CN1139318C - 非洲菊工厂化试管快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种非洲菊大规模工厂化试管快繁方法，包括以非洲菊幼小花蕾为外植体，对其进行脱分化及再分化的诱导，利用组培技术得到的试管成苗，通过使用100%蛭石作为基质，过渡一个月，再经过三至四个月的过渡培养，就可得到5-6片叶，株高10-13厘米的成株，半年后开花，可达销售水平的商品苗。本方法成本低，简便易行，节约土地，周期短见效快，后代遗传性稳定不会出现性状分离，可四季生产，是一种适于工厂化开发生产非洲菊鲜切花及盆栽花的有效方法。
Description
技术领域
本发明涉及试管内快速繁殖非洲菊微型种苗的方法。
背景技术
非洲菊又名扶郎花，是一种极具观赏价值的花卉，切花园艺品种很多，有白、橙、红、黄、粉等多种颜色，四季常开，经检索国内外未见申报涉及非洲菊组培和工厂化育苗技术的专利。常规的繁殖方法有分株繁殖、播种繁殖，速度较慢不利于大面积生产，且播种繁殖易产生性状分离。虽然1999年6月的《植物生理学通讯》第35卷第3期“非洲菊的组织培养与快速繁殖”一文公开了非洲菊组培试管苗的繁殖过程和试管苗过渡培养过程，但由于缺少足够的工艺生产条件，小苗成活率、试管苗的生根率都难以保障，所以仍然不能满足工厂化大面积生产的要求。
发明内容
本发明目的在于针对现有技术中不能满足工厂化生产等上述缺陷，提供一种适于非洲菊快速繁殖的工厂化试管快繁方法，该方法具有繁殖速度快，适于大面积生产，性状稳定等特点。
本发明是这样实现的：它包括非洲菊组培试管苗的快繁过程和试管苗过渡培养过程。组培试管苗的快繁过程包括：
1)非洲菊外植体的采集：
于春秋两季选择萼片包裹未开放的花蕾，直径范围为0.1-2厘米，最适为0.3-1厘米，生长健壮且无病虫侵害的植株花蕾为外植体，流水冲洗。
2)外植体的消毒、接种：
A、外植体的消毒：用75％的酒精浸泡30秒～2分钟，然后用0.1％的新洁尔灭消毒5～15分钟，再用0.1％的升汞消毒3～10分钟，用无菌水冲洗4～5遍。
B、接种：培养基MS+BA0.2～10ppm+NAA0.1～5ppm上。
3)外植体的脱分化、再分化及试管苗的继代：
A、花蕾脱分化：接种在MS+BA10ppm+NAA0.1～5ppm培养基上，培养基最适为MS+BA10ppm+NAA0.2ppm，置于光下培养。一个月后，即产生愈伤组织。
B、愈伤组织再分化：愈伤组织接种在MS+BA0.2～10ppm+NAA0.1～5ppm培养基上，培养基最适为MS+BA10ppm+NAA0.2ppm，经过30～40天的培养，可转绿，产生半透明颗粒状生长点称之为球状体。
C、试管苗继代：出现球状体后立即将其转入MS+BA0.5～3ppm+NAA0.1～0.5ppm的生芽培养基上生成不定芽，当株高达1～3cm时可用上述培养基进行继代培养。
4)试管苗的生根：
将株高2～3厘米，具有3～4片叶的健壮试管苗从分化培养基移至1/2MS+NAA0.3～2ppm或1/2MS+IBA0.1～1ppm培养基中进行生根，加少量活性炭(每升培养基中加0.5～15克)可提高生根效率。大约15天后基部即可生出3～5条根，长度0.2～2cm。
上述试管苗过渡培养过程指：
1)无菌苗过渡：选择已生根的无菌苗，转移至100％蛭石基质中继续培养，第一周弱光照射，湿度60～90％，温度控制在15～28℃。
2)经上述过渡的试管苗暴露到外界环境中，加强光照，每周施一次全营养液。营养液各元素浓度为，N：224ppm、P：42ppm、K：315ppm、Ca：162ppm、Mg：50ppm、S：65ppm、Fe：3ppm、Mn：0.5ppm、B：0.5ppm、Cu：0.02ppm、Zn：0.05ppm、Mo：0.01ppm。经过3～4个月的培养，可长成具有5～6片叶，株高10～13厘米的健壮植株。过渡成活后的试管苗也可定植于草炭∶马粪∶珍珠岩＝3∶1∶1的营养土中，每周只需浇一次清水，半年施一次全营养液补肥。
本发明的优点和效果：
1)本发明提供了一整套非洲菊种苗生产的工艺流程，可大规模开发种苗生产，简便易行，方便实用。
2)采用组培快繁技术和无土栽培技术相结合，可以在温室内四季生产，节约土地。
3)繁殖速度快效率高一个月为一个周期，繁殖系数为3，是常规分株繁殖年产量的几万倍，单株组培苗成本仅0.2～0.3元，经济效益可观。
4)无性繁殖观赏花卉，可完全继承原种优良的遗传性状，避免杂交后代长出现的性状分离现象，安全可靠。
具体实施方式
以下为本发明的实施例：
一、组培试管苗的快繁过程：
1、外植体的采集：选择直径大小在0.3～1cm的非洲菊小花蕾(此时的花蕊有萼片包裹)作为培养材料，由于其叶片基生花朵位于叶片基部叶腋处离土较近，养护不精心时极易污染污物，不易消毒处理，采集前可加适当的袋罩保持花蕾的清洁。
2、材料清洁消毒处理：新采集的外植体流水冲洗污物，无菌消毒：用75％的医用酒精杀菌一分钟，再用0.1％的新洁尔灭消毒10分钟，然后用0.1％升汞继续消毒5分钟，无菌水冲洗4～5次，无菌滤纸吸干材料表面水分。
3、接种离体无菌培养脱分化：消毒接种用具，在洁净工作台上小心将非洲菊小花蕾外包裹的萼片剥除，露出内部花蕊并将其切分成0.2～0.3mm的小块接种于MS+BA10ppm+NAA0.5ppm的培养基上，一周就可启动花蕊胀大转绿，一个月后可见白色或乳白色半透明愈伤组织出现，并慢慢转绿。
4、愈伤组织再分化：转绿后的愈伤组织待发现有绿色半透明球状体出现时立即转入MS+BA2ppm+NAA0.2ppm使胚性愈伤分化出苗。
5、试管苗继代培养：成苗后的非洲菊株高2～3cm，可利用MS+BA1～3ppm+NAA0.1～0.5ppm继代培养以扩大基数，30天为一个周期，3倍增殖。
6、试管苗生根：株高2～3cm的健壮试管苗可进入生根培养，此时应使用1/2MS+NAA0.3～2ppm或1/2MS+IBA01～1ppm，十五天后，根长1cm以上可以过渡移栽。
二、试管苗过渡培养过程：
生根后的组培苗移栽前先打开瓶盖练苗一天，然后从培养瓶中取出，小心洗净根部培养基可在蛭石中过渡一个月，其中每周浇一次全营养液，三十天后可定植入土或上盆。基质比例草炭∶马粪∶珍珠岩＝3∶1∶1。非洲菊喜温暖、阳光充足、通风良好的环境，最适温20～25℃。
Claims (5)
1.非洲菊工厂化试管快繁方法，包括非洲菊组培试管苗的快繁过程和试管苗过渡培养过程，其特征在于：
所述的试管苗快繁过程包括：
1)非洲菊外植体的采集：
生长健壮且无病虫侵害的非洲菊，在春秋两季开花时选择由萼片包裹未开放的花蕾作为接种材料，花蕾的直径范围为0.1-2厘米，流水冲洗；
2)外植体的消毒、接种：
外植体的消毒：用75％的酒精浸泡30秒～2分钟，然后用0.1％的新洁尔灭消毒5～15分钟，再用0.1％的升汞消毒3～10分钟，用无菌水冲洗4～5遍；无菌条件下将萼片剥除露出花蕊，将小花蕊切成0.2～0.3厘米小块，接种于培养基上诱导愈伤；
3)外植体的脱分化、再分化及试管苗的继代：
A、花蕾脱分化：接种在MS+BA10ppm+NAA0.1～5ppm培养基上，培养基最适为MS+BA10ppm+NAA0.2ppm，置于光下培养；大约一个月后，即可产生愈伤组织；
B、愈伤组织再分化：愈伤组织接种在MS+BA0.2～10ppm+NAA0.1～2ppm培养基上经过30～40天的培养，可转绿，产生半透明颗粒状生长点称之为球状体；
C、试管苗继代：出现球状体后立即将其转入MS+BA
0.5～3ppm+NAA0.1～0.5ppm的生芽培养基上生成不定芽丛，当主芽高达1～3cm时，可将芽丛切分用上述培养基进行继代培养；
4)试管苗的生根：
将株高3～4厘米，具有3～4片叶的健壮试管苗从分化培养基移至1/2MS+NAA0.3～2ppm或1/2MS+IBA0.1～1ppm培养基中进行生根，加少量活性炭；10～15天后基部即可生出3～5条根，长度0.2～2cm；
所述过渡培养过程采用无土栽培方法，包括：
a)无菌苗过渡：选择已生根的无菌苗，转移至100％蛭石基质中继续培养，第一周弱光照射，湿度60～90％，温度控制在15～28℃；
b)经上述过渡的试管苗暴露到外界环境中，加强光照，保持湿润，每周施一次全营养液。
2.根据权利要求1所述的非洲菊工厂化试管快繁方法，其特征在于：所述的试管苗快繁过程中作为外植体采集的花蕾的直径最适为0.3～1cm。
3.根据权利要求1或2所述的非洲菊工厂化试管快繁方法，其特征在于所述的试管苗快繁过程中外植体的脱分化、再分化及试管苗的继代时，脱分化培养基最适浓度为MS+BA10ppm+NAA0.2ppm，愈伤组织接种的最佳培养基为MS+BA10ppm+NAA0.2ppm，生芽培养基最适为1/2MS+NAA0.5ppm。
4.根据权利要求1或2所述的非洲菊工厂化试管快繁方法，其特征在于所述过渡培养过程中，过渡成活后的试管苗也可定植于草炭∶马粪∶珍珠岩＝3∶1∶1的营养土中，每周只需浇一次清水，半年施一次全营养液补肥。
5.根据权利要求1或2所述的非洲菊工厂化试管快繁方法，其特征在于所述的过渡培养过程中，所施全营养液各元素浓度为：N：224ppm、P：42ppm、K：315ppm、Ca：162ppm、Mg：50ppm、S：65ppm、Fe：3ppm、Mn：0.5ppm、B：0.5ppm、Cu：0.02ppm、Zn：0.05ppm、Mo：0.01ppm。
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