CN111226791B - 一种通过芍药子叶节直接诱导丛生芽进行增殖的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种通过芍药子叶节直接诱导丛生芽进行增殖的方法，以芍药子叶节直接诱导丛生芽，调整诱导激素的配方和浓度，依次经历芍药种胚启动培养、子叶节丛生芽的初步诱导、子叶节丛生芽的二次诱导和子叶节丛生芽的增殖四个阶段，使得丛生芽的初步诱导率达到64.28％，平均增殖系数达到2.67。本发明可以有效解决以芍药子叶节为外植体进行丛生芽诱导时丛生芽诱导率过低且出现丛生芽苗纤细枯黄，以及丛生芽基部畸形生长或是产生瘤状根等问题，提高丛生芽的诱导率及增殖率，增强丛生芽的长势，以便于分切丛生芽苗，诱导生根。

Description

一种通过芍药子叶节直接诱导丛生芽进行增殖的方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种通过芍药子叶节直接诱导丛生芽进行增殖的方法。
背景技术
芍药(Paeonia lactiflora Pall.)为芍药科芍药属多年生宿根草本花卉，集观赏价值、药用价值、食用价值、经济价值于一体，享有五月花神的美誉，且被列为十大名花之一。芍药具有多种应用形式，在当今园林造景中具有重要的作用。
芍药传统繁殖方法易受季节限制，且繁殖系数较低，不能很好地保持母本的优良性状，难以满足当今花卉市场的需求。而采用组织培养技术可以较好地保持原有品种优良性状、缩短育种周期、提高繁殖系数，便于进行大规模生产。
在芍药组织培养过程中由于愈伤组织再分化困难，且褐化现象较为严重，使得通过诱导丛生芽进行扩繁成为芍药建立再生体系的主要途径。前人主要是采用地下芽及种胚为外植体直接进行丛生芽诱导，均取得一定的成果。其中种胚相对于地下芽，消毒方法更简单、不易污染、取材方便、不受季节限制，可周年进行研究。
子叶节是将发育到一定程度的芍药种胚切除少量胚根基部后剩余的部分，也源于种胚。近年来部分研究人员在对种胚进行诱导丛生芽的同时也会采用一定的方法对子叶节进行丛生芽诱导。可能由于激素及方法不当，导致丛生芽的诱导率较低，且种胚与子叶节诱导出的芽苗基部都容易畸形产生瘤状根，难以分切增殖，影响芽苗进一步生长。
发明内容
为了解决上述丛生芽诱导过程中出现的问题，本发明提供了一种通过芍药子叶节直接诱导丛生芽进行增殖的方法，可以有效解决以芍药子叶节为外植体进行丛生芽诱导时丛生芽诱导率低且出现丛生芽苗纤细枯黄，以及丛生芽基部畸形生长或是产生瘤状根等问题，提高丛生芽的诱导率及增殖率，增强丛生芽的长势，以便于分切丛生芽苗，诱导生根。
解决上述技术问题的技术方案如下：
一种通过芍药子叶节直接诱导丛生芽进行增殖的方法，以芍药子叶节直接诱导丛生芽，调整诱导激素的配方和浓度，依次经历芍药种胚启动培养、子叶节丛生芽的初步诱导、子叶节丛生芽的二次诱导和子叶节丛生芽的增殖四个阶段，使得丛生芽的初步诱导率达到64.28％，平均增殖系数达到2.67。
包括以下步骤：
(1)芍药种胚启动培养：将剥去外层种皮的芍药种子消毒后切割成含有种胚的小胚乳块，小胚乳块尺寸为(3±0.5)mm×(3±0.5)mm，将小胚乳块接种到添加0.5mg·L-1GA3和1.0mg·L-16-BA的MS固体培养基上，首先进行4d暗培养，然后转到正常的环境条件下培养21d得到胚苗；所述的暗培养为培养温度是25～27℃，无光照。消毒为将种子剥去种皮后在流水下冲洗干净，移至无菌操作台中，首先倒入75％的酒精消毒30s，而后用0.1％升汞消毒5～8min后，无菌水冲洗3次，每次不少于2min，接下来用灭菌后的滤纸吸干水分备用。
(2)子叶节丛生芽的初步诱导：将步骤(1)得到的胚苗切除胚根基部保留子叶节，转接到添加1.0mg·L-1GA3和1.0mg·L-16-BA的MS固体培养基中，在正常的环境条件下培养30d，得到具有萌发丛生芽趋势的胚苗；
(3)子叶节丛生芽的二次诱导：将步骤(2)得到的胚苗转接到添加1.0mg·L-1GA3和2.0mg·L-16-BA以及1.0g·L-1聚乙烯吡咯烷酮的MS固体培养基中，放置正常的环境条件下培养30d；
(4)子叶节丛生芽的增殖：将步骤(3)得到的经过丛生芽二次诱导的丛生芽苗，转接到添加1.0mg·L-1GA3、3.0mg·L-16-BA、0.1mg·L-1NAA、0.3g·L-1水解酪蛋白、1.0g·L-1聚乙烯吡咯烷酮的MS固体培养基中，放置到正常的环境条件下培养30d。
所述的正常的环境为培养温度是25～27℃，光照时间14h·d-1、光照强度1200lx±100lx。
本发明的有益效果是：
本发明通过芍药子叶节直接诱导丛生芽进行增殖，具有以下优点：
(1)由于子叶节来源于种子，该外植体取材方便，不受季节限制，可周年进行研究，容易消毒，操作简单，污染率显著低于其他外植体。
(2)本发明通过对子叶节进行丛生芽诱导，相对于完整种胚初步诱导出的丛生芽长势更明显且易于区分。
(3)采用本发明诱导方法，种胚经历了启动培养、丛生芽初步诱导、丛生芽二次诱导、最后进行增殖培养，通过一系列逐步增加激素浓度的诱导方法，显著地改善了丛生芽苗诱导过程中出现的叶片枯黄纤细的状态，也降低丛生芽苗根部的畸形率，可诱导出更多健壮的丛生芽苗。
(4)本发明显著提高了子叶节丛生芽的诱导率及增殖系数。子叶节丛生芽的初步诱导率为64.28％，平均增殖系数为2.67，显著高于现有的子叶节丛生芽诱导率，也高于相同条件下种胚丛生芽的初步诱导率。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1为启动培养中形成的胚苗的照片；
图2是切除胚根后的子叶节的照片；
图3是子叶节丛生芽初步诱导的照片；
图4是丛生芽二次诱导的照片；
图5是丛生芽的增殖的照片。
具体实施方式
实施例1：
A.取材：4℃冰箱贮存的健康饱满的芍药种子。
B.浸种：将经过低温储藏的种子在无菌水中浸泡48h，使种皮软化，有利于去除种皮，也可以使种子在切割时更加方便。
C.消毒：将种子剥去种皮后在流水下冲洗干净，移至无菌操作台中，首先倒入75％的酒精消毒30s，而后用0.1％升汞消毒5-8min后，无菌水冲洗3次，每次不少于2min，接下来用灭菌后的滤纸吸干水分备用。
D.接种：将种子切成大小为3mm×3mm左右胚乳块，即在保留完整胚的前提下，尽可能切除胚乳，将切好的种子接种在添加0.5mg·L-1GA3和1.0mg·L-16-BA的MS固体培养基上，在暗环境中放置4d后，然后转移到正常的光照环境下放置21d，获得健壮的胚苗(如图1所示)。
E.丛生芽的初步诱导：将启动培养中获得的胚苗切去胚根基部，保证子叶与胚轴紧紧相连(如图2所示)，然后转接在添加1.0mg·L-1GA3和1.0mg·L-16-BA的MS固体培养基中在正常的环境条件下培养30d，按照计算公式：子叶节丛生芽诱导率(％)＝(产生丛生芽外植体数/接种的外植体总数)×100％，得出子叶节丛生芽的初步诱导率为64.28％，获得大量具有萌发丛生芽趋势的胚苗(如图3所示)。
F.丛生芽的二次诱导：将丛生芽初次诱导中具有丛生芽趋势的丛生芽苗，转接在添加1.0mg·L-1GA3、2.0mg·L-16-BA以及1.0g·L-1聚乙烯吡咯烷酮的MS固体培养基中，在正常的环境条件下培养30d，得到健壮的丛生芽苗(如图4所示)。
G.子叶节丛生芽的增殖：将经过丛生芽二次诱导的丛生芽苗转接到添加1.0mg·L-1GA3、3.0mg·L-16-BA、0.1mg·L-1NAA、0.3g·L-1水解酪蛋白、1.0g·L-1聚乙烯吡咯烷酮的MS固体培养基中，放置到正常的环境条件下培养30d，获得大量增殖的丛生芽(如图5所示)，按照计算公式：增殖系数＝增殖周期结束时的芽苗数/增殖周期起始时的芽苗数，得出增殖系数为2.67。
H.培养条件：正常的环境条件温度25-27℃、光照时间14h·d-1、光照强度1200lx±100lx，暗培养的温度25-27℃，无光照。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质上对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种通过芍药子叶节直接诱导丛生芽进行增殖的方法，其特征在于，以芍药子叶节直接诱导丛生芽，调整诱导激素的配方和浓度，依次经历芍药种胚启动培养、子叶节丛生芽的初步诱导、子叶节丛生芽的二次诱导和子叶节丛生芽的增殖四个阶段，使得丛生芽的初步诱导率达到64.28％，平均增殖系数达到2.67；
包括以下步骤：
(1)芍药种胚启动培养：将剥去外层种皮的芍药种子消毒后切割成含有种胚的小胚乳块，接种到添加0.5mg·L-1GA3和1.0mg·L-16-BA的MS固体培养基上，首先进行4d暗培养，然后转到正常的环境条件下培养21d得到胚苗；
(2)子叶节丛生芽的初步诱导：将步骤(1)得到的胚苗切除胚根基部保留子叶节，转接到添加1.0mg·L-1GA3和1.0mg·L-16-BA的MS固体培养基中，在正常的环境条件下培养30d，得到具有萌发丛生芽趋势的胚苗；
(3)子叶节丛生芽的二次诱导：将步骤(2)得到的胚苗转接到添加1.0mg·L-1GA3和2.0mg·L-16-BA以及1.0g·L-1聚乙烯吡咯烷酮的MS固体培养基中，放置正常的环境条件下培养30d；
(4)子叶节丛生芽的增殖：将步骤(3)得到的经过丛生芽二次诱导的丛生芽苗，转接到添加1.0mg·L-1GA3、3.0mg·L-16-BA、0.1mg·L-1NAA、0.3g·L-1水解酪蛋白、1.0g·L-1聚乙烯吡咯烷酮的MS固体培养基中，放置到正常的环境条件下培养30d。
2.根据权利要求1所述的通过芍药子叶节直接诱导丛生芽进行增殖的方法，其特征在于，步骤(1)所述的暗培养为培养温度是25～27℃，无光照。
3.根据权利要求1所述的通过芍药子叶节直接诱导丛生芽进行增殖的方法，其特征在于，所述的正常的环境为培养温度是25～27℃，光照时间14h·d-1、光照强度1200lx±100lx。
4.根据权利要求1所述的通过芍药子叶节直接诱导丛生芽进行增殖的方法，其特征在于，步骤(1)所述的消毒为将种子剥去种皮后在流水下冲洗干净，移至无菌操作台中，首先倒入75％的酒精消毒30s，而后用0.1％升汞消毒5～8min后，无菌水冲洗3次，每次不少于2min，接下来用灭菌后的滤纸吸干水分备用。
5.根据权利要求1所述的通过芍药子叶节直接诱导丛生芽进行增殖的方法，其特征在于，步骤(1)所述的小胚乳块尺寸为(3±0.5)mm×(3±0.5)mm。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102763592A (zh) * 2012-07-12 2012-11-07 北京林业大学 一种芍药胚培养方法
CN104304029A (zh) * 2014-11-02 2015-01-28 杨业容 一种芍药的组织培养快繁方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102763592A (zh) * 2012-07-12 2012-11-07 北京林业大学 一种芍药胚培养方法
CN104304029A (zh) * 2014-11-02 2015-01-28 杨业容 一种芍药的组织培养快繁方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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芍药再生体系的建立;姚希诺;《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）》;20181115(第11期);第21-27页 *

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