem diameter (mm)	뿌리길이 Root length (cm)	생존율 Survival rate (%)
모래단용상토	3.6±1.1^*bc	5.3±0.4b	2.3±1.3d	66
ST혼용상토	6.6±1.6a	6.3±1.2a	6.3±2.3a	100
펄라이트단용상토	3.2±2.3ba	5.8±1.4b	3.6±1.1bc	68
PT혼용상토	8.6±2.6a	7.3±1.1a	7.6±2.1a	100
TKS단용상토	3.6±1.8b	4.9±0.9bc	4.6±1.9bc	59

상기 표 4와 도 4에 나타난 바와 같이, 기내에서 발근이 이루어진 상태에서 기외에 순화시킨 경우 배수가 비교적 잘되는 모래 단용상토, 펄라이트 단용상토, 원예용 단용상토(TKS)에서는 생존률이 60%정도로 감소됨을 확인하였으나, 모래와 원예용 상토(TKS)를 1:1로 배합한 ST혼용상토와 펄라이트와 원예용 상토(TKS)를 1:1로 배합한 PT혼용상토에서는 100% 생존률을 나타냄을 확인하였으며, 이에 본 발명인 새우난초 엽절편으로부터 재분화된 식물체를 대량생산할 수 있음을 확인하였다.

도 1은 새우난초 배양부위에 따른 부정아 유도 상태를 나타낸 도면.

A : 잎절편, B : 구경절편, C : 뿌리절편

도 2는 지베렐릭산(GA₃)이 포함된 배지에서 다신초 증식상태를 나타낸 도면.

도 3은 인돌뷰티르산 또는 나프탈렌아세트산이 포함된 배지에서 생산된 유묘상태를 나타낸 도면.

A: 배양 4주 후

C: 배양 12주 후

도 4는 펄라이트와 원예용 상토(TKS)를 1:1로 배합한 PT혼용상토에서 성장한 새우난초 식물체의 모습을 나타낸 도면.

Claims

어린새우 난초를 멸균하여 무균화하는 단계;

상기 무균화된 어린새우 난초를 1/3 MS 배지위에 치상하여 기내배양하는 단계;

배양된 어린새우 난초의 잎을 절단하는 단계;

생성된 어린새우 난초의 잎절편을 슈크로스(Sucrose), 활성탄(Activated charcoal), 인돌뷰티르산(Indole-3-butyric acid), 나프탈렌아세트산(Naphthalene acetic acid)이 첨가된 1/2 MS 배지위에 치상하여 부정아를 유도하는 단계;

상기 유도된 부정아를 슈크로스와 지베렐릭산(GA₃)이 포함된 1/2MS 배지에 치상하여 다신초를 유도 및 증식하는 단계;

상기 증식된 다신초를 슈크로스와 인돌뷰티르산 또는 나프탈렌아세트산 중 선택된 1종이 첨가된 1/2MS 배지에 치상하여 유묘를 생산하는 단계;

상기 생산된 유묘를 토양에 이식하고, 순화한 후, 온실에 옮겨 생장시켜 새우난초 식물체를 대량생산하는 단계;로 구성된,

새우난초 엽절편으로부터 재분화된 식물체의 대량생산방법.
제1항에 있어서,

상기 부정아를 유도하는 단계에서 슈크로스가 20 g/L, 활성탄이 0.2 g/L , 인돌뷰티르산이 3.0 mg/L, 나프탈렌아세트산이 1.0 mg/L이 첨가된 1/2 MS배지를 사용하는 것을 특징으로 하는,

어린 새우난초 엽절편으로부터 재분화된 새우난초 식물체의 대량생산방법.
제1항에 있어서,

상기 다신초를 유도한 후, 증식하는 단계에서 슈크로스가 30 g/L, 지베렐릭산(GA₃)이 1.0 ~ 5.0 mg/L 가 첨가된 1/2 MS배지를 사용하는 것을 특징으로 하는,

새우난초 엽절편으로부터 재분화된 식물체의 대량생산방법.
제1항에 있어서,

상기 유묘를 생산하는 단계에서 슈크로스가 30 g/L, 인돌뷰티르산 또는 나프탈렌아세트산이 0.1 ~ 3.0 mg/L가 첨가된 1/2MS 배지를 사용하는 것을 특징으로 하는,

새우난초 엽절편으로부터 재분화된 식물체의 대량생산방법.
제1항에 있어서,

상기 새우난초 식물체를 대량생산 단계에서 모래 또는 펄라이트 중 선택된 1종에 원예용 상토를 1:1로 배합한 토양을 사용하는 것을 특징으로 하는,

새우난초 엽절편으로부터 재분화된 식물체의 대량생산방법.