CN104221854A - 一种文心兰的培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及农业生物技术领域，为解决文心兰生产存在生根困难、繁殖能力弱、生长速度慢、生长周期长、练苗移栽阶段病害重，出瓶成活率低及抗逆性弱等问题，本发明提出了一种文心兰的培养方法：（1）采用MS培养基培养文心兰组培小苗；（2）采用固体PDA培养基培养印度梨形孢真菌；（3）文心兰与印度梨形孢真菌的共培养；（4）文心兰组培苗的出瓶培养。本发明的培养方法降低了文心兰出瓶苗移栽病害率，提高抗逆性。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物技术领域，具体地说涉及一种降低文心兰出瓶苗移栽病害及提高抗逆性的方法。
背景技术
文心兰生产存在生根困难、繁殖能力弱、生长速度慢、生长周期长、练苗移栽阶段病害重，出瓶成活率低及抗逆性弱等严重问题。寻求能与兰科花卉共生的有益真菌资源是解决这一问题的有效途径。
印度梨形孢真菌可以定殖于多种作物的根部，其寄主范围广泛，如拟南芥、烟草、大麦、小麦、玉米等。印度梨形孢的菌丝可以定殖于植物根系表面、根系表皮细胞和细胞间隙，形成典型的梨形厚垣孢子, 能在作物根系定殖存活很长时间。
申请号为201210459635.9的中国专利公开了一种提高白及组培苗移栽成活率的方法，该发明所用专用培养基由种子萌发培养基1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.75mg/L+椰子汁20%+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L、增殖培养基MS+6-BA1.0mg/L+KT3.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L、生根培养基MS+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉8g/L组成，按以下步骤进行：A.白及种子无菌萌发；B、增殖培养；C、生根培养和抗逆诱导；D、炼苗移栽。该发明在生根阶段加入SA0.3g/L+CTS2g/L的自制诱抗剂10ml/L，使其在生根培养的同时诱导组培苗的抗逆性，增强苗对外界环境的适应能力，以提高苗的移栽成活率。但是采用抗诱剂诱导的幼苗生根时间长，需要培养2个月，效率低。同时采用抗诱剂诱导的幼苗生根速度慢，两个月后，生根数达2-4 条/ 株，采用抗诱剂诱导的幼苗移栽成活率低，其移栽成活率可达63%。
发明内容
为解决文心兰生产存在生根困难、繁殖能力弱、生长速度慢、生长周期长、练苗移栽阶段病害重，出瓶成活率低及抗逆性弱等问题，本发明提出了一种文心兰的培养方法，本发明的培养方法降低了文心兰出瓶苗移栽病害率，提高抗逆性。
本发明是通过以下技术方案实现的：一种文心兰的培养方法，所述的培养方法为以下步骤：
（1）采用MS培养基培养文心兰组培小苗；
在组培瓶中采用MS培养基组织无菌培养文心兰小苗，待小苗长到3~5cm高，有1~3个根时备用；作为优选，培瓶中的培养条件为：光照培养16小时，20~28摄氏度；黑暗培养8小时，18~23摄氏度。
作为优选，MS培养基由以下组份组成，各组份的重量份为：
MS盐粉末(MS-Salt） ：3.46
琼脂 ：10
蔗糖 ：20
蒸馏水 ： 1000
搅拌后用KOH调节pH至5.7~5.8，高温灭菌（高温灭菌的温度为120℃以上）20分钟，即可作为MS培养基使用。
（2）采用固体PDA培养基培养印度梨形孢真菌
将印度梨形抱菌丝块接种于PDA培养基上,然后将培养皿置于培养箱中，培养20天后的印度梨形孢作为接种菌块；作为优选，培养箱中的培养条件为：24h黑暗培养，20~25摄氏度。
作为优选，PDA培养基由以下组份配成，各组份的重量份为：
马铃薯 200 ，
葡萄糖 20，
琼脂 15 ，
水 1000，
搅拌后高温灭菌20分钟，即可作为PDA培养基使用。
（3）文心兰与印度梨形孢真菌的共培养
将步骤（2）培养好的印度梨形孢真菌菌块置于步骤（1）的文心兰组培瓶中，距离文心兰根部0.5~2cm的位置，作为优选，培养条件为：光照培养16小时，20~28摄氏度；黑暗培养8小时，18~23摄氏度。印度梨形孢的在兰科花卉上的开发应用，可以促进文心兰生根，加速兰科植物的生长速度，降低移栽期病害提高成活率及文心兰抗逆性。采用此方法培养的文心兰根的数量比对照高1倍以上，鲜重比对照高50%以上；移栽期，软腐病比为对照降低70%以上，成活率比对照高20%左右。
（4）文心兰组培苗的出瓶培养
共培养15天以后的组培苗可出瓶，放置于温室中生长。一般共培养15天后，印度梨形孢真菌即可成功侵染文心兰，与文心兰根部共生。作为优选，共培养15~30天。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明培养的文心兰降低了文心兰出瓶苗移栽病害率，提高抗逆性。
具体实施方式
实施例1
（1）文心兰“南西”组培小苗的培养。
以文心兰“南西”品系组培小苗为材料，培养基为ＭＳ培养基，每瓶苗数量为6棵。苗大小为3-4cm高，根数量为2-3根，根长为1-2cm左右。置于22摄氏度的组培室中，光照培养16小时，黑暗培养8小时，备用。
（2）印度梨形孢真菌的培养
将保存于PDA培养基的印度梨形孢边缘菌丝用直径为5mm的打孔器打孔，将菌丝块接种于含PDA培养基的培养皿中培养，然后将培养皿置于恒温培养箱中，培养条件为:24h黑暗，25摄氏度，培养20天，选取培养皿边缘的新鲜、生长旺盛的菌丝作为印度梨形孢接种菌块。
（3）文心兰“南西”与印度梨形孢真菌的共培养
选取上述培养好的印度梨形孢真菌菌块置于文心兰组培瓶中，距离文心兰根部约1cm的位置，共培养15天。培养条件为白天22摄氏度，光照培养16个小时；晚上18摄氏度，黑暗培养8小时。观察文心兰“南西”的生长情况。
（4）文心兰“南西”组培苗的出瓶培养
一般共培养15天后，印度梨形孢真菌即可成功侵染文心兰，与文心兰根部共生；若延长共培养的时间到30-40天，印度梨形孢真菌对“南西”的生长有促进作用，没有不良反应。共培养后的组培苗可出瓶，放置于温室中生长。
在夏季高温季节，温室湿度通常在80-90%左右，“南西”对照植株软腐病发病率非常高，可达50%以上，而印度梨形孢共培养的文心兰“南西”植株发病率在10%左右，软腐病发病率比对照降低了80%【计算方法：（对照发病率-共培养株发病率)/对照发病率】，印度梨形孢共培养的文心兰“南西”植株的成活率比对照高30%以上。
实施例2
（1）文心兰“柠檬”组培小苗的培养。
以文心兰“柠檬”品系组培小苗为材料，培养基为ＭＳ培养基，每瓶苗数量为8棵。苗大小为4-5cm高，根数量为2-3根，根长为1-2cm左右，光照培养16小时，25摄氏度；黑暗培养8小时，20摄氏度，备用。
（2）印度梨形孢真菌的培养
将保存于PDA培养基的印度梨形孢边缘菌丝用直径为5mm的打孔器打孔，将菌丝块接种于含PDA培养基的培养皿中培养，然后将培养皿置于恒温培养箱中，培养条件为:24h黑暗，20摄氏度，培养20天，选取培养皿边缘的新鲜、生长旺盛的菌丝作为印度梨形孢接种菌块。
（3）文心兰“柠檬”与印度梨形孢真菌的共培养
选取上述培养好的印度梨形孢真菌菌块置于文心兰组培瓶中，距离文心兰根部约1.5cm的位置，共培养20天。培养条件为白天22摄氏度，光照培养16个小时；晚上18摄氏度，黑暗培养8小时。观察文心兰“柠檬”的生长情况。
（4）文心兰“柠檬”组培苗的出瓶培养
一般共培养20天后，印度梨形孢真菌即可成功侵染文心兰，与文心兰根部共生；若延长共培养的时间到30-40天，印度梨形孢真菌对“柠檬”的生长有促进作用，没有不良反应。共培养后的组培苗可出瓶，放置于温室中生长。
在夏季高温季节，温室湿度80-90%，“柠檬” 对照植株的软腐病发病率在40%左右，印度梨形孢共培养后的植株发病率在9%左右，软腐病发病率比对照降低77%【计算方法：（对照发病率-共培养株发病率)/对照发病率】。温室移栽3个月后，印度梨形孢共培养的文心兰“柠檬”植株的成活率比对照高28%。
Claims (5)
1. 一种文心兰的培养方法，其特征在于，所述的培养方法为以下步骤：
（1）采用MS培养基培养文心兰组培小苗
在组培瓶中采用组织无菌培养文心兰小苗，待小苗长到3~5cm高，有1~3个根时备用；
（2）采用固体PDA培养基培养印度梨形孢真菌
将印度梨形抱菌丝块接种于PDA培养基上,然后将培养皿置于培养箱中，培养20天后的印度梨形孢作为接种菌块；
（3）文心兰与印度梨形孢真菌的共培养
将步骤（2）培养好的印度梨形孢真菌菌块置于步骤（1）的文心兰组培瓶中，距离文心兰根部0.5~2cm的位置培养；
（4）文心兰组培苗的出瓶培养
共培养15天以后的组培苗可出瓶，放置于温室中生长。
2. 根据权利要求1所述的一种文心兰的培养方法，其特征在于，步骤（1）中组培瓶中培养条件为：光照培养16小时，20~28摄氏度；黑暗培养8小时，18~23摄氏度。
3. 根据权利要求1所述的一种文心兰的培养方法，其特征在于，步骤（2）中培养箱中的培养条件为：24h黑暗培养，20~25摄氏度。
4. 根据权利要求1所述的一种文心兰的培养方法，其特征在于，步骤（3）中培养条件为：光照培养16小时，20~28摄氏度；黑暗培养8小时，18~23摄氏度。
5. 根据权利要求1所述的一种文心兰的培养方法，其特征在于，步骤（4）中共培养15~30天。
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| CN201410265619.5A CN104221854A (zh) | 2014-06-16 | 2014-06-16 | 一种文心兰的培养方法 |
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| CN201410265619.5A CN104221854A (zh) | 2014-06-16 | 2014-06-16 | 一种文心兰的培养方法 |
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| CN (1) | CN104221854A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104885943A (zh) * | 2015-05-26 | 2015-09-09 | 福建农林大学 | 一种文心兰化学消毒组培方法 |
| CN107135952A (zh) * | 2017-07-13 | 2017-09-08 | 福建农林大学 | 一种促进香蕉组培苗生根和壮根的方法 |
| CN107881113A (zh) * | 2017-12-28 | 2018-04-06 | 三明市农业科学研究院 | 一种菌根真菌印度梨形孢的长期保存方法 |
| CN109329049A (zh) * | 2018-09-28 | 2019-02-15 | 江苏农林职业技术学院 | 一种白芨组培苗菌根化的方法 |
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- 2014-06-16 CN CN201410265619.5A patent/CN104221854A/zh active Pending
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