CN104304029A

CN104304029A - 一种芍药的组织培养快繁方法

Info

Publication number: CN104304029A
Application number: CN201410602924.9A
Authority: CN
Inventors: 杨业容
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2014-11-02
Filing date: 2014-11-02
Publication date: 2015-01-28

Abstract

一种芍药的组织培养快繁方法，涉及芍药（PaeonialactifloraPall.）通过组织培养技术手段在短时间内快速繁殖保持亲本原有优良性状的芍药种苗。本发明以芍药地下茎为外植体，通过芍药启动培养、丛生芽诱导、丛生芽增殖培养、试管苗生根以及试管苗驯化移栽等阶段实现了芍药的组织培养快速繁殖。从而在人工控制的条件实现芍药种苗的快速繁殖，获得大量试管苗，促进芍药的商业化进程。

Description

一种芍药的组织培养快繁方法

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种芍药的组织培养快繁方法。

背景技术

芍药（Paeonia lactifloraPall.）是芍药科芍药属全缘叶亚组的多年生草本植物，是中国传统名花，具有极高的观赏价值，深受广大群众的喜爱，与牡丹齐名，被称作“花后”、“花相”。另外，芍药植株富含芍药苷，具有缓解阵痛、遏制肿瘤细胞生长等活性，具有较高的药用价值，市场前景广阔。

目前，芍药主要依靠分株繁殖方式进行种苗生产，存在繁殖周期长、效率低、繁殖系数低等问题，尚未形成健全的产业化生产机制。由于存在污染严重、褐化死亡率高、生根困难等问题，芍药的组织培养快繁技术发展缓慢，尚未建立完整的快繁体系，不能芍药种苗的工厂化生产，严重阻碍了其商业化发展进程。因此，非常有必要建立一套完整的芍药组织培养快繁体系。

发明内容

本发明的目的在于提供一种芍药的组织培养快繁方法，本发明以芍药地下茎为外植体，通过芍药启动培养、丛生芽诱导、丛生芽增殖培养、试管苗生根以及试管苗驯化移栽等阶段实现了芍药的组织培养快速繁殖。从而在人工控制的条件实现芍药种苗的快速繁殖，获得大量试管苗，进而实现了本发明的目的。

本发明的一种芍药的组织培养快繁方法，包括以下的工艺步骤：

（1）诱导不定芽：选取生长健壮饱满的、直径为2～3cm大小的地下芽,用清水洗净，剥去外界1～3层鳞片，用毛笔蘸取洗涤液清洗每一个地下芽，然后置于洗涤液中浸泡15～30min，经自来水冲洗45～90min后于超净工作台中进行消毒处理。将处理好的地下芽接种到诱导培养基上进行启动培养。

（2）丛生芽增殖培养：将长度为2～3cm的不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为1500～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，30～40天转接一次。

（3）试管苗生根：将长至2～4cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根。

（4）炼苗移栽：将长至6～8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由黄沙土和火碳泥（1：1）混合成的基质中并定植于大田中。

上述步骤（1）所述的洗涤液为0.01%～0.05%的高锰酸钾溶液。

上述（1）所述的消毒处理方法为：地下芽先在75%～80%的乙醇中浸泡10～30s，用无菌水冲洗3～5次，每次3～8min,然后用0.1%～0.5%的升汞溶液消毒5～10min,再用洗菌水冲洗3～5次，每次3～8min。用无菌滤纸吸干表面水珠后接种。

上述步骤（1）所述的诱导培养基为：1/2MS（Mg²⁺加倍）+0.1～2mg/L 6-BA+0.1～1mg/L NAA+0.1～0.5mg/LGA₃+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。

上述步骤（2）所述的增殖培养基为：1/2MS（Mg²⁺加倍）+0.1～2mg/L KT+0.1～1mg/L NAA+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。

上述步骤（3）所述的生根培养基为：1/2MS（Mg²⁺加倍）+1～3mg/L IAA+1～2.0mg/L GGR（注：双吉尔-GGR，购自北京艾比蒂研究开发中心）+2.0%～2.5%蔗糖+0.4%～0.6%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。

本发明克服了芍药组织培养中存在的污染率高、褐化率高、生根困难、移栽成活率低等问题，建立了芍药的组织培养快繁方法，从而促进了芍药的商业化进程。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1：

1、诱导不定芽：选取生长健壮饱满的、直径为2～3cm大小的地下芽,用清水洗净，剥去外界1层鳞片，用毛笔蘸取洗涤液清洗每一个地下芽，置于洗涤液中浸泡20min，经自来水冲洗45min后于超净工作台中75%的乙醇中浸泡10s，用无菌水冲洗3次，每次5min,然后用0.1%的升汞溶液消毒10min,再用洗菌水冲洗5次，每次3min。用无菌滤纸吸干表面水珠后接种到诱导培养基上进行启动培养。所述的洗涤液为0.02%高锰酸钾溶液，增殖培养基为1/2MS（Mg²⁺加倍）+2mg/L 6-BA+0.1/L NAA+0.5mg/LGA₃+3.5%蔗糖+0.5%琼脂+0.05%活性炭，pH值为5.8。

（2）丛生芽增殖培养：将长度为2～3cm的不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在28℃条件下全暗培养10天，然后置于每天光照15小时，光照强度为2500lx，培养温度为228℃的条件下培养，30天转接一次。所述的增殖培养基为：1/2MS（Mg²⁺加倍）+0.1mg/L KT+0.5mg/L NAA+3.5%蔗糖+0.35%琼脂+0.05%%活性炭，pH值为5.8。

（3）试管苗生根：将长至2～4cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在28℃条件下全暗培养天，然后置于每天光照15小时，光照强度为3000lx，培养温度为28℃的条件下培养至生根。所述的生根培养基为：1/2MS（Mg²⁺加倍）+3mg/L IAA+1mg/L GGR+2.0%蔗糖+0.4%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.8。

（4）炼苗移栽：将长至6～8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由黄沙土和火碳泥（1：1）混合成的基质中并定植于大田中，成活率达93%。

Claims

1.一种芍药的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

（1）诱导不定芽：选取生长健壮饱满的、直径为2～3cm大小的地下芽,用清水洗净，剥去外界1～3层鳞片，用毛笔蘸取洗涤液清洗每一个地下芽，然后置于洗涤液中浸泡15～30min，经自来水冲洗45～90min后于超净工作台中进行消毒处理，将处理好的地下芽接种到诱导培养基上进行启动培养；

（2）丛生芽增殖培养：将长度为2～3cm的不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为1500～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，30～40天转接一次；

（3）试管苗生根：将长至2～4cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；

2.根据权利要求1所述的一种芍药的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（1）所述的洗涤液为0.01%～0.05%的高锰酸钾溶液。

3.根据权利要求1所述的一种芍药的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（1）所述的消毒处理方法为：地下芽先在75%～80%的乙醇中浸泡10～30s，用无菌水冲洗3～5次，每次3～8min,然后用0.1%～0.5%的升汞溶液消毒5～10min,再用洗菌水冲洗3～5次，每次3～8min，用无菌滤纸吸干表面水珠后接种。

4.根据权利要求1所述的一种芍药的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（1）所述的诱导培养基为：1/2MS（Mg²⁺加倍）+0.1～2mg/L 6-BA+0.1～1mg/L NAA+0.1～0.5mg/LGA₃+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。

5.根据权利要求1所述的一种芍药的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（2）所述的增殖培养基为：1/2MS（Mg²⁺加倍）+0.1～2mg/L KT+0.1～1mg/L NAA+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。

6.根据权利要求1所述的一种芍药的组织培养快繁方法，其特征在于步骤（3）所述的生根培养基为：1/2MS（Mg²⁺加倍）+1～3mg/L IAA+1～2.0mg/L GGR（注：双吉尔-GGR，购自北京艾比蒂研究开发中心）+2.0%～2.5%蔗糖+0.4%～0.6%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。