CN114158480A - 一种粉蕉组培抗褐化的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种粉蕉组培抗褐化的方法，包括以下步骤：S1配置改良MS培养基，灭菌后冷却至45～50℃，再加入过氧化氢酶、L‑半胱氨酸、还原型谷胱甘肽(GSH)得到粉蕉组培培养基；S2粉蕉吸芽消毒处理；S3配置褐化抑制剂，再将消毒后吸芽切割得到芽头，将芽头经过褐化抑制剂处理后，取出晾干，接种到粉蕉组培培养基中培养。经过本方法处理后的粉蕉吸芽芽头没有出现褐化死亡的现象，可以进行下一步的继代培养，且本发明方法简单，成本较低，适合在工厂化生产中的应用。

Description

一种粉蕉组培抗褐化的方法
技术领域
本发明涉及工厂化生产香蕉组培苗领域，具体涉及一种粉蕉组培抗褐化的方法。
背景技术
在工厂化生产香蕉时，常面临外植体褐化问题。在目前实际应用中，常用的解决方法为在培养基中加入PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、抗坏血酸和活性炭，但对于一部分品种的香蕉，如一些品种的粉蕉使用上述方法效果甚微，甚至没有效果。本发明根据目前已有文献，进行试验，提供了一种新的处理方法，能解决对常用方法无效的香蕉品种的组培褐化问题。
发明内容
有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明提供一种能有效防止粉蕉外植体培养时褐化的方法。
为了实现上述的发明目的，本发明是通过如下技术方案实现的：
一种粉蕉组培抗褐化的方法，包括以下步骤：
S1配置改良MS培养基，灭菌后冷却至45～50℃，再加入过氧化氢酶、L-半胱氨酸、还原型谷胱甘肽得到粉蕉组培培养基；
S2粉蕉吸芽消毒处理；
S3配置褐化抑制剂，再将消毒后吸芽切割得到芽头，将芽头经过褐化抑制剂处理后，取出晾干，接种到粉蕉组培培养基中培养。
优选的，所述步骤S1中改良MS培养基为在MS培养基的基础上，不添加五水合硫酸铜和七水合硫酸亚铁，还含有1～2mg/L 6-BA(6-苄基嘌呤)、0.1～0.2mg/L NAA(萘乙酸)、5～6g/L琼脂、25～30g/L蔗糖。
6-苄基嘌呤，简称6-BA。
萘乙酸，简称NAA。
优选的，所述步骤S1中灭菌条件：压强为0.1～0.2MPa，温度为120～125℃，时间为15～30min。
所述的MS培养基为国际通用的培养基，其成分可参考书籍(谭文澄，戴策刚主编.观赏植物组织培养技术.北京：中国林业出版社，1991.)
优选的，所述步骤S1粉蕉组培培养基中过氧化氢酶浓度为0.1～0.2g/L、L-半胱氨酸浓度为0.1～0.5mmol/L、还原型谷胱甘肽浓度为100-200mg/L。
优选的，所述步骤S2中粉蕉吸芽消毒处理的具体步骤为：先剥去粉蕉吸芽的外层外皮，使用体积分数为75～80％乙醇水溶液消毒30～60s；再剥去内层外皮，切割上部分茎叶，留成长15～20cm、直径5～8cm的吸芽，将吸芽浸泡再15～25mg/L柠檬酸水溶液中；再使用40～100mg/L二氧化氯水溶液消毒3～5次，每次15～30min，得到消毒后的吸芽。
优选的，所述步骤S3中褐化抑制剂为曲酸水溶液和硫代硫酸钠水溶液。
进一步优选的，所述曲酸水溶液的浓度为0.5～2g/L。
进一步优选的，所述硫代硫酸钠水溶液的浓度为0.1～0.5g/L。
优选的，所述步骤S3中芽头的尺寸为长3～5cm，直径3～5cm。
优选的，所述步骤S3中芽头经过褐化抑制剂处理的具体步骤为：将芽头浸泡在曲酸水溶液中，振荡处理15～30min，取出晾干后再浸泡在硫代硫酸钠水溶液中，振荡处理15～30min。
优选的，所述步骤S3中培养条件为：温度28～30℃、避光培养。
与现有技术相比，本发明的有益效果：部分品种的香蕉的吸芽在工厂化生产中用常规方法处理，如PVP、抗坏血酸、活性炭处理后褐化率和死亡率仍未接近100％，在使用本发明的处理方法后，所有吸芽的褐化程度明显减轻，并可以继续生长，产生新的生长点。
附图说明
图1为芽头使用1g/L抗坏血酸水溶液处理后培养3d后的状态。
图2为芽头使用1g/L抗坏血酸水溶液处理后培养5d后的状态。
图3为芽头使用1g/L PVP水溶液处理后培养3d后的状态。
图4为芽头使用1g/L PVP水溶液处理后培养5d后的状态。
图5为芽头使用本发明的褐化抑制剂处理后培养3d后的状态。
图6为芽头使用本发明的褐化抑制剂处理后培养5d后的状态。
图7为芽头使用本发明的褐化抑制剂处理后培养18d后的状态。
图8为芽头使用本发明的褐化抑制剂处理后培养35d后的状态。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
粉蕉：购自于广东省高州的农家品种，口味香甜，果实可食用率高，在工厂化生产中易褐化。
实施例1
一种粉蕉组培抗褐化的方法，包括以下步骤：
S1配置1L改良MS培养基，在压强为0.1MPa，121℃灭菌后20min，冷却至45℃，再加入0.1g过氧化氢酶、0.2mmol L-半胱氨酸、150mg还原型谷胱甘肽得到粉蕉组培培养基；
S2先剥去粉蕉吸芽的外皮，使用体积分数为75％乙醇水溶液消毒30s；再剥去外皮，切割上部分茎叶，留成长15cm、直径5cm的吸芽，将吸芽浸泡再20mg/L柠檬酸水溶液中；再使用70mg/L二氧化氯水溶液消毒3次，每次30分钟，得到消毒后的吸芽；
S3配置1g/L曲酸水溶液和0.3g/L硫代硫酸钠水溶液并抽滤备用；再将消毒后吸芽切割得到长5cm，直径3cm芽头，将芽头浸泡在1g/L曲酸水溶液中，振荡处理20min，取出晾干后再浸泡在0.3g/L硫代硫酸钠水溶液中，振荡处理20min，取出晾干，接种到粉蕉组培培养基中在温度为28～30℃、避光培养。
所述改良MS培养基具体配方如表1所示：
表1改良MS培养基配方
Figure BDA0003431972800000041
实施例2
一种粉蕉组培抗褐化的方法，包括以下步骤：
S1配置1L改良MS培养基，在压强为0.1MPa，121℃灭菌后20min，冷却至45℃，再加入0.1g过氧化氢酶、0.2mmol L-半胱氨酸、150mg还原型谷胱甘肽得到粉蕉组培培养基；
S2先剥去粉蕉吸芽的外皮，使用体积分数为75％乙醇水溶液消毒30s；再剥去外皮，切割上部分茎叶，留成长15cm、直径5cm的吸芽，将吸芽浸泡再20mg/L柠檬酸水溶液中；再使用70mg/L二氧化氯水溶液消毒3次，每次30分钟，得到消毒后的吸芽；
S3配置1g/L抗坏血酸水溶液并抽滤备用；再将消毒后吸芽切割得到长5cm，直径3cm芽头，将芽头浸泡在1g/L抗坏血酸水溶液中，振荡处理20min，取出晾干，接种到粉蕉组培培养基中在温度为28～30℃、避光培养。
所述改良MS培养基具体配方如表1所示。
实施例3
一种粉蕉组培抗褐化的方法，包括以下步骤：
S1配置1L改良MS培养基，在压强为0.1MPa，121℃灭菌后20min，冷却至45℃，再加入0.1g过氧化氢酶、0.2mmol L-半胱氨酸、150mg还原型谷胱甘肽得到粉蕉组培培养基；
S2先剥去粉蕉吸芽的外皮，使用体积分数为75％乙醇水溶液消毒30s；再剥去外皮，切割上部分茎叶，留成长15cm、直径5cm的吸芽，将吸芽浸泡再20mg/L柠檬酸水溶液中；再使用70mg/L二氧化氯水溶液消毒3次，每次30分钟，得到消毒后的吸芽；
S3配置1g/L PVP水溶液并抽滤备用；再将消毒后吸芽切割得到长5cm，直径3cm芽头，将芽头浸泡在1g/L PVP水溶液中，振荡处理20min，取出晾干，接种到粉蕉组培培养基中在温度为28～30℃，避光培养。
所述改良MS培养基具体配方如表1所示。
测试例1
抗褐变测试：将上述实施例1～3培养相同时间观察其组织状态，结果如附图1～8所示。
从结果可以看出，使用抗坏血酸水溶液处理的芽头，3天变为黄褐色，5天全部褐化并死亡；使用PVP水溶液处理的芽头，3天变为黄褐色，2周内死亡；使用本发明褐化抑制剂处理的芽头，3天外层叶片正常生长炸开，18d、35d之后仍可以继续正常生长，可以进行下一步的继代培养。
综上所述，本发明提供的粉蕉组培抗褐化的方法能够有效防止粉蕉组培时出现褐化死亡的现象，解决了现有技术中使用PVP、抗坏血酸效果轻微甚至没有效果的问题，且方法简单，成本较低，适合在工厂化生产中的应用。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一种粉蕉组培抗褐化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1配置改良MS培养基，灭菌后冷却至45～50℃，再加入过氧化氢酶、L-半胱氨酸、还原型谷胱甘肽得到粉蕉组培培养基；
S2粉蕉吸芽消毒处理；
S3配置褐化抑制剂，再将消毒后吸芽切割得到芽头，将芽头经过褐化抑制剂处理后，取出晾干，接种到粉蕉组培培养基中培养。
2.如权利要求1所述的粉蕉组培抗褐化的方法，其特征在于：所述步骤S1中改良MS培养基为在MS培养基的基础上，不添加五水合硫酸铜和七水合硫酸亚铁，还含有1～2mg/L 6-苄基嘌呤、0.1～0.2mg/L萘乙酸、5～6g/L琼脂、25～30g/L蔗糖。
3.如权利要求1所述的粉蕉组培抗褐化的方法，其特征在于：所述步骤S1粉蕉组培培养基中过氧化氢酶浓度为0.1～0.2g/L、L-半胱氨酸浓度为0.1～0.5mmol/L、还原型谷胱甘肽浓度为100-200mg/L。
4.如权利要求1所述的粉蕉组培抗褐化的方法，其特征在于：所述步骤S2中粉蕉吸芽消毒处理的具体步骤为：先剥去粉蕉吸芽的外层外皮，使用体积分数75～80％乙醇水溶液消毒30～60s；再剥去内层外皮，切割上部分茎叶，留成长度为15～20cm、直径5～8cm的吸芽，将吸芽浸泡再15～25mg/L柠檬酸水溶液中；再使用40～100mg/L二氧化氯水溶液消毒3～5次，每次15～30min，得到消毒后的吸芽。
5.如权利要求1所述的粉蕉组培抗褐化的方法，其特征在于：所述步骤S3中褐化抑制剂为曲酸水溶液和硫代硫酸钠水溶液。
6.如权利要求5所述的粉蕉组培抗褐化的方法，其特征在于：所述曲酸水溶液的浓度为0.5～2g/L。
7.如权利要求5所述的粉蕉组培抗褐化的方法，其特征在于：所述硫代硫酸钠水溶液的浓度为0.1～0.5g/L。
8.如权利要求1所述的粉蕉组培抗褐化的方法，其特征在于：所述步骤S3中芽头的尺寸为长3～5cm，直径3～5cm。
9.如权利要求1所述的粉蕉组培抗褐化的方法，其特征在于：所述步骤S3中芽头经过褐化抑制剂处理的具体步骤为：将芽头浸泡在曲酸水溶液中，振荡处理15～30min，取出晾干后再浸泡在硫代硫酸钠水溶液中，振荡处理15～30min。
10.如权利要求1所述的粉蕉组培抗褐化的方法，其特征在于：所述步骤S3中培养条件为：温度28～30℃、避光培养。
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