CN113545293B - 一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法 - Google Patents

一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113545293B
CN113545293B CN202110952764.0A CN202110952764A CN113545293B CN 113545293 B CN113545293 B CN 113545293B CN 202110952764 A CN202110952764 A CN 202110952764A CN 113545293 B CN113545293 B CN 113545293B
Authority
CN
China
Prior art keywords
stem segments
culture medium
culture
cut
mao
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110952764.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113545293A (zh
Inventor
陈瑶
李坤明
丁仁展
梁艳萍
陈伟
胡忠荣
黄文静
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
HORTICULTURAL RESEARCH INSTITUTE YUNNAN ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES
Original Assignee
HORTICULTURAL RESEARCH INSTITUTE YUNNAN ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by HORTICULTURAL RESEARCH INSTITUTE YUNNAN ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES filed Critical HORTICULTURAL RESEARCH INSTITUTE YUNNAN ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES
Priority to CN202110952764.0A priority Critical patent/CN113545293B/zh
Publication of CN113545293A publication Critical patent/CN113545293A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113545293B publication Critical patent/CN113545293B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法，包括如下步骤外植体的选取、外植体的灭菌、无菌系建立和继代增殖；外植体的选取是在2月至4月的晴好天气，剪取毛枝京梨猕猴桃当年生营养枝的幼嫩茎段；外植体的灭菌是剪去嫩茎上的叶片，用洗衣粉清洗茎段，再用自来水冲洗0.5h，将茎段剪成2cm的长度，将剪好的茎段放入超净工作台中，用75％的酒精浸泡30s，再用灭过菌蒸馏水将酒精冲洗干净，再放入0.1％的升汞溶液中浸泡3‑20min，然后用无菌水清洗4次。本发明采用组织培养增殖方法，节约了野生猕猴桃种质资源保存占用的土地面积，降低野生猕猴桃种质资源的保存成本，延长了种质资源的保存时间，提高种质资源保存安全性。

Description

一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法
技术领域
本发明涉及生物繁殖技术领域，具体涉及一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法。
背景技术
毛枝京梨猕猴桃又名毛枝称花藤，学名：A.callosavar.pubiramula.C.Y.Wu，是猕猴桃科(Actinidiaceae)猕猴桃属(Actinidia Lindl.)斑果组中硬齿猕猴桃的一个变种。毛枝京梨猕猴桃是云南省特有的野生猕猴桃种质资源，其果小，长圆柱形，果皮黄绿色，单果重1-1.5克，多簇生，每簇2-3个果，果实9月初成熟，分布在麻栗坡、西畴、富宁县海拔1400-1800m。
传统的猕猴桃种质资源保存方式主要采用实生播种或以实生苗作为砧木嫁接，实生种子播种会引起后代性状变异，砧木嫁接会引发亲和力和病毒复合感染等问题，同时传统种质资源保存技术其繁殖系数低，幼苗生长期长，土地占用面积大，土地成本和人工成本高，所保存的资源受外界环境因素影响大，不利于猕猴桃种质资源的长期保存。
目前，缺乏一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法。
发明内容
本发明的目的是提供了一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：本发明的一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法，包括如下步骤：
(1)外植体的选取：在2月至4月的晴好天气，剪取毛枝京梨猕猴桃当年生营养枝的幼嫩茎段；
(2)外植体的灭菌：剪去嫩茎上的叶片，用洗衣粉清洗茎段，再用自来水冲洗0.5h，将清洗好的茎段剪成2cm的长度，将剪好的茎段放入超净工作台中，用75％的酒精浸泡30s，再用灭过菌蒸馏水将酒精冲洗干净，再放入0.1％的升汞溶液中浸泡3-20min，然后用无菌水清洗4次；
(3)无菌系建立：无菌系的建立采用的基本培养基是MS培养基，使用的激素为6BA和NAA，将培养基装入广口瓶中，每瓶装入培养基30-40ml，密封后进行高温高压灭菌，灭菌后冷却待用；在超净工作台中，然后将剪好的茎段插入灭菌后的MS培养基中，每瓶培养基插入茎段4-6个，密封后将其放入培养室进行培养；
(4)继代增殖：毛枝京梨猕猴桃在经过一段时间的培养后，无菌系建立，继而进行继代增殖培养；继代培养所用培养基为MS+1-2mg6-BA+0.1mgNAA，每瓶培养基为50ML，将无菌系萌发的腋芽切下，每瓶接入腋芽3个，密封后放入培养室进行继代培养，每周对培养室进行消毒一次，每20-25d更换一次培养基，通过一个周期的继代培养，制得毛枝京梨猕猴桃。
进一步地，在步骤(2)中，茎段先剪成长度为2cm之后，再用质量百分浓度为75％的酒精消毒30秒，再用质量百分浓度为0.1％的升汞消毒15min。
进一步地，在步骤(3)和步骤(4)中，培养室条件为：培养室温度控制在22-24℃，每天光照12h，光照强度为1100-1200Lx。
进一步地，在步骤(4)中，毛枝京梨猕猴桃增殖系数达到6.3-9.1。
有益效果：本发明采用组织培养增殖方法，对毛枝京梨猕猴桃进行大批量生产，节约了野生猕猴桃种质资源保存占用的土地面积，降低了野生猕猴桃种质资源的保存成本，延长了种质资源的保存时间，提高了种质资源保存安全性。
与现有技术相比，本发明具备以下优点：
(1)本发明先将清洗好的茎段剪成2cm的长度，然后再用酒精、升汞进行消毒、灭菌，降低了原本灭菌后再用手术刀切取的难度，减少了灭菌后用手术刀切取时对材料的伤害程度，提高了接种后的成活率和腋芽的萌发率。
(2)本发明所培养的毛枝京梨猕猴桃组培苗玻璃化率和褐化率都较低。
(3)本发明与其他的猕猴桃组培技术相比，本发明的培养基激素的浓度进行了优化，促进了不定芽的形成，增殖系数可达到6.3-9.1，大大增加了繁殖数量和节约了生产成本。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1
本发明的一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法，包括如下步骤：
(1)外植体的选取：在2月至4月的晴好天气，剪取毛枝京梨猕猴桃当年生营养枝的幼嫩茎段；
(2)外植体的灭菌：剪去嫩茎上的叶片，用洗衣粉清洗茎段，再用自来水冲洗0.5h，将清洗好的茎段剪成2cm的长度，将剪好的茎段放入超净工作台中，用75％的酒精浸泡30s，再用灭过菌蒸馏水将酒精冲洗干净，再放入0.1％的升汞溶液中浸泡10min，然后用无菌水清洗4次；
(3)无菌系建立：无菌系的建立采用的基本培养基是MS培养基，使用的激素为6BA和NAA，将培养基装入广口瓶中，每瓶装入培养基35ml，密封后进行高温高压灭菌，灭菌后冷却待用；在超净工作台中，然后将剪好的茎段插入灭菌后的MS培养基中，每瓶培养基插入茎段4个，密封后将其放入培养室进行培养；
(4)继代增殖：毛枝京梨猕猴桃在经过一段时间的培养后，无菌系建立，继而进行继代增殖培养；继代培养所用培养基为MS+1.5mg6-BA+0.1NAA，每瓶培养基为50ML，将无菌系萌发的腋芽切下，每瓶接入腋芽3个，密封后放入培养室进行继代培养，每周对培养室进行消毒一次，每23d更换一次培养基，通过一个周期的继代培养，制得毛枝京梨猕猴桃。毛枝京梨猕猴桃增殖系数达到8。
实施例2
实施例2与实施例1的区别在于：
在步骤(2)中，外植体的灭菌：剪去嫩茎上的叶片，用洗衣粉清洗茎段，再用自来水冲洗0.5h，将清洗好的茎段剪成2cm的长度，将剪好的茎段放入超净工作台中，用75％的酒精浸泡30s，再用灭过菌蒸馏水将酒精冲洗干净，再放入0.1％的升汞溶液中浸泡15min，然后用无菌水清洗4次；
在步骤(3)中，无菌系建立：无菌系的建立采用的基本培养基是MS培养基，使用的激素为6BA和NAA，将培养基装入广口瓶中，每瓶装入培养基40ml，密封后进行高温高压灭菌，灭菌后冷却待用；在超净工作台中，然后将剪好的茎段插入灭菌后的MS培养基中，每瓶培养基插入茎段6个，密封后将其放入培养室进行培养；
在步骤(4)中，继代增殖：毛枝京梨猕猴桃在经过一段时间的培养后，无菌系建立，继而进行继代增殖培养；继代培养所用培养基为MS+2mg6-BA+0.1NAA，每瓶培养基为50ML，将无菌系萌发的腋芽切下，每瓶接入腋芽3个，密封后放入培养室进行继代培养，每周对培养室进行消毒一次，每20d更换一次培养基，通过一个周期的继代培养，制得毛枝京梨猕猴桃。毛枝京梨猕猴桃增殖系数达到9.1。
实施例3
实施例3与实施例1的区别在于：
在步骤(2)中，外植体的灭菌：剪去嫩茎上的叶片，用洗衣粉清洗茎段，再用自来水冲洗0.5h，将清洗好的茎段剪成2cm的长度，将剪好的茎段放入超净工作台中，用75％的酒精浸泡30s，再用灭过菌蒸馏水将酒精冲洗干净，再放入0.1％的升汞溶液中浸泡20min，然后用无菌水清洗4次；
在步骤(3)中，无菌系建立：无菌系的建立采用的基本培养基是MS培养基，使用的激素为6BA和NAA，将培养基装入广口瓶中，每瓶装入培养基30ml，密封后进行高温高压灭菌，灭菌后冷却待用；在超净工作台中，然后将剪好的茎段插入灭菌后的MS培养基中，每瓶培养基插入茎段5个，密封后将其放入培养室进行培养；
在步骤(4)中，继代增殖：毛枝京梨猕猴桃在经过一段时间的培养后，无菌系建立，继而进行继代增殖培养；继代培养所用培养基为MS+1mg6-BA+0.1NAA，每瓶培养基为50ML，将无菌系萌发的腋芽切下，每瓶接入腋芽3个，密封后放入培养室进行继代培养，每周对培养室进行消毒一次，每25d更换一次培养基，通过一个周期的继代培养，制得毛枝京梨猕猴桃。毛枝京梨猕猴桃增殖系数达到6.3。
试验例
将实施例中的毛枝京梨猕猴桃进行如下实验，不同灭菌时间对毛枝京梨猕猴桃茎段成活率、污染率及萌发率的影响如表1所示：
表1
Figure BDA0003219166460000051
不同激素浓度对毛枝京梨猕猴桃增殖的影响如表2所示：
表2
培养基 外植体(个) 繁殖系数20d 繁殖系数40d
MS+ZT1mg/L+0.1mg/LNAA 20 2.4 3.2
MS+ZT1.5mg/L+0.1mg/LNAA 18 2.7 3.5
MS+ZT2mg/L+0.1mg/LNAA 22 3.2 3.9
MS+6-BA1mg/L 30 3.7 4.3
MS+6-BA1.5mg/L 28 4.1 4.7
MS+6-BA2mg/L 32 4.7 5.5
MS+6-BA1mg/L+0.1mg/LNAA 36 5.1 6.3
MS+6-BA1.5mg/L+0.1mg/LNAA 24 6.5 8
MS+6-BA2mg/L+0.1mg/LNAA 26 7.5 9.1
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）外植体的选取：在2月至4月的晴好天气，剪取毛枝京梨猕猴桃当年生营养枝的幼嫩茎段；
（2）外植体的灭菌：剪去嫩茎上的叶片，用洗衣粉清洗茎段，再用自来水冲洗0.5h，将清洗好的茎段剪成2cm的长度，将剪好的茎段放入超净工作台中，用75%的酒精浸泡30s，再用灭过菌蒸馏水将酒精冲洗干净，再放入0.1%的升汞溶液中浸泡10-20min，然后用无菌水清洗4次；
（3）无菌系建立：无菌系的建立采用的基本培养基是MS培养基，使用的激素为6-BA和NAA，将培养基装入广口瓶中，每瓶装入培养基30-40ml，密封后进行高温高压灭菌，灭菌后冷却待用；在超净工作台中，然后将剪好的茎段插入灭菌后的上述添加了激素为6- BA和NAA的MS培养基中，每瓶培养基插入茎段4-6个，密封后将其放入培养室进行培养；
（4）继代增殖：毛枝京梨猕猴桃在经过一段时间的培养后，无菌系建立，继而进行继代增殖培养；继代培养所用培养基为MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA，每瓶培养基为50mL，将无菌系萌发的腋芽切下，每瓶接入腋芽3个，密封后放入培养室进行继代培养，每周对培养室进行消毒一次，每20-25d更换一次培养基，通过一个周期的继代培养，制得毛枝京梨猕猴桃。
2.根据权利要求1所述的毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法，其特征在于：在步骤（2）中，茎段先剪成长度为2cm之后，再用质量百分浓度为75%的酒精消毒30秒，再用质量百分浓度为0.1%的升汞消毒15min。
3.根据权利要求1所述的毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法，其特征在于：在步骤（3）和步骤（4）中，培养室条件为：培养室温度控制在22-24℃，每天光照12h，光照强度为1100-1200Lx。
CN202110952764.0A 2021-08-19 2021-08-19 一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法 Active CN113545293B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110952764.0A CN113545293B (zh) 2021-08-19 2021-08-19 一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110952764.0A CN113545293B (zh) 2021-08-19 2021-08-19 一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113545293A CN113545293A (zh) 2021-10-26
CN113545293B true CN113545293B (zh) 2022-09-16

Family

ID=78134059

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110952764.0A Active CN113545293B (zh) 2021-08-19 2021-08-19 一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113545293B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101647393A (zh) * 2009-09-24 2010-02-17 浙江省农业科学院 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法
CN105031511A (zh) * 2015-06-25 2015-11-11 当涂县科辉商贸有限公司 一种治疗急性腰扭伤的外用中药
CN111771726A (zh) * 2020-07-31 2020-10-16 武汉市农业科学院 一种美味猕猴桃砧木无根组培苗的移栽方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2013205472B2 (en) * 2012-07-18 2015-01-29 Queensland University Of Technology Constructs for Modulating Transpiration in Plants and Uses Therefor
CN104012410B (zh) * 2014-06-09 2016-03-02 赵兰 一种猕猴桃的增殖继代培养方法
CN107075500A (zh) * 2014-09-10 2017-08-18 新西兰植物和食品研究院有限公司 能改变果实大小的方法和材料
CN106857265B (zh) * 2017-04-14 2019-05-10 云南省农业科学院园艺作物研究所 一种白牛筋木的组培增殖方法
CN110881408A (zh) * 2019-12-27 2020-03-17 福建省农业科学院果树研究所 一种东红猕猴桃组培快繁体系的建立方法
CN111758573B (zh) * 2020-07-31 2021-08-27 武汉市农业科学院 一种美味猕猴桃砧木组培快繁方法
CN112772258A (zh) * 2021-02-22 2021-05-11 湖南科技大学 一种低积累镉中华猕猴桃的繁殖方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101647393A (zh) * 2009-09-24 2010-02-17 浙江省农业科学院 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法
CN105031511A (zh) * 2015-06-25 2015-11-11 当涂县科辉商贸有限公司 一种治疗急性腰扭伤的外用中药
CN111771726A (zh) * 2020-07-31 2020-10-16 武汉市农业科学院 一种美味猕猴桃砧木无根组培苗的移栽方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN113545293A (zh) 2021-10-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111937746B (zh) 一种用于再生虎克姜花植株的系列培养试剂盒及其应用
CN114793892B (zh) 一种降低黄心夜合外植体污染和褐化的初代培养方法
CN113455391B (zh) 一种以种子为外植体进行组培扩繁大百合的繁殖方法
CN108770692B (zh) 椰子胚诱导培养基和基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法
CN103155869A (zh) 甜樱桃砧木Colt组织培养方法
CN113545293B (zh) 一种毛枝京梨猕猴桃的组培增殖方法
CN116602213A (zh) 一种珠芽魔芋叶面球茎一步成苗的组织培养方法
CN111758573B (zh) 一种美味猕猴桃砧木组培快繁方法
CN110089430B (zh) 杜仲育苗方法
CN114287341A (zh) 培养蓝莓组织的方法
CN112690216A (zh) 一种银杏高效快速组培繁殖方法
CN112119911A (zh) 一种有效促进香合欢继代增殖培养的方法
CN113439661B (zh) 芦竹的种质保存方法
CN117441617B (zh) 一种北葱的组织培养方法
CN115777528B (zh) 一种提升菜心和紫菜薹杂交种小孢子出胚率的培养方法
CN115039698B (zh) 一种银杉的组培方法和繁殖方法
CN116649215B (zh) 一种食叶草的组培快繁方法
CN110583489B (zh) 一种大叶杨的组培快繁方法和应用
CN116686716B (zh) 一种蓝莓的组织培养育苗方法
CN117426304B (zh) 一种巨花多穗蓼的组织培养方法
CN112400692B (zh) 一种海棠的组培快繁方法
CN115413577B (zh) 一种皂荚组培快繁方法
CN106937596B (zh) 一种快速高效的大蒜组织培养方法
Kumari et al. In vitro Propagation of Medicinally Valuable Traditional Banana Cultivar, Musa acuminata cv. Matti by Shoot Tip Culture
CN117502241A (zh) 一种芦竹的开放式组培方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant