CN102239779B - 一种大白菜种质抗黑斑病的快速鉴定方法 - Google Patents

一种大白菜种质抗黑斑病的快速鉴定方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种大白菜种质抗黑斑病的快速鉴定方法，其特征在于按以下步骤依次组成：(1)供试材料准备、(2)接种和(3)病情指数分级，确定了适宜的黑斑病悬浮液浓度、大白菜抗病性筛选苗龄，与大田成株期接种相比，避免了气候条件不适宜、环境中病虫害等因素的影响，苗期在室内进行抗病性筛选则条件较易控制，鉴定周期短、速度快，能节省大量人力物力。

Description

一种大白菜种质抗黑斑病的快速鉴定方法
技术领域
本发明为园艺作物抗病育种领域，具体涉及一种大白菜种质抗黑斑病的快速鉴定方法。
背景技术
大白菜黑斑病由链格孢属真菌引起，包括芸薹链格孢Alternariabrassicae，甘蓝链格孢A.brassicicola和萝卜链格孢A.japonica 3个种。大白菜黑斑病是经常发生的一种病害，分布普遍，在我国和世界范围内都有发生。早在上世纪40年代，白菜黑斑病在我国分布已较普遍，但对生长影响不大，70年代后期在我国该病的发生开始日趋严重，已成为大白菜主要病害之一，在流行年可造成20％～40％的减产，武汉是受其危害较重的地区。而生态防治与化学防治效果并不理想，培育抗病品种才是防治大白菜黑斑病的最安全、经济、有效的途径。
我国对大白菜黑斑病做了比较多的研究，李柱刚等(2000)对大白菜黑斑病的鉴别寄主进行了筛选研究，筛选出了5个鉴别寄主，崔崇士等(2000)将黑斑病划分为5个致病型，杨广东等(2000)、刘焕然等(1998)、张凤兰(1997)对大白菜黑斑病的抗性遗传规律作了研究，认为大白菜对黑斑病的抗性为显性，并受单个基因控制。人们对大白菜的黑斑病的室内离体接种鉴定技术也进行了研究，室内接种技术一般利用黑斑病孢子悬浮液对离体材料进行接种，有喷雾法和点滴法两种。一般认为点滴法的适合接种浓度为1200个抱子/ml(李明远，1998)，喷雾法的适合接种浓度要高一些。接种方法采用点滴孢子悬浮液法有以下缺点：一株株手工点滴接种，费工、效率低；由于是根据单斑进行鉴定，因而鉴定结果不够准确；水珠容易滚落，不能保证较高的发病率。采用喷雾接种法接种的优点是：由于成片喷雾接种，因而快速、省工、简便易行；根据多斑进行鉴定，提高了鉴定结果的可靠性；喷雾均匀，可达到很高的发病率。本研究未进行接种方法鉴定，直接采用孢子悬浮液喷雾接种。
发明内容
本发明提供一种大白菜种质抗黑斑病的快速鉴定方法，与大田成株期接种相比，避免了气候条件不适宜、环境中病虫害等因素的影响，苗期在室内进行抗病性筛选则条件较易控制，鉴定周期短、速度快，能节省大量人力物力；确定了适宜的黑斑病悬浮液浓度、大白菜抗病性筛选苗龄。
本发明采用的技术方案是：
(1)供试材料准备
供试的黑斑病菌种为芸薹链格孢Alternaria brassicae，菌种接种前用碳源减半PDA培养基加入过滤灭菌后的白菜汁进行产孢培养备用；将供试的大白菜种子播种在装有灭菌基质的花盆(8cm*8cm)内，出苗后每盆留1-3株；
(2)接种
用孢子悬浮液喷雾接种，接种后将供试植株放入塑料盒内，用保鲜膜保湿24h。每供试材料设置3次重复，每次重复30株苗，以清水为对照，设置1.0×103、1.0×104、1.0×105、1.0×106pfu/mL四种接种浓度的孢子悬浮液和3-4、5-6、7-8叶期三种苗龄，在25-30℃条件下诱导发病，置于光照培养室中，接种后第7d、第10d与第14d调查病情指数；
(3)病情指数分级
病情指数分级以叶片为单位，按0-9级标准进行发病程度调查。病情分级标准：0级：无症；1级：接种叶生褐色小点，无退绿斑；3级：接种叶生2mm以下的退绿斑，无霉层；5级：接种叶生2mm以上的退绿斑，有极少霉层，病斑不连成片；7级：接种叶生4mm以上的退绿斑，有较多的霉层，病斑连成片以下；9级：接种叶病斑连成片，大面积枯死，霉层明显。
所述的光照培养室内温度优化为26-28℃；所述的黑斑病孢子悬浮液浓度优选为1.0×104pfu/mL或者1.0×105pfu/mL；所述的黑斑病孢子悬浮液喷雾接种于大白菜为5～6叶期幼苗，10天后调查病情。本发明取得的有益效果：
1、按步骤进行鉴定的方法与大田成株期接种相比，避免了气候条件不适宜、环境中病虫害等因素的影响，苗期在室内进行抗病性筛选则条件较易控制，鉴定周期短、速度快，能节省大量人力物力。
2、确定了适宜的黑斑病悬浮液浓度，该方法确定1.0×104pfu/mL或者1.0×105pfu/mL的黑斑病孢子悬浮液最为适宜。
3、确定了适宜的大白菜抗病性筛选苗龄，该方法确定5～6叶期进行抗病性筛选最为适宜。
附图说明
图1为不同接种浓度对抗病性的影响示意图
图2不同接种苗龄对抗病性的影响示意图
下面对本发明作一详细说明：
实施例
1.1供试材料
供试的黑斑病菌种为芸薹链格孢Alternaria brassicae，菌种接种前用碳源减半PDA培养基加入过滤灭菌后的白菜汁进行产孢培养备用；将供试的大白菜种子播种在装有灭菌基质的花盆(8cm*8cm)内，出苗后每盆留1-3株；
1.2接种方法
采用孢子悬浮液喷雾接种，接种后将供试植株放入塑料盒内，用保鲜膜保湿24h。每供试材料设置3次重复，每次重复30株苗，以清水为对照，设置1.0×103、1.0×104、1.0×105、1.0×106pfu/mL四种接种浓度的孢子悬浮液和3-4、5-6、7-8叶期三种苗龄，在25-30℃条件下诱导发病，置于光照培养室中，接种后第7d、第10d与第14d调查病情指数。
1.3病情指数分级
病情指数分级以叶片为单位，按0-9级标准进行发病程度调查。病情分级标准：0级：无症；1级：接种叶生褐色小点，无退绿斑；3级：接种叶生2mm以下的退绿斑，无霉层；5级：接种叶生2mm以上的退绿斑，有极少霉层，病斑不连成片；7级：接种叶生4mm以上的退绿斑，有较多的霉层，病斑连成片以下；9级：接种叶病斑连成片，大面积枯死，霉层明显。
1.4数据处理
所有数据均采用SPSS11.5(LSD，p＜0.05)进行统计分析处理，采用Microsoft Office Excel 2003进行制图。
2结果与分析
2.1不同接种浓度对抗病性的影响
从图1可以看出，以1.0×103pfu/mL接种，由于接种浓度低感病材料发病重、抗病材料发病轻，1.0×104pfu/mL和1.0×105pfu/mL接种，六个材料发病均有差异；以1.0×106pfu/mL接种时，六个材料发病无差异，且浓度高发病快，第10天调查已经发病很重了。
2.2不同接种苗龄对抗病性的影响
如图2所示，3～4叶期苗龄时，四种材料发病程度都比较重，病情指数值高。5～6叶期苗龄时，六个材料发病均有差异；苗龄大后抗性较好，7～8叶期六个材料间发病无差异。
3、结论
研究结果表明，在光照培养室内(25～30℃)，选择浓度为1.0×104pfu/mL或者1.0×105pfu/mL的黑斑病孢子悬浮液喷雾接种于大白菜5～6叶期幼苗，保湿24h，10天后调查病情，可准确评价大白菜种植资源材料对黑斑病的抗性。

Claims (4)

1.一种大白菜种质抗黑斑病的快速鉴定方法，其特征在于按以下步骤依次组成： 
(1)供试材料准备 
供试的黑斑病菌种为芸薹链格孢Alternaria brassicae，菌种接种前用碳源减半PDA培养基加入过滤灭菌后的白菜汁进行产孢培养备用；将供试的大白菜种子播种在装有灭菌基质8cm*8cm的花盆内，出苗后每盆留1-3株； 
(2)接种 
用孢子悬浮液喷雾接种，接种后将供试植株放入塑料盒内，用保鲜膜保湿24h；每供试材料设置3次重复，每次重复30株苗，以清水为对照，设置1.0×103、1.0×104、1.0×105、1.0×106pfu/mL四种接种浓度的孢子悬浮液和3-4、5-6、7-8叶期三种苗龄，在25-30℃条件下诱导发病，置于光照培养室中，接种后第7d、第10d与第14d调查病情指数； 
(3)病情指数分级 
病情指数分级以叶片为单位，按0-9级标准进行发病程度调查；病情分级标准：0级：无症；1级：接种叶生褐色小点，无退绿斑；3级：接种叶生2mm以下的退绿斑，无霉层；5级：接种叶生2mm以上的退绿斑，有极少霉层，病斑不连成片；7级：接种叶生4mm以上的退绿斑，有较多的霉层，病斑连成片以下；9级：接种叶病斑连成片，大面积枯死，霉层明显。 
2.如权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：所述的光照培养室内温度优化为26-28℃。 
3.如权利要求1或2所述的鉴定方法，其特征在于：所述的黑斑病孢子悬浮液浓度优选为1.0×104pfu/mL或者1.0×105pfu/mL。 
4.如权利要求1或2所述的鉴定方法，其特征在于：所述的黑斑病孢子悬浮液喷雾接种于大白菜为5～6叶期幼苗，约10天后调查病情。 
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