CN102067818B

CN102067818B - 试管藕诱导方法

Info

Publication number: CN102067818B
Application number: CN2010105529719A
Authority: CN
Inventors: 柯卫东; 彭静; 刘玉平; 刘义满; 黄新芳; 叶元英; 李双梅; 李峰; 朱红莲; 黄来春; 赵春; 李明华
Original assignee: Wuhan vegetable research institute
Current assignee: Wuhan vegetable research institute
Priority date: 2010-11-19
Filing date: 2010-11-19
Publication date: 2012-05-23
Anticipated expiration: 2030-11-19
Also published as: CN102067818A

Abstract

本发明涉及一种莲试管藕诱导方法，包括以莲藕的顶芽或侧芽为外植体，经过茎尖启动、继代增殖、生根、最后采用固-液培养基培养诱导形成试管藕。所述的诱导试管藕步骤为：切取莲藕茎尖接种于茎尖启动培养基上培养，使其生长成芽或丛芽。将芽或丛芽转接到继代培养基上进行继代增殖，并将丛芽分割成单芽，转接到生根培养基上诱导生根，形成试管苗。生根培养30d后，将液体培养基倒入培养容器中，诱导形成试管藕。以上过程培养温度为24～26℃、光照强度为2000～2500lx，每天光照10h。通过莲藕的茎尖培养和快速繁殖，诱导形成试管藕，加快了莲藕的繁殖速度，提高了移栽成活率，可工厂化生产。

Description

试管藕诱导方法

技术领域

本发明涉及属于农业生物技术领域，具体地说是一种试管藕诱导方法。

背景技术

我国是莲藕的起源中心之一。莲藕在我国分布及栽培极为广泛，是我国栽培面积最大的水生蔬菜，黄河流域及其以南地区种植十分普遍。随着农村产业结构的调整，藕种需求量急剧增加，但由于莲藕是以无性繁殖为主的作物，繁殖系数较低(1∶10)，优新藕种繁殖速度远远不能满足市场需求，而且常规藕种存在用种量大、运输费用高、损耗较大、易带病等问题，使得莲藕产业发展受到一定的限制。因此，进行试管藕的生产是解决上述问题的有效途径之一。现阶段莲藕的组织培养研究工作主要由国内研究人员进行，而国外对其研究较少。从20世纪80年代起，我国中科院武汉植物所、江苏农学院、广西大学等科研单位和高等院校先后开展了一些研究工作，但只得到莲藕试管苗，移栽成活率低，栽培技术要求高，不能直接应用于实际生产。试管藕诱导新技术的发明及其应用，解决了常规藕种和莲藕试管苗存在的种种问题，具有显著的优势和社会经济效益，表现在：第一，试管藕通过莲藕茎尖组培快繁而来，繁殖速度快，可工厂化生产，解决了常规种藕繁殖系数低的问题，可以大大加快优新品种的繁殖和推广；第二，试管藕藕体积小，解决了常规藕种用种量大、运输费用高的问题；第三，试管藕不带病，解决了常规藕种易带病的问题；第四，与莲藕试管苗相比，试管藕移栽成活率高，为莲藕的组培技术应用于生产实际提供了更为有效的方法；第五，通过试管藕可以直接诱导微型藕，易于栽培种植等。

发明内容

本发明克服了莲藕常规生产上藕种繁殖困难的技术难题，在深入研究莲藕的茎尖培养和脱毒快繁的基础上，提供了一种试管藕诱导方法，该方法为莲藕的组织培养技术应用于生产实际提供了更为有效的方法。

本发明包括如下步骤：

1.茎尖启动：选取无病莲藕的顶芽或侧芽为外植体，外植体经清洗消毒后，用解剖刀剥去外层叶鞘，切取茎尖接种于莲藕茎尖启动培养基上进行培养，培养温度为24～26℃，光照强度为2000～2500lx，每天光照10h，直至生长成单芽或丛芽。其中茎尖启动培养基为1/2MS+6-BA0.5～4.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+3.0％蔗糖+琼脂0.5～0.6％。

2.继代增殖：将单芽或丛芽转接到继代培养基上进行继代增殖培养，温度为24～26℃，光照强度2000～2500lx，每天光照10h至产生新的丛芽。其中继代培养基为1/2MS+6-BA0.5～2.0mg/L+NAA0.1～1.0mg/L+3.0％蔗糖+琼脂0.5～0.6％。

3.生根：将丛芽分割成单芽，转接到生根培养基进行诱导生根，培养温度为24～26℃，光照强度为2000～2500lx，每天光照10h，至生根形成试管苗。其中生根培养基是1/2MS+6-BA0.5～1.0mg/L+IBA0.1～1.5mg/L+AC0.5～1.0g/L+5.0％蔗糖+琼脂0.5～0.6％。

4.诱导试管藕：采用固液混合培养基培养诱导试管藕。生根培养30d后，将液体培养基1/2MS+6-BA0.1～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+3.0～12.0％蔗糖倒入培养容器中，在温度为24～26℃、光照强度2000～2500lx下培养，每天光照10h，诱导形成试管藕。

本发明培养基全称是：

MS：Murashige & Skoog(1962)培养基；6-BA：6-苄氨基嘌呤；

NAA：萘乙酸；IBA：吲哚丁酸；AC：活性炭。

本发明通过组织培养进行试管藕的生产，它具有以下优点：

1.试管藕生长快，周期短，繁殖系数高。常规种藕的繁殖系数一般为1∶10，一年繁殖一代；而试管藕的繁殖系数为1∶4，一年可繁殖6～8代，极大的提高了莲藕的繁殖速度，有利于优新莲藕品种的推广应用。

2.试管藕体积小，重量轻，便于运输。传统生产上每亩需常规藕种200～300kg，而试管藕每支重1～3g，每亩用种量0.5～1.5kg，便于藕种的长途运输，减少了藕种的损耗率及运输费用。

3.试管藕不带病，质量高。通过组培快繁得到的微型藕种不带病，抗病能力强，同时藕种的遗传背景一致从而保证了藕种的纯度。

4.试管藕培养条件可控，可周年工厂化生产。莲藕传统繁殖是在自然条件下生长繁殖，受自然气候环境影响很大。试管藕是在人为提供的培养基及小气候环境条件下生长的，培养基中各种成分、环境条件的温度、光照等，完全不受季节限制，可全年工厂化连续生产，及时为生产提供规格整齐一致的优质无病种苗。

5.与莲藕试管苗相比，试管藕的移栽成活率更高，可达90％以上。

6.试管藕可直接诱导微型藕。

总之，试管藕诱导技术的发明为莲藕产业的发展提供了一种快速、方便、有效的藕种繁殖方法，大大满足了莲藕的市场需求。

具体实施方式

实施例1

本发明以藕莲品种鄂莲五号的顶芽为外植体，经过茎尖启动、继代增殖、生根、诱导形成试管藕。包括如下步骤：

1.茎尖启动：取清洗干净的无病鄂莲五号品种的顶芽，经75％酒精浸泡30秒后，用0.1％HgCl₂溶液浸泡3～12分钟，再用无菌水冲洗3次，每次3～5分钟。完成上述表面消毒处理程序后，用解剖刀剥去外层叶鞘，切取0.3～0.6cm长的茎尖，接种于莲藕茎尖分化培养基1/2MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+3.0％糖上，在温度为24～26℃，光照强度2000～2500lx下，每天光照10h，30～45d后产生芽或丛生芽。莲藕茎尖分化培养基的pH值为5.8～6.0。

2.继代增殖：将芽或丛芽转接到继代培养基1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+3.0％糖继代增殖，在温度为24～26℃，光照强度2000～2500lx下，每天光照10h，30～40d产生新的芽或丛芽。继代培养基pH值为5.8～6.0。

3.生根：将丛芽分割成单芽，转接到生根培养基1/2MS+6-BA0.5mg/L+IBA1.0mg/L+AC0.5g/L+5.0％糖诱导生根，在温度为24～26℃，光照度2000～2500lx下，每天光照10h，25d生根形成试管苗。生根培养基pH值为5.8～6.0。

4.诱导试管藕：生根培养30d后，将液体培养基(1/2MS+6-BA0.1～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+3.0～12.0％蔗糖)倒入培养容器中，在温度为24～26℃、光照强度2000～2500lx下培养，每天光照10h，诱导形成试管藕。30d以后诱导形成试管藕。诱导试管藕培养基pH值为5.8～6.0。

实施例2

以子莲品种太空3号的顶芽为外植体，经过茎尖启动、继代增殖、生根、诱导形成试管藕。包括如下步骤：

1.茎尖启动：以太空3号为试验材料，取清洗干净的无病太空3号顶芽，经75％酒精浸泡30秒后，用0.1％HgCl₂溶液浸泡3～12分钟，再用无菌水冲洗3次，每次3～5分钟。完成上述表面消毒处理程序后，用解剖刀剥去外层叶鞘，切取0.3～0.6cm长的茎尖，接种于莲藕茎尖分化培养基1/2MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+3.0％糖上，在温度为24～26℃，光照强度2000～2500lx下，每天光照10h，30～45d后产生芽或丛生芽。莲藕茎尖分化培养基的pH值为5.8～6.0。

3.生根：将丛芽分割成单芽，转接到生根培养基1/2MS+6-BA0.5mg/L+IBA1.0mg/L+AC0.5g/L+5.0％糖诱导生根，在温度为24～26℃，光照度2000～2500lx下，每天光照10h，25d生根形成试管苗。生根培养基pH值为5.8～6.0，4.诱导试管藕：生根培养30d后，将液体培养基(1/2MS+6-BA0.1～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+3.0～12.0％蔗糖)倒入培养容器中，在温度为24～26℃、光照强度2000～2500lx下培养，每天光照10h，诱导形成试管藕。30d以后诱导形成试管藕。诱导试管藕培养基pH值为5.8～6.0。

Claims

1.一种试管藕诱导方法，它包括如下步骤：

(1)、茎尖启动：选取无病莲藕的顶芽或侧芽为外植体，剥去外层叶鞘，切取茎尖接种于莲藕茎尖启动培养基上进行培养，直至生长成单芽或丛芽，其中茎尖启动培养基为1/2MS+6-BA0.5～4.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+3.0％蔗糖+琼脂0.5～0.6％；

(2)、继代增殖：将单芽或丛芽转接到继代培养基上进行继代增殖培养，直至产生新的丛芽，其中继代培养基为1/2MS+6-BA0.5～2.0mg/L+NAA0.1～1.0mg/L+3.0％蔗糖+琼脂0.5～0.6％；

(3)、生根：将丛芽分割成单芽，转接到生根培养基上诱导生根，直至生根形成试管苗，其中生根培养基为1/2MS+6-BA0.5～1.0mg/L+IBA0.1～1.5mg/L+AC0.5～1.0g/L+5.0％蔗糖+琼脂0.5～0.6％；

(4)、诱导试管藕：生根培养30d后，将液体培养基1/2MS+6-BA0.1～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+3.0～12.0％蔗糖倒入培养容器中，采用固液混合培养基培养诱导试管藕；各阶段培养基的pH值为5.8～6.0，培养温度为24～26℃，光照强度为2000～2500lx，每天光照时间为10h。