CN104871975A

CN104871975A - 一种香蕉组培繁殖的方法

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Publication number: CN104871975A
Application number: CN201510277473.0A
Authority: CN
Inventors: 杨树东
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-05-27
Filing date: 2015-05-27
Publication date: 2015-09-02

Abstract

本发明公开了一种香蕉组培繁殖的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)外植体的选取、(2)外植体的消毒处理、(3)诱导愈伤组织培养、(4)分化培养、(5)壮苗培养、(6)生根培养、(7)炼苗与移栽。本发明提供了一种香蕉组培繁殖的方法，不仅能缩短生产培养单周期和生长周期、减少生产占用面积，而且能提高育苗成活率，从而减少投资资金，降低生产成本，提高工业化生产的利润。

Description

一种香蕉组培繁殖的方法

技术领域

本发明属于组织培养生产技术领域，本发明涉及一种香蕉组培繁殖的方法。

背景技术

香蕉(Musa balbisiana Colla)是我国南方的重要热带水果之一，同时也是许多地区的重要经济收入来源，并且许多农户依靠种植香蕉脱贫致富。大多数的栽培食用香蕉都是单性三倍体AAA，具有高度的不育特性，主要靠无性繁殖，生产上通常利用吸芽进行繁殖，种苗不足时，也可采用香蕉的地下茎切块来繁殖种苗，但是该方法长期使用会累积许多病毒，如：束顶病、花叶病等。造成严重的危害。另外，不良的香蕉种苗会导致生长不良，果品不佳，收获不统一等问题。香蕉组织培养技术能够在短时间内快速繁殖出大量规格统一的优质的无病虫害的健康种苗，并且，新品种的培育和引进也需要利用脱病毒和组培快繁技术加快名优品种的发展。香蕉组培技术是我国农业科研工作者在20世纪80年代后期研发推广，该技术的应用对我国香蕉产业的迅速发展起到了重大的推进作用，也使得种苗工厂化生产得以实现，在短时间内将优良品种大面积推广，达到大规模商品化香蕉生产。但是该产业经过20多年的应用，我们发现该技术存在不足，在生产应用中主要问题是：

1.生产培养单周期时间长，香蕉组培生产中一般单周期培养(即接种到新培养基到培养)时间为30天以上。

2.由于生产周期长，导致生产场地周转慢，占用大量培养架，从而导致厂房面积增加。

以上缺点是传统组培生产中普遍存在的问题，在中国南方的热带及亚热带地区，香蕉组培苗已经成为大宗种苗品种，每年都有超过上亿株的市场需求，但是由于生产成本在逐年的递增(人工费用，场地租金等)极大的阻了种苗工厂化产业的发展，因此开发一种新的香蕉组培繁殖的技术以克服原有培养方式的缺点，确保香蕉种苗产业的进一步发展。

发明内容

本发明针对上述存在的问题，本发明提供了一种香蕉组培繁殖的方法，不仅能缩短生产培养单周期和生长周期、减少生产占用面积，而且能提高育苗成活率，从而减少投资资金，降低生产成本，提高工业化生产的利润。

本发明的方案是通过这样实现的：

种香蕉组培繁殖的方法，包括如下步骤：

(1)外植体的选取

选取挂果2年以上，生长健壮，无病虫害的蕉头为外植体；

(2)外植体的消毒处理

将上述蕉头先用清水清洗，再使用70％的酒精进行喷洗消毒，然后在无菌超净台条件下，将蕉头进行剥片，每剥开一层苞片后使用70％的酒精进行一次喷洗消毒，当露出茎尖后停止剥片，使用灭菌后的刀切取1-2cm的生长点，放置于70％的酒精下浸泡5-10秒，再用0.2％升汞溶液消毒两次，每次5-10分钟，后用无菌水冲洗3-8次，将褐化部分切除，待用；

(3)诱导愈伤组织培养

将上述待用的外植体进行愈伤组织培养，

所述愈伤组织培养的培养基配方为：MS+NAA(萘乙酸)0.1～0.2mg/L+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.3～0.5mg/L+赤霉素0.1～0.3mg/L+5～8g/L琼脂+20～30g/L蔗糖，PH为5.0-5.5，在29～31℃下暗培养8～15天，而后转入27～30℃下进行8～13天的光培养，得到愈伤组织；

(4)分化培养

将愈伤组织转接到MS+IBA(吲哚乙酸)0.2～0.5mg/L+NAA(萘乙酸)0.1～0.3mg/L+2,4-D(生长素)0.3～0.5mg/L+10～15g/L琼脂+30～50g/L蔗糖的分化培养基上培养，PH为5.5-6.0，光照强度为2000-2500lx，培养8-15d，愈伤组织分化得到香蕉苗；

(5)壮苗培养

将香蕉苗转接至壮苗培养基上继续培养，所述壮苗培养基成分为IBA(吲哚乙酸)0.3～0.7mg/L+BA(分裂素)0.3～0.5mg/L+2,4-D(生长素)0.05～0.1mg/L+NAA(萘乙酸)0.3～0.5mg/L+10～15g/L琼脂+30～50g/L蔗糖，PH为5.0-5.5，光照强度为1500-1800lx，培养8-15d；

(6)生根培养

将壮苗培育后的香蕉苗转接至生根培养基上培养，所述生根培养基配方为IBA(吲哚乙酸)2～5mg/L++BA(分裂素)0.05～0.1mg/L+2,4-D(生长素)0.3～0.6mg/L+NAA(萘乙酸)2～5mg/L+0.1～0.2g/L活性炭+5～10g/L琼脂+20～30g/L蔗糖，光照强度为2500-4500lx，培养3-8d；

(7)炼苗与移栽

选取根系发达及健壮的香蕉幼苗，取出后洗净根部培养基，在砂床上驯化10后，即可作为移栽幼苗。

本发明中，作为进一步说明，所述沙床湿度为50～80％；沙床的温度控制在20℃～35℃。

本发明中，作为进一步说明，所述沙床用0.1～0.2％高锰酸钾进行消毒。

本发明的突出的实质性特点和显著进步是：

1、本发明针在愈伤组织培养期间添加赤霉素促进细胞分裂，缩短愈伤组织培养时间，在壮苗培育期间和生根培养期间适当调整分裂素和赤霉素的比例，达到各期间培养的目的，当在壮苗培养基中分裂素与生长素的比值高时，能促进苗生长，保证壮苗率；当在生根培养基中分裂素与生长素的比值调低时，能促进根的生长，达到组培苗生根的需求，在生根培养基中添加活性炭，有利于提高生根苗的质量，使生根苗生长健壮，根系长，有韧性，进一步提高移栽后的成活率；在生根培养期间采用光照强度增强的方法，经过实验发现，采用这种方法，相比现有技术，幼苗生长时间较长、叶片有失绿情况，经过驯化定植大田后，要比在低光强条件下的较绿较高的幼苗移栽成活率高(见表1、3)。

2、采用本发明的方法不仅能缩短生产培养单周期和生长周期，而且在工业化生产过程中能减少生产占用面积，提高育苗成活率，从而减少投资资金，降低生产成本，提高工业化生产的利润；在香蕉苗栽培生产领域中具有极大的推广价值。

具体实施方式

下面通过具体实施例进一步说明本发明，以使本发明的优点和特征更易于被理解，应该理解的是，本发明的实施例仅仅是用于本发明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

一种香蕉组培繁殖的方法，包括如下步骤：

(1)外植体的选取

选取挂果3年，生长健壮，无病虫害的蕉头为外植体；

(2)外植体的消毒处理

将上述蕉头先用清水清洗，再使用70％的酒精进行喷洗消毒，然后在无菌超净台条件下，将蕉头进行剥片，每剥开一层苞片后使用70％的酒精进行一次喷洗消毒，当露出茎尖后停止剥片，使用灭菌后的刀切取1cm的生长点，放置于70％的酒精下浸泡5秒，再用0.2％升汞溶液消毒两次，每次5分钟，后用无菌水冲洗3次，将褐化部分切除，待用；

(3)诱导愈伤组织培养

将上述待用的外植体进行愈伤组织培养，

所述愈伤组织培养的培养基配方为：MS+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.3mg/L+赤霉素0.1mg/L+5g/L琼脂+20g/L蔗糖，PH为5.0，在29℃下暗培养8天，而后转入27℃下进行8天的光培养，得到愈伤组织；

(4)分化培养

将愈伤组织转接到MS+IBA(吲哚乙酸)0.2mg/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+2,4-D(生长素)0.3mg/L+10g/L琼脂+30g/L蔗糖的分化培养基上培养，PH为5.5，光照强度为2000lx，培养8d，愈伤组织分化得到香蕉苗；

(5)壮苗培养

将香蕉苗转接至壮苗培养基上继续培养，所述壮苗培养基成分为IBA(吲哚乙酸)0.3mg/L+BA(分裂素)0.3mg/L+2,4-D(生长素)0.05mg/L+NAA(萘乙酸)0.3mg/L+10g/L琼脂+30g/L蔗糖，PH为5.0，光照强度为1500lx，培养8d；

(6)生根培养

将壮苗培育后的香蕉苗转接至生根培养基上培养，所述生根培养基配方为IBA(吲哚乙酸)2mg/L++BA(分裂素)0.05mg/L+2,4-D(生长素)0.3mg/L+NAA(萘乙酸)2mg/L+0.1g/L活性炭+5g/L琼脂+20g/L蔗糖，光照强度为2500lx，培养3d；

(7)炼苗与移栽

选取根系发达及健壮的香蕉幼苗，取出后洗净根部培养基，在湿度50％，温度为20℃，使用0.1％高锰酸钾进行消毒后的砂床上驯化10天后，即可作为移栽幼苗。

实施例2：

一种香蕉组培繁殖的方法，包括如下步骤：

(1)外植体的选取

选取挂果4年，生长健壮，无病虫害的蕉头为外植体；

(2)外植体的消毒处理

将上述蕉头先用清水清洗，再使用70％的酒精进行喷洗消毒，然后在无菌超净台条件下，将蕉头进行剥片，每剥开一层苞片后使用70％的酒精进行一次喷洗消毒，当露出茎尖后停止剥片，使用灭菌后的刀切取2cm的生长点，放置于70％的酒精下浸泡10秒，再用0.2％升汞溶液消毒两次，每次10分钟，后用无菌水冲洗8次，将褐化部分切除，待用；

(3)诱导愈伤组织培养

将上述待用的外植体进行愈伤组织培养，

所述愈伤组织培养的培养基配方为：MS+NAA(萘乙酸)0.2mg/L+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.5mg/L+赤霉素0.3mg/L+5～8g/L琼脂+30g/L蔗糖，PH为5.5，在31℃下暗培养15天，而后转入30℃下进行13天的光培养，得到愈伤组织；

(4)分化培养

将愈伤组织转接到MS+IBA(吲哚乙酸)0.5mg/L+NAA(萘乙酸)0.3mg/L+2,4-D(生长素)0.5mg/L+15g/L琼脂+50g/L蔗糖的分化培养基上培养，PH为6.0，光照强度为2500lx下培养15d，愈伤组织分化得到香蕉苗；

(5)壮苗培养

将香蕉苗转接至壮苗培养基上继续培养，所述壮苗培养基成分为IBA(吲哚乙酸)0.7mg/L+BA(分裂素)0.1mg/L+NAA(萘乙酸)0.5mg/L+15g/L琼脂+50g/L蔗糖，PH为5.5，光照强度为1800lx下培养15d；

(6)生根培养

将壮苗培育后的香蕉苗转接至生根培养基上培养，所述生根培养基配方为IBA(吲哚乙酸)5mg/L+NAA(萘乙酸)5mg/L+0.2g/L活性炭+10g/L琼脂+30g/L蔗糖，光照强度为4500lx，培养8d；

(7)炼苗与移栽

选取根系发达及健壮的香蕉幼苗，取出后洗净根部培养基，在湿度80％，温度为35℃，使用0.2％高锰酸钾进行消毒后的砂床上驯化后，即可作为移栽幼苗。

实施例3：

一种香蕉组培繁殖的方法，包括如下步骤：

(1)外植体的选取

选取挂果2年，生长健壮，无病虫害的蕉头为外植体；

(2)外植体的消毒处理

将上述蕉头先用清水清洗，再使用70％的酒精进行喷洗消毒，然后在无菌超净台条件下，将蕉头进行剥片，每剥开一层苞片后使用70％的酒精进行一次喷洗消毒，当露出茎尖后停止剥片，使用灭菌后的刀切取1.5cm的生长点，放置于70％的酒精下浸泡6秒，再用0.2％升汞溶液消毒两次，每次6分钟，后用无菌水冲洗4次，将褐化部分切除，待用；

(3)诱导愈伤组织培养

将上述待用的外植体进行愈伤组织培养，

所述愈伤组织培养的培养基配方为：MS+NAA(萘乙酸)0.15mg/L+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.4mg/L+赤霉素0.2mg/L+6g/L琼脂+25g/L蔗糖，PH为5.1，在30℃下暗培养10天，而后转入28℃下进行9天的光培养，得到愈伤组织；

(4)分化培养

将愈伤组织转接到MS+IBA(吲哚乙酸)0.3mg/L+NAA(萘乙酸)0.2mg/L+2,4-D(生长素)0.4mg/L+12g/L琼脂+40g/L蔗糖的分化培养基上培养，PH为5.6，光照强度为2250lx下培养9d，愈伤组织分化得到香蕉苗；

(5)壮苗培养

将香蕉苗转接至壮苗培养基上继续培养，所述壮苗培养基成分为IBA(吲哚乙酸)0.7mg/L+BA(分裂素)0.5mg/L+2,4-D(生长素)0.1mg/L+NAA(萘乙酸)0.5mg/L+15g/L琼脂+50g/L蔗糖，PH为5.5，光照强度为1800lx，培养15d；

(6)生根培养

将壮苗培育后的香蕉苗转接至生根培养基上培养，所述生根培养基配方为IBA(吲哚乙酸)5mg/L++BA(分裂素)0.1mg/L+2,4-D(生长素)0.6mg/L+NAA(萘乙酸)5mg/L+0.2g/L活性炭+10g/L琼脂+30g/L蔗糖，光照强度为4500lx，培养3-8d；

(7)炼苗与移栽

选取根系发达及健壮的香蕉幼苗，取出后洗净根部培养基，在湿度60％，温度为25℃，使用0.15％高锰酸钾进行消毒后的砂床上驯化10天后，即可作为移栽幼苗。

实施例4：

一种香蕉组培繁殖的方法，包括如下步骤：

(1)外植体的选取

选取挂果3年，生长健壮，无病虫害的蕉头为外植体；

(2)外植体的消毒处理

将上述蕉头先用清水清洗，再使用70％的酒精进行喷洗消毒，然后在无菌超净台条件下，将蕉头进行剥片，每剥开一层苞片后使用70％的酒精进行一次喷洗消毒，当露出茎尖后停止剥片，使用灭菌后的刀切取1.9cm的生长点，放置于70％的酒精下浸泡7秒，再用0.2％升汞溶液消毒两次，每次7分钟，后用无菌水冲洗5次，将褐化部分切除，待用；

(3)诱导愈伤组织培养

将上述待用的外植体进行愈伤组织培养，

所述愈伤组织培养的培养基配方为：MS+NAA(萘乙酸)0.17mg/L+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.45mg/L+赤霉素0.25mg/L+7g/L琼脂+26g/L蔗糖，PH为5.3，在29℃下暗培养10天，而后转入29℃下进行10天的光培养，得到愈伤组织；

(4)分化培养

将愈伤组织转接到MS+IBA(吲哚乙酸)0.35mg/L+NAA(萘乙酸)0.25mg/L+2,4-D(生长素)0.35mg/L+12g/L琼脂+38g/L蔗糖的分化培养基上培养，PH为5.8，光照强度为2450lx下培养12d，愈伤组织分化得到香蕉苗；

(5)壮苗培养

将香蕉苗转接至壮苗培养基上继续培养，所述壮苗培养基成分为IBA(吲哚乙酸)0.6mg/L+BA(分裂素)0.35mg/L+2,4-D(生长素)0.09mg/L+NAA(萘乙酸)0.35mg/L+14g/L琼脂+36g/L蔗糖，PH为5.0，光照强度为1750lx，培养13d；

(6)生根培养

将壮苗培育后的香蕉苗转接至生根培养基上培养，所述生根培养基配方为IBA(吲哚乙酸)4mg/L++BA(分裂素)0.08mg/L+2,4-D(生长素)0.5mg/L+NAA(萘乙酸)4mg/L+0.18g/L活性炭+7g/L琼脂+27g/L蔗糖，光照强度为3350lx，培养7d；

(7)炼苗与移栽

选取根系发达及健壮的香蕉幼苗，取出后洗净根部培养基，在湿度75％，温度为30℃，使用0.19％高锰酸钾进行消毒后的砂床上驯化后，即可作为移栽幼苗。

实施例5：

一种香蕉组培繁殖的方法，包括如下步骤：

(1)外植体的选取

选取挂果5年，生长健壮，无病虫害的蕉头为外植体；

(2)外植体的消毒处理

将上述蕉头先用清水清洗，再使用70％的酒精进行喷洗消毒，然后在无菌超净台条件下，将蕉头进行剥片，每剥开一层苞片后使用70％的酒精进行一次喷洗消毒，当露出茎尖后停止剥片，使用灭菌后的刀切取1.7cm的生长点，放置于70％的酒精下浸泡9秒，再用0.2％升汞溶液消毒两次，每次9分钟，后用无菌水冲洗7次，将褐化部分切除，待用；

(3)诱导愈伤组织培养

将上述待用的外植体进行愈伤组织培养，

所述愈伤组织培养的培养基配方为：MS+NAA(萘乙酸)0.1～0.2mg/L+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.48mg/L+赤霉素0.27mg/L+6.5g/L琼脂+27g/L蔗糖，PH为5.2，在29℃下暗培养14天，而后转入27℃下进行11天的光培养，得到愈伤组织；

(4)分化培养

将愈伤组织转接到MS+IBA(吲哚乙酸)0.45mg/L+NAA(萘乙酸)0.19mg/L+2,4-D(生长素)0.38mg/L+14g/L琼脂+45g/L蔗糖的分化培养基上培养，PH为5.8，光照强度为2400lx，培养14d，愈伤组织分化得到香蕉苗；

(5)壮苗培养

将香蕉苗转接至壮苗培养基上继续培养，所述壮苗培养基成分为IBA(吲哚乙酸)0.4mg/L+BA(分裂素)0.4mg/L+2,4-D(生长素)0.06mg/L+NAA(萘乙酸)0.4mg/L+13g/L琼脂+35g/L蔗糖，PH为5.1，光照强度为1700lx，培养10d；

(6)生根培养

将壮苗培育后的香蕉苗转接至生根培养基上培养，所述生根培养基配方为IBA(吲哚乙酸)3mg/L++BA(分裂素)0.06mg/L+2,4-D(生长素)0.4mg/L+NAA(萘乙酸)3mg/L+0.15g/L活性炭+6g/L琼脂+22g/L蔗糖，光照强度为3500lx，培养4d；

(7)炼苗与移栽

选取根系发达及健壮的香蕉幼苗，取出后洗净根部培养基，在湿度为68％，温度为32℃，使用0.16％高锰酸钾进行消毒后的砂床上驯化后，即可作为移栽幼苗。

将以上实施例1～5得到的移栽苗和市面购买的移栽苗(CK)，分别各选取50棵苗，20cm×20cm定植与大田后，在3、5、9、14、21天观察记录生长情况。

表1各实施例定植大田生长情况与成活率表

由上表可知，采用本发明方法繁殖后的香蕉苗在定植大田后的成活率均≥90％，与CK相比较提高百分之十个点。

实施例6：

在壮苗培养和生根培养时，本发明通过以下实验研究培养基配方的最佳组合，具体如下：

壮苗培养基配方1为BA(分裂素)0.3mg/L+2,4-D(生长素)0.05mg/L；生根培养基配方1为BA(分裂素)0.05mg/L+2,4-D(生长素)0.3mg/L，

壮苗培养基配方2为BA(分裂素)0.5mg/L+2,4-D(生长素)0.1mg/L；生根培养基配方2为BA(分裂素)0.1mg/L+2,4-D(生长素)0.6mg/L，

壮苗培养基配方3为BA(分裂素)0.4mg/L+2,4-D(生长素)0.08mg/L；生根培养基配方3为BA(分裂素)0.06mg/L+2,4-D(生长素)0.5mg/L，

壮苗培养基配方4为BA(分裂素)0.07mg/L+2,4-D(生长素)0.2mg/L；生根培养基配方4为BA(分裂素)0.3mg/L+2,4-D(生长素)0.05mg/L，

其中，壮苗培养基配方中均含有IBA(吲哚乙酸)0.3mg/L+NAA(萘乙酸)0.3mg/L+10g/L琼脂+30g/L蔗糖，调节PH为5.0，光照强度为1800lx，培养8d，

生根培养基配方中均含有IBA(吲哚乙酸)2mg/L++NAA(萘乙酸)2mg/L+0.1g/L活性炭+10g/L琼脂+30g/L蔗糖，调节光照强度为3000lx，培养8d。

取涨势相似的分化苗120棵，均分为4组，分别使用上述4个配方进行培养8d后，记录香蕉苗的长势情况。

表2组培苗的长势情况表

以上数据表明，配方1-3均采用本发明在壮苗培养基中分裂素与生长素的比值高，芽的生长速度大于根的生长速度，达到壮苗的作用；当在生根培养基中分裂素与生长素的比值低时，能促进根的生长，抑制芽的生长，达到生根的作用；配方4在壮苗期间设置分裂素与生长素比值低，不利于苗的生长，在生根期间采用分裂素与生长素比值高设计，也不利于根的生长，本发明通过试验选取分裂素与生长素比值的范围来调整组培苗在不同阶段所需激素的比例，有利于提高壮苗率、让组培苗顺势生长。

实施例7：

选取涨势相似的壮苗后的香蕉苗240棵，均分6个组，分别通过生根培养，培养期间使用相同的生根培养基，对组1～组6分别采用1500lx、2000lx、2500lx、3500lx、4500lx、5000lx的光照强度，培养8d，分别在1d、3d、5d、8d观察香蕉苗的芽颜色变化，再将生根培养后的香蕉苗经过炼苗和移栽后定植大田，在定植大田后的3d、5d、9d、14d分别记录香蕉苗的生长情况，具体数据如下：

表3不同光照强度对生根培养香蕉苗的影响、成活情况表

由上表可知，在生根培养的8天期间采用1500lx、2000lx光照强度香蕉苗的芽色变化范围不大，未失绿，相比之下采用2500lx、3500lx、4500lx光照强度的香蕉苗芽色变化范围较大，出现失绿的情况，当采用5000lx的处理光照强度，香蕉苗出现芽褐化现象；采用上述处理后的香蕉苗进行大田定植后，组1、组2的成活率分别为80％、82.5％，组3、组4、组5、成活率分别为90％、87.5％、90％，组6成活率为82.5％，因此，在生根培养期间采用2500lx-4500lx的光照强度对香蕉苗进行处理，叶片有失绿情况，经过驯化定植大田后，要比在低光强条件下的较绿的幼苗移栽成活率更高。

Claims

1.一种香蕉组培繁殖的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)外植体的选取

选取挂果2年以上，生长健壮，无病虫害的蕉头为外植体；

(2)外植体的消毒处理

(3)诱导愈伤组织培养

将上述待用的外植体进行愈伤组织培养，

(4)分化培养

(5)壮苗培养

(6)生根培养

(7)炼苗与移栽

2.根据权利要求书1所述香蕉组培繁殖的方法，其特征在于，所述沙床湿度为50～80％；沙床的温度控制在20℃～35℃。

3.根据权利要求书1所述香蕉组培繁殖的方法，其特征在于，所述沙床用0.1～0.2％高锰酸钾进行消毒。