CN116649215B - 一种食叶草的组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种食叶草的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域。本发明食叶草的组培快繁方法为：将食叶草的无菌苗切去根部，放入丛生芽诱导培养基中，诱导丛生苗及愈伤组织产生；然后将丛生苗从基部分开并于生根液中浸泡；然后移植入含恶霉灵的土壤中培养生根，即实现食叶草的组培快繁。本发明通过直接产生丛生芽，并创造性的将生根与炼苗合并处理，大大缩短了食叶草组培快繁时间(最短仅需3‑4周)，提高了再生效率和繁殖系数。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种食叶草的组培快繁方法。
背景技术
食叶草(Rumex dapibus herba by.)是蓼科(Polygonaceae)酸模属(Rumex)，多年生宿根草本植物，具有营养丰富、耐盐碱、含有多种微量元素和抗氧化物质等特点，既可做牧草，也可以作为蔬菜或食品加工原料；栽培方式上，食叶草一般通过提前育苗，种植2-3个月后根系达到0.5cm粗时移栽以提高抗性，促进生长。
植物组织培养是植物种质快繁与资源保存重要的技术，目前尚无对食叶草组培快繁体系研究的报道。提供食叶草的组培快繁方法可为食叶草的大规模生产应用奠定基础。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种食叶草的组培快繁方法。
为了达到上述目的，采用如下技术方案：
一种食叶草的组培快繁方法，步骤如下：
将食叶草的无菌苗切去根部，放入丛生芽诱导培养基中，诱导丛生苗及愈伤组织产生；然后将丛生苗从基部分开并于生根液中浸泡；然后移植入含恶霉灵的土壤中培养生根，即实现食叶草的组培快繁；
所述丛生芽诱导培养基组成为：MS+30g/L蔗糖+0.5～1.5mg/L 6-BA+0～1mg/LIAA；优选的，所述丛生芽诱导培养基组成为：MS+30g/L蔗糖+1mg/L 6-BA+0～1mg/L IAA；进一步优选的为：MS+30g/L蔗糖+1mg/L 6-BA+1mg/L IAA。
所述生根液含10～50mg/L的IBA和0～10mg/L的恶霉灵；优选的，所述生根液含50mg/L的IBA和10mg/L的恶霉灵。
在一个具体的实施例中，所述土壤中恶霉灵的含量为10mg/L。
在一个具体的实施例中，所述食叶草的无菌苗由以下方法获得：
选择籽粒饱满的食叶草种子进行消毒，接种在琼脂培养基或者无菌水浸湿的高压灭菌滤纸上进行萌发，使食叶草的无菌苗长至3-5cm。
在一个具体的实施例中，所述丛生苗在生根液中浸泡的时间为24小时。
为了提高增殖系数，可以将诱导的丛生苗根据需要进行多次继代培养，继代一次培养时间为2周，培养条件为16小时光照，8小时黑暗。
本发明技术方案的优点
目前尚无对食叶草组培快繁体系研究的报道。本发明对食叶草组培快繁体系进行研究和优化，通过直接产生丛生芽，并将生根与炼苗合并处理，大大缩短了食叶草组培快繁时间(最短仅需3-4周)，提高了再生效率和繁殖系数。此外，本发明食叶草组培快繁体系的关键技术点为通过蘸根法，将组培生根环节和炼苗移栽环节合并，不仅提高了扩繁效率，还降低了污染几率以及能耗，并有较高的成活率。
附图说明
图1实施例1方法进行食叶草快繁的结果图。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
食叶草种子购自张掖康源健康产业发展有限公司。
实施例1
一种食叶草的组培快繁方法，步骤如下：
1、当食叶草的无菌苗长至3-5cm时，切去根部，放入丛生芽诱导培养基中，诱导丛生苗及愈伤组织产生；培养时间为2周，培养条件为16小时光照，8小时黑暗；
2、将上述丛生苗从基部分开，并将丛生苗的基部于生根液中浸泡24小时；然后将浸泡后的幼苗移植入含恶霉灵10mg/L的土壤中培养，即可生根，生根成活率高达90％，即实现食叶草的组培快繁。
为了提高增殖系数，可以将步骤1的丛生苗根据需要进行多次继代培养，继代一次培养时间为2周，培养条件为16小时光照，8小时黑暗。
其中，
所述食叶草的无菌苗可以由以下方法获得：
选择籽粒比较饱满的食叶草种子进行消毒，接种在琼脂培养基或者无菌水浸湿的高压灭菌滤纸上进行萌发，使食叶草的无菌苗长至3-5cm。
所述丛生芽诱导培养基的组成为：MS+30g/L蔗糖+1.0mg/L 6-BA+1.0mg/L IAA。
所述生根液为：IBA 50mg/L+恶霉灵10mg/L。
采用上述方法进行食叶草快繁的结果如图1所示，其中A指的是食叶草种子滤纸上无菌苗培养，B指的是无菌苗切根后放入F系类培养基中，培养两周产生丛生苗；C指的是待蘸生根液的丛生苗；D丛生苗蘸生根液后移栽于基质中培养2周生根情况。
丛生芽诱导培养基的组成成分对食叶草不定芽诱导的影响
分别采用不同的丛生芽诱导培养基诱导食叶草无菌苗的不定芽，观察不同培养基对食叶草丛生芽的诱导情况。具体是将食叶草无菌苗切根后，接种在基础培养基为MS+30g/L蔗糖的不同激素组合的丛生芽诱导培养基中(表1)，培养时间为2周，培养条件为16小时光照，8小时黑暗；观察不定芽的诱导情况。
表1丛生芽诱导培养基的组成成分对食叶草不定芽诱导的影响
利用食叶草无菌苗进行不定芽诱导的实验结果见表1，从表中可以看出，当6-BA浓度为0时，植株只长高不产生丛生芽；当6-BA浓度不变时，随着IAA浓度升高，株高不断增高，但IAA浓度高会抑制不定芽扩繁；结合不定芽诱导率、增殖系数以及不定芽高度，当6-BA浓度为1mg/L和IAA浓度为1mg/L时(F9)，不定芽的诱导效果最好，因此F9的激素组合为不定芽诱导的最适培养基。
不定芽诱导率＝可诱导出不定芽的外植体数量/总外植体数量；
增殖系数＝每株外植体诱导出的不定芽数量之和/总外植体数量；
不定芽高度＝所有不定芽高度之和/不定芽数量。
生根液的组成成分对食叶草生根率的影响
分别采用不同的生根液来处理食叶草的不定芽，观察不同生根液对食叶草生根情况的影响。具体是将食叶草无菌苗切根后，采用F9丛生芽诱导培养基诱导不定芽，之后将诱导的不定芽分别浸泡在不同的生根液(表2)中24h，然后直接将幼苗移入含恶霉灵10mg/L的土壤中培养，观察生根情况。
表2食叶草生根液的组成成分
在食叶草生根诱导中，设计IBA不同浓度的生根溶液，将食叶草组培再生苗在开放空间放入生根溶液中浸泡24小时；其中R1-R3生根液中的食叶草再生苗，一周后生根率最高到70％，成活率最高为63％；R4-R5生根液中的食叶草再生苗，一周后生根率分别为83％和90％，成活率分别为75％和82％；R6生根液中的食叶草再生苗，一周后生根率90％，且在栽培两周后R6成活率仍然为90％；因此，生根液选择R6 IBA 50mg/L+恶霉灵10mg/L。
生根率＝生长出3条及以上壮根的再生苗/蘸根移栽的总再生苗；
成活率＝成活的食叶草再生苗/蘸根移栽的总再生苗。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (7)
1.一种食叶草的组培快繁方法，其特征在于，步骤如下：
将食叶草的无菌苗切去根部，放入丛生芽诱导培养基中，诱导丛生苗产生；然后将丛生苗从基部分开并于生根液中浸泡；然后移植入含恶霉灵的土壤中培养生根，即实现食叶草的组培快繁；
所述丛生芽诱导培养基组成为：MS+30g/L蔗糖+0.5～1.5mg/L 6-BA+0～1mg/L IAA；
所述生根液含10～50mg/L的IBA和0～10mg/L的恶霉灵。
2.根据权利要求1所述食叶草的组培快繁方法，其特征在于，所述丛生芽诱导培养基组成为：MS+30g/L蔗糖+1mg/L 6-BA+0～1mg/L IAA。
3.根据权利要求2所述食叶草的组培快繁方法，其特征在于，所述丛生芽诱导培养基组成为：MS+30g/L蔗糖+1mg/L 6-BA+1mg/L IAA。
4.根据权利要求1所述食叶草的组培快繁方法，其特征在于，所述生根液含50mg/L的IBA和10mg/L的恶霉灵。
5.根据权利要求1所述食叶草的组培快繁方法，其特征在于，所述土壤中恶霉灵的含量为10mg/L。
6.根据权利要求1-5任一项所述食叶草的组培快繁方法，其特征在于，所述食叶草的无菌苗由以下方法获得：
选择籽粒饱满的食叶草种子进行消毒，接种在琼脂培养基或者无菌水浸湿的高压灭菌滤纸上进行萌发，使食叶草的无菌苗长至3-5cm。
7.根据权利要求6所述食叶草的组培快繁方法，其特征在于，所述丛生苗在生根液中浸泡的时间为24小时。
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