CN1062599C - 糯香蕉组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及糯香蕉的植物组织培养方法，该方法分诱导，分生和生根三个阶段，在诱导和分生阶段使用了含维生素C、生物素和高浓度蔗糖的培养基。本发明提供的方法分化频率高，生长周期短，易于大规模生产。
Description
本发明涉及糯香蕉的植物组织培养方法。
泰国糯香蕉是香蕉品种中的珍品，风味独特，果实细腻甜香，不易腐烂，耐贮运；但传统的分蘖繁殖速度很慢，而且糯香蕉分蘖能力能比普通香蕉低，因此在国际市场上糯香蕉极少见到且价格昂贵。
采用组织培养技术繁殖植物可以得到很高繁殖速率，植物组织培养技术是利用植物细胞全能性(即每一个细胞都潜在着发育成一个新个体的能力)，采取植物体上的细胞团、分生组织或营养器官的微小部分，通过人工配制不同营养成分和激素调控，使这些组织细胞形成成千上万小植株并且保存了母体内全部优良遗传性状，这种方法可以在短时间内获得大量试管苗，可在车间内进行，因而称作工厂化生产。由于生产幼苗是在试管内进行并摆放在有光照条件下的恒温房间内，四季都可以进行，而且在极少的面积内进行大规模生产，因而不占用土地。如果利用组织培养技术成功地繁殖糯香蕉，开发生产糯香蕉对于我国人多地少的国情来说是一个很好的发展方向。
然而糯香蕉的组织培养比普通香蕉组织培养难度大很多，用普通香蕉的培养基培养时不分化，且诱导率极低。因此至今为止在国内外尚未见到利用组织培养技术成功地繁殖糯香蕉的报道。
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种可以快速、大规模繁殖糯香蕉的组织培养方法。
本发明提供的糯香蕉组织培养方法，包括以下步骤：
1，诱导：
将糯香蕉的分生组织(如侧芽，茎尖)，接种在诱导培养基上。该培养基含有MS常规基本培养基(Murashige ＆ Skoog培养基，以下简称MS)、6-苄基嘌呤(6-BA)0.5-10，最好2-5毫克/升、维生素C(Vc)0.5-10，最好1-2毫克/升、萘乙酸(NAA)0.1-5，最好0.5-1毫克/升、生物素1-10，最好1-2毫克/升以及蔗糖30-60，最好40-50克/升。培养数天后，待培养物膨大形成愈伤组织时，即开始下阶段。
2、分化：
将第1步所得培养物转移到分化培养基上，该培养基含有MS常规基本培养基、6-苄基嘌呤(6-BA)0.5-5，最好1-2毫克/升、维生素C(Vc)1-2毫克/升、生物素1-10，最好1-2毫克/升以及蔗糖30-60，最好40-50克/升。培养数天后，开始出现丛生香蕉苗，待小苗长到常规生根程序所需高度时，进入以下第三步。
3、生根：
将第2步所得小苗齐根取下，转移至常规生根培养基。
数天后，小苗基部开始出现白色短根，并很快长出完整的根系，之后数天，即可按常规方法移栽长成正常的香蕉植株。
本发明采用了两种不同于普通香蕉组织培养的培养基，即诱导培养基和分化培养基，普通香蕉组织培养使用的培养基中没有生物素，我们在每升培养基中加入了1-5mg生物素，普通组织培养使用的培养基中蔗糖浓度为30克，我们大大提高了培养基中的蔗糖的浓度，并针对培养细胞的褐化问题加入了维生素C，在激素的使用方面我们的诱导培养基比普通香蕉诱导培养基增加了细胞分裂素的含量2-3倍，生物素的使用可以使细胞处于活跃状态，Vc的使用可以防止细胞在培养过程中褐化，比较高的蔗糖浓度可为高频率分化提供更多的营养，并增加培养基对培养物的渗透压，从而使培养基的激素更好的作用于细胞内部，高含量激素可以使不易分化的分生组织早启动，从而达到早分化成苗的目的，但高含量激素不能长期使用，以免分生畸型苗，因而只用于初期的诱导，然后就转入正常的分化培养基，就可以获得较多的糯香蕉试管苗。
因此使用本发明的培养基有如下优点：启动早，出苗快，同步性好，分化频率高，生长周期较其它培养基短，而苗齐苗壮，生长良好，基本上无畸型苗。
采用本发明提供的方法在诱导阶段一般十五天左右就可开始出现分化，在分化阶段，十五天左右即可开始出现丛生动苗，在生根阶段约七天后，可见白色短根，再过约十五天，便可移栽了。而常规分蘖繁殖方法一般只能一年繁殖一次，一次繁殖3至10株，本发明方法可周年繁殖，一次可繁殖上千株。
故本发明的方法，不仅培养植株速度快、繁殖率高，而且易于操作和大规模生产。
下面将结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例
1、取材：取糯香蕉的地下块茎的侧芽，用水冲洗干净。
2、材料消毒方法：将取下的侧芽在75％酒精中浸泡30秒，放入0.1％升汞溶液中浸泡15-20分钟后，在超净工作台上用无菌水冲洗3-4次，后用滤纸吸干水分。
3、接种：在超净工作上，用常规无菌操作方法将洗干净的香蕉侧芽用解剖刀平均切成4份，每一份体积在3-5毫米3，使茎尖分生组织向上，平放在诱导培养基上。
该诱导培养基组成为：MS+6-BA5毫克/升+Vc 1毫克/升+NAA 0.5毫克/升+生物素2毫克/升+蔗糖40克/升。
4、分生：当分生组织接种在诱导培养基上，20天后就可以看到膨大的芽，然后将其转移至分化培养基，它的组成是
MS+6-BA2毫克/升+Vc 1毫克/升+生物素1毫克/升+蔗糖40克/升
6、生根：当分化的丛生状小苗长到3-4厘米时(见图1)，用剪刀齐根取下，插入生根培养基，该培养基组成为：MS+NAA0.3毫克/升+蔗糖30克/升+活性炭0.5克/升。
培养温度及光照条件：25±2℃；光照强度为：1500-2000勒克斯。
7、移栽：当试管小苗长到具有完整的根、茎、叶时，将其移栽于含有1/2蛭草炭土和1/2蛭石的基质中。
移栽方法：将试管口打开，在常温下敞开瓶口24小时，用长把镊子将小苗从试管中小心取出，用自来水冲洗干净。
将移栽基质放入花盆中，将小苗小心栽入盆中，浇透水后覆盖塑料薄膜24小时后打开塑料薄膜，换气2小时，以后每天延长打开塑料薄膜时间，直到完全不覆盖为止，请注意当地空气湿度和温度，适当延长或减少覆盖时间。移栽成活的小苗见图2。
Claims (3)
1，糯香蕉的植物组织培养方法，其特征在于由以下三个步骤组成：
(1)诱导：将糯香蕉的分生组织，接种在诱导培养基上，该培养基含有MS常规基本培养基、6-苄基嘌呤0.5-10毫克/升、维生素C 0.5-10毫克/升、萘乙酸0.1-5毫升/升、生物素1-10毫克/升以及蔗糖30-60克/升，培养数天，待培养物膨大形成愈伤组织时，即开始下阶段；
(2)分化：将第1步所得培养物转移到分化培养基上，该培养基含有MS常规基本培养基、6-苄基嘌呤0.5-5毫克/升、维生素C1-2毫克/升、生物素1-10毫克/升以及蔗糖30-60克/升，培养数天，开始出现丛生香蕉苗，待小苗长到常规生根程序所需高度时，进入以下第三步；
(3)生根：将第2步所得小苗齐根取下，转移至常规生根培养基中，数天后，小苗基部开始出现白色短根，并很快长出完整的根系，之后数天，即可移栽长成正常的香蕉植株。
2，按权利要求1所述的糯香蕉的植物组织培养方法，其特征在于所述的诱导培养基中6-苄基嘌呤含量为2-5毫克/升，维生素C含量为1-2毫克/升，萘乙酸含量为0.5-1毫克/升，生物素含量为1-2毫克/升，蔗糖含量为40-50克/升。
3，按权利要求1所述的糯香蕉的植物组织培养方法，其特征在于所述的分化培养基中6-苄基嘌呤含量为1-2毫克/升，生物素含量为1-2毫克/升，蔗糖含量为40-50克/升。
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