CN106942055A - 一种糠氨基嘌呤香蕉增殖培养基筛选方法 - Google Patents

一种糠氨基嘌呤香蕉增殖培养基筛选方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种糠氨基嘌呤香蕉增殖培养基筛选方法，其通过单一变量法对香蕉花药进行增殖培养，分析统计褐化率和实际增殖系数，在评价当中结合实际增殖系数和褐化率，计算出作为评价标注更加符合商业工厂化的生产。

Description

一种糠氨基嘌呤香蕉增殖培养基筛选方法
技术领域
本发明属于香蕉组织培养技术领域，尤其涉及一种糠氨基嘌呤香蕉增殖培养基筛选方法。
背景技术
香蕉（学名：Musa nana Lour.）芭蕉科芭蕉属植物，又指其果实。热带地区广泛栽培食用。香蕉味香、富含营养，终年可收获，在温带地区也很受重视。植株为大型草本，从根状茎发出，由叶鞘下部形成高3～6公尺(10～20尺)的假杆；叶长圆形至椭圆形，有的长达3～3.5公尺(10～11.5尺)，宽65公分(26寸)，10～20枚簇生茎顶。穗状花序下垂[1]，由假杆顶端抽出，花多数，淡黄色；果序弯垂，结果10～20串，约50～150个。植株结果后枯死，由根状茎长出的吸根继续繁殖，每一根株可活多年。原产亚洲东南部：中国台湾、海南、广东、广西等地区均有栽培。目前香蕉是一种广受欢迎的水果，也是部分地区的主要粮食，拥有极大市场需求量，对香蕉进行快速繁殖的研究具有一定的必要性，不仅能解决庞大的市场需求量，也能在一定程度上保存优良的香蕉品种，组织培养是香蕉快速繁殖的方法之一，选择合适的培养基是提高组织培养效率途径之一，然而目前的培养基筛选方法都是以科研为目的的筛选方法，不能商业工厂化生产的需求。
稀土元素是17种特殊的元素的统称，它的得名是因为瑞典科学家在提取稀土元素时应用了稀土化合物，所以得名稀土元素。然而稀土是历史遗留下来的名称，稀土是从18世纪末开始陆续发现，当时人们常把不溶于水的固体氧化物称为土，例如，将氧化铝称为“陶土”，氧化钙称为”碱土“等。稀土一般是以氧化物状态分离出来的，当时比较稀少，因而得名为稀土（Rare Earth，简称RE或R），然而经过大量的科学研究，在组织培养当中添加了稀土元素会大大地提高组织培养的质量。
铈是周期系第ΙΙΙ族副族镧系元素，一种稀土元素。原子序数58。稳定同位素：136、138、140、142。灰色金属，有展性。密度：正方晶体6.9，立方晶体6.7。熔点799℃，沸点3426℃。铈是一种银灰色的活泼金属，粉末在空气中易自燃，易溶于酸。铈的名称来源于小行星谷神星的英文名。铈在地壳中的含量约0.0046%，是稀土元素中丰度最高的。
发明内容
基于现有技术中香蕉的组培增殖培养基的筛选方法中偏向于科研，不适合商业工厂化生产的问题，本发明提供一种糠氨基嘌呤香蕉增殖培养基筛选方法，其通过单一变量法对香蕉花药进行增殖培养，分析统计褐化率和实际增殖系数，在评价当中结合实际增殖系数和褐化率，计算出作为评价标注更加符合商业工厂化的生产。
一种糠氨基嘌呤香蕉增殖培养基筛选方法，其包括以下步骤：
步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培诱导过程中添加稀土元素和糠氨基嘌呤的量并确定稀土元素和糠氨基嘌呤初步筛选范围；
步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的香蕉愈伤组织，将愈伤组织切割成0.5cm3大小的组织块；
步骤S30对照培养，使用单一变量法配制不同浓度稀土元素和糠氨基嘌呤添加量的培养基，分别接种相同量的香蕉愈伤组织，并进行常规增殖组织培养；
步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个稀土元素和糠氨基嘌呤浓度梯度中褐化的数量，并计算褐化率；
步骤S50生长量计算，分别将相同浓度梯度的每个平行实验组中的愈伤组织取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对愈伤组织进行称重，记录重量；
步骤S60计算评估因数，将愈伤组织培养有的重量除以培养前的重量，再减去褐化的重量，计算出实际增殖系数，将实际增殖系数减去褐化率得出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的稀土元素和糠氨基嘌呤浓度梯度；
步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的浓度梯度范围重复进行步骤S10-S60缩小筛选范围或者确定最适浓度；
步骤S80反向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适浓度搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基。
优选地，所述的步骤S30中配制不同浓度是设置5-15个浓度梯度。
优选地，所述的步骤S30中接种的培养基的数量为每个浓度梯度的培养基设置10-20组平行实验组。
优选地，所述的稀土元素是铈元素。
优选地，所述的步骤S70中重复的次数是2-3次。
优选地，所述的步骤S80中不同的基础培养基包括MS培养基、N6培养基、B5培养基、Nitsh培养基、White培养基和Miller培养基。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述。
步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培诱导过程中添加稀土元素和糠氨基嘌呤的量并确定稀土元素和糠氨基嘌呤初步筛选范围；
步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的香蕉愈伤组织，将愈伤组织切割成0.5cm3大小的组织块；
步骤S30对照培养，使用单一变量法配制不同浓度稀土元素和糠氨基嘌呤添加量的培养基，分别接种相同量的香蕉愈伤组织，并进行常规增殖组织培养；
步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个稀土元素和糠氨基嘌呤浓度梯度中褐化的数量，并计算褐化率；
步骤S50生长量计算，分别将相同浓度梯度的每个平行实验组中的愈伤组织取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对愈伤组织进行称重，记录重量；
步骤S60计算评估因数，将愈伤组织培养有的重量除以培养前的重量，再减去褐化的重量，计算出实际增殖系数，将实际增殖系数减去褐化率得出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的稀土元素和糠氨基嘌呤浓度梯度；
步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的浓度梯度范围重复进行步骤S10-S60缩小筛选范围或者确定最适浓度；
步骤S80反向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适浓度搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基。
作为优选实施例，所述的步骤S30中配制不同浓度是设置10个浓度梯度。
作为优选实施例，所述的步骤S30中接种的培养基的数量为每个浓度梯度的培养基设置10组平行实验组。
作为优选实施例，所述的步骤S70中重复的次数是2次。
作为优选实施例，所述的步骤S80中不同的基础培养基包括MS培养基、N6培养基、B5培养基、Nitsh培养基、White培养基和Miller培养基。
经过筛选出以MS培养基为基础培养基，糠氨基嘌呤的浓度为0.5mg/L、NAA（萘乙酸）的浓度为2.5 mg/L、活性炭的浓度为0.15 mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，维生素的浓度为0.3mg/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为7g/L，最适合香蕉花药工厂化增殖培养生产。
以上所述实施例仅表达了本发明的一种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (6)

1.一种糠氨基嘌呤香蕉增殖培养基筛选方法，其特征在于，其包括以下步骤：
步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种组培诱导过程中添加稀土元素和糠氨基嘌呤的量并确定稀土元素和糠氨基嘌呤初步筛选范围；
步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的香蕉愈伤组织，将愈伤组织切割成0.5cm3大小的组织块；
步骤S30对照培养，使用单一变量法配制不同浓度稀土元素和糠氨基嘌呤添加量的培养基，分别接种相同量的香蕉愈伤组织，并进行常规增殖组织培养；
步骤S40记录检测参数，培养20天后统计每个稀土元素和糠氨基嘌呤浓度梯度中褐化的数量，并计算褐化率；
步骤S50生长量计算，分别将相同浓度梯度的每个平行实验组中的愈伤组织取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对愈伤组织进行称重，记录重量；
步骤S60计算评估因数，将愈伤组织培养有的重量除以培养前的重量，再减去褐化的重量，计算出实际增殖系数，将实际增殖系数减去褐化率得出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的稀土元素和糠氨基嘌呤浓度梯度；
步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的浓度梯度范围重复进行步骤S10-S60缩小筛选范围或者确定最适浓度；
步骤S80反向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适浓度搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基。
2.根据权利要求1所述的一种糠氨基嘌呤香蕉增殖培养基筛选方法，其特征在于，所述的步骤S30中配制不同浓度是设置5-15个浓度梯度。
3.根据权利要求1所述的一种糠氨基嘌呤香蕉增殖培养基筛选方法，其特征在于，所述的步骤S30中接种的培养基的数量为每个浓度梯度的培养基设置10-20组平行实验组。
4.根据权利要求1所述的一种糠氨基嘌呤香蕉增殖培养基筛选方法，其特征在于，所述的稀土元素是铈元素。
5.根据权利要求1所述的一种糠氨基嘌呤香蕉增殖培养基筛选方法，其特征在于，所述的步骤S70中重复的次数是2-3次。
6.根据权利要求1所述的一种糠氨基嘌呤香蕉增殖培养基筛选方法，其特征在于，所述的步骤S80中不同的基础培养基包括MS培养基、N6培养基、B5培养基、Nitsh培养基、White培养基和Miller培养基。
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