CN114793905A - 一种栀子组培苗的快繁方法和培养基 - Google Patents

一种栀子组培苗的快繁方法和培养基 Download PDF

Info

Publication number
CN114793905A
CN114793905A CN202210559815.8A CN202210559815A CN114793905A CN 114793905 A CN114793905 A CN 114793905A CN 202210559815 A CN202210559815 A CN 202210559815A CN 114793905 A CN114793905 A CN 114793905A
Authority
CN
China
Prior art keywords
gardenia
seedlings
culture medium
culture
tissue culture
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202210559815.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114793905B (zh
Inventor
姜武
段晓婧
陈家栋
李亚萍
张立华
陶正明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Subtropical Crop Research Institute South Zhejiang Forestry Research Institute
Original Assignee
Zhejiang Subtropical Crop Research Institute South Zhejiang Forestry Research Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Subtropical Crop Research Institute South Zhejiang Forestry Research Institute filed Critical Zhejiang Subtropical Crop Research Institute South Zhejiang Forestry Research Institute
Priority to CN202210559815.8A priority Critical patent/CN114793905B/zh
Publication of CN114793905A publication Critical patent/CN114793905A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114793905B publication Critical patent/CN114793905B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/002—Culture media for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G17/00—Cultivation of hops, vines, fruit trees, or like trees
    • A01G17/005—Cultivation methods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/10—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material
    • A01G24/12—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material containing soil minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/10—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material
    • A01G24/12—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material containing soil minerals
    • A01G24/15—Calcined rock, e.g. perlite, vermiculite or clay aggregates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/20—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing natural organic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G7/00—Botany in general
    • A01G7/06—Treatment of growing trees or plants, e.g. for preventing decay of wood, for tingeing flowers or wood, for prolonging the life of plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Forests & Forestry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明属于植物组织培养技术领域，本发明提供了一种栀子组培苗的快繁方法和培养基。本发明以栀子种子为外植体，进行无菌系的建立、栀子组培苗的增殖、生根及移栽培养。本发明采用种子诱导愈伤组织，然后再进行增殖和种子直接萌发，再增殖诱导栀子不定芽两种途径获得组培苗。通过本发明方法所得的栀子组培苗品质好，褐化和黄化现象明显较对比例低；组培苗移栽成活高；所培育的栀子不定芽增殖系数高，可达到4.2。本发明所获得的栀子组培苗能够保持母本的优良特性，发生变异的可能性较低，是遗传转化的绝佳材料。

Description

一种栀子组培苗的快繁方法和培养基
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种栀子组培苗的快繁方法和培养基。
背景技术
栀子(Gardenia jasminoides Ellis.)，又叫山栀、林兰，为茜草科栀子属的一种常绿矮化灌木，也是优质的盆栽观赏花卉，并且具有很高的药用价值。中国药典规定入药部位为其干燥成熟的果实，栀子不仅是优质的盆栽观赏花卉，而且具有护肝、利胆、止血、降压等药用功能，具有非常广泛的市场价值。栀子通常用压条、扦插等方式进行繁殖，但是繁殖系数低，并且受到季节的限制。组培技术的应用，不仅提高了繁殖系数，而且缩短了培养周期，为今后栀子的繁殖推广提供了技术保障。栀子的组织培养可以为栀子繁育提供新的途径，通过组织培养方式获得的栀子组培苗是研究栀子遗传变异和活性成分代谢途径的绝佳材料，在今后栀子合成生物学和分子遗传育种方面，栀子组培苗的培育都是不可或缺的关键一步。
栀子全果实、种子、果皮的栀子苷和西红花苷的含量较高，以这些器官为外植体进行细胞培养，有可能获得高含量的活性成分。木本植物的组织培养一般比较困难，迄今为止，有关桅子组织培养的报道大致分三类：第一类是由桅子带腋芽茎段的外植体不经愈伤组织的分化，直接获得桅子无菌苗；第二类是由胚轴、胚根、子叶、花苞作为外植体，诱导桅子愈伤组织，但未研究其分化；第三类是以栀子苗叶片为外植体，既诱导出愈伤组织，也成功使其分化。目前有以栀子生殖器官为外植体进行愈伤组织诱导，进而分化再生成苗的报道，但是培育的栀子组培苗大多品质不高，褐化现象严重，且组培苗移栽成活率较低。因此，如何对栀子的组织培养方式进行优化和改进以提高栀子组培苗的品质及移栽成活率，成为当前研究的关键问题。
发明内容
为克服现有技术中存在的上述缺陷，本发明提供了一种栀子组培苗的快繁方法和培养基。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种栀子组培苗的无菌培养基，所述无菌培养基以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：6-BA 1～3mg/L，NAA 0.1～0.3mg/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述无菌培养基的pH为5.8～6。
本发明还提供了一种栀子组培苗的增殖培养基，所述增殖培养基以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：6-BA 1～3mg/L，NAA 0.1～0.3mg/L，IBA 0.4～0.6mg/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述增殖培养基的pH为5.8～6。
本发明还提供了一种栀子组培苗的诱导培养基，所述诱导培养基以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：6-BA 2～4mg/L，IBA 0.1～0.3mg/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述诱导培养基的pH为5.8～6。
本发明还提供了一种栀子组培苗的壮苗培养基，所述壮苗培养基以WPM为基础培养基，包括以下浓度的组分：6-BA 2～4mg/L，NAA 0.05～0.15mg/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述壮苗培养基的pH为5.8～6。
本发明还提供了一种栀子组培苗的生根培养基，所述生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：NAA 0.4～0.6mg/L，活性炭0.4～0.6g/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述生根培养基的pH为5.8～6。
本发明还提供了一种栀子组培苗快繁的培养基组合，包括无菌培养基、增殖培养基、诱导培养基、壮苗培养基和生根培养基。
本发明还提供了一种栀子组培苗的快繁方法，包括如下步骤：
(1)将栀子种子置于无菌培养基中培养20～25d，得栀子无菌苗；
(2)将步骤(1)所得栀子无菌苗转接到增殖培养基中进行培养，每隔20～25d转接一次，连续转接4～6次，得栀子丛生芽；
(3)将步骤(1)所得栀子无菌苗的叶子置于诱导培养基中培养14～21d，得栀子愈伤组织；
(4)将步骤(2)所得的栀子丛生芽和步骤(3)所得的栀子愈伤组织置于壮苗培养基中培养14～28d，得栀子再生苗；
(5)将上述所得栀子再生苗置于生根培养基中进行培养，直至苗高为4～6cm，带有5～7条根，得栀子完整再生苗；
(6)对上述所得栀子完整再生苗依次进行封闭炼苗和通风炼苗，得栀子移栽苗；
(7)将上述所得栀子移栽苗的根部浸没于多菌灵溶液中，然后移入育苗基质中进行育苗培养，待苗高为10～12cm时移至大田，浇透水，并覆盖松针和干茅草，得栀子组培苗。
优选的，步骤(1)～步骤(5)中所述培养的温度独立为21～27℃，所述培养的光照强度独立为2500～3500lx，所述培养的光照时间独立为14～16h/d。
优选的，步骤(6)中所述封闭炼苗的时间为6～8d，所述通风炼苗的时间为1～3d。
优选的，步骤(7)中所述浸没的时间为20～30min，所述多菌灵溶液的浓度为20～40wt％；
所述育苗基质包括腐殖土、蛭石和河沙，所述腐殖土、蛭石和河沙的质量比为2～4:1～3:1～2；
所述覆盖的厚度为2～5cm，所述松针和干茅草的质量比为1～3:1。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
本发明以栀子种子为外植体，进行无菌系的建立、栀子组培苗的增殖、生根及移栽培养。本发明采用种子诱导愈伤组织，然后再进行增殖和种子直接萌发，再增殖诱导栀子不定芽两种途径获得组培苗。通过本发明方法所得的栀子组培苗品质好，褐化和黄化现象明显较对比例低；组培苗移栽成活高；所培育的栀子不定芽增殖系数高，可达到4.2。本发明所获得的栀子组培苗能够保持母本的优良特性，发生变异的可能性较低，是遗传转化的绝佳材料。此外本发明建立的栀子离体快繁技术体系不会被天气、季节等难控因素限制。因此它也具有生产效率高的优点，能够有效减少人力、财力的支出，且节省土地和繁殖材料，对长期使用无性繁殖，并开始退化的栀子品种也具有品种复壮的作用。本发明采用栀子组培方法繁殖，还可使个体发育向年轻阶段转化。
附图说明
图1为本发明所用的栀子成熟种子；
图2为本发明实施例2中栀子种子建立的无菌系；
图3为本发明实施例2获得的栀子无菌苗；
图4为本发明实施例2获得的栀子愈伤组织；
图5为本发明实施例2获得的栀子完整再生苗。
具体实施方式
本发明提供了一种栀子组培苗的无菌培养基，所述无菌培养基以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：6-BA 1～3mg/L，NAA 0.1～0.3mg/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述无菌培养基的pH为5.8～6。
在本发明中，所述栀子组培苗的无菌培养基中6-BA的浓度为1～3mg/L，进一步优选为1.8～2.2mg/L，更进一步优选为2mg/L；NAA的浓度为0.1～0.3mg/L，进一步优选为0.15～0.25mg/L，更进一步优选为0.2mg/L；琼脂的浓度为7～7.5g/L，进一步优选为7.2～7.4g/L，更进一步优选为7.3g/L；蔗糖的浓度为25～30g/L，进一步优选为27～28g/L，更进一步优选为27.5g/L；所述无菌培养基的pH为5.8～6，进一步优选为5.9。
本发明还提供了一种栀子组培苗的增殖培养基，所述增殖培养基以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：6-BA 1～3mg/L，NAA 0.1～0.3mg/L，IBA 0.4～0.6mg/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述增殖培养基的pH为5.8～6。
在本发明中，所述栀子组培苗的增殖培养基中6-BA的浓度为1～3mg/L，进一步优选为1.8～2.2mg/L，更进一步优选为2mg/L；NAA的浓度为0.1～0.3mg/L，进一步优选为0.15～0.25mg/L，更进一步优选为0.2mg/L；IBA的浓度为0.4～0.6mg/L，进一步优选为0.45～0.55mg/L，更进一步优选为0.5mg/L；琼脂的浓度为7～7.5g/L，进一步优选为7.2～7.4g/L，更进一步优选为7.3g/L；蔗糖的浓度为25～30g/L，进一步优选为27～28g/L，更进一步优选为27.5g/L；所述增殖培养基的pH为5.8～6，进一步优选为5.9。
本发明还提供了一种栀子组培苗的诱导培养基，所述诱导培养基以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：6-BA 2～4mg/L，IBA 0.1～0.3mg/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述诱导培养基的pH为5.8～6。
在本发明中，所述栀子组培苗的诱导培养基中6-BA的浓度为2～4mg/L，进一步优选为2.5～3.5mg/L，更进一步优选为3mg/L；IBA的浓度为0.1～0.3mg/L，进一步优选为0.18～0.22mg/L，更进一步优选为0.2mg/L；琼脂的浓度为7～7.5g/L，进一步优选为7.2～7.4g/L，更进一步优选为7.3g/L；蔗糖的浓度为25～30g/L，进一步优选为27～28g/L，更进一步优选为27.5g/L；所述增殖培养基的pH为5.8～6，进一步优选为5.9。
本发明还提供了一种栀子组培苗的壮苗培养基，所述壮苗培养基以WPM为基础培养基，包括以下浓度的组分：6-BA 2～4mg/L，NAA 0.05～0.15mg/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述壮苗培养基的pH为5.8～6。其中，WPM培养基的无机盐总含量较低，有利于减轻外植体的褐变，是防止产生褐化的适宜基本培养基。
在本发明中，所述栀子组培苗的壮苗培养基中6-BA的浓度为2～4mg/L，进一步优选为2.5～3.5mg/L，更进一步优选为3mg/L；NAA的浓度为0.05～0.15mg/L，进一步优选为0.08～0.12mg/L，更进一步优选为0.1mg/L；琼脂的浓度为7～7.5g/L，进一步优选为7.2～7.4g/L，更进一步优选为7.3g/L；蔗糖的浓度为25～30g/L，进一步优选为27～28g/L，更进一步优选为27.5g/L；所述增殖培养基的pH为5.8～6，进一步优选为5.9。
本发明还提供了一种栀子组培苗的生根培养基，所述生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：NAA 0.4～0.6mg/L，活性炭0.4～0.6g/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述生根培养基的pH为5.8～6。
在本发明中，所述栀子组培苗的生根培养基中NAA的浓度为0.4～0.6mg/L，进一步优选为0.45～0.55mg/L，更进一步优选为0.5mg/L；活性炭的浓度为0.4～0.6g/L，进一步优选为0.45～0.55g/L，更进一步优选为0.5g/L；琼脂的浓度为7～7.5g/L，进一步优选为7.2～7.4g/L，更进一步优选为7.3g/L；蔗糖的浓度为25～30g/L，进一步优选为27～28g/L，更进一步优选为27.5g/L；所述增殖培养基的pH为5.8～6，进一步优选为5.9。
本发明还提供了一种栀子组培苗快繁的培养基组合，包括无菌培养基、增殖培养基、诱导培养基、壮苗培养基和生根培养基。
本发明还提供了一种栀子组培苗的快繁方法，包括如下步骤：
(1)将栀子种子置于无菌培养基中培养20～25d，得栀子无菌苗；
(2)将步骤(1)所得栀子无菌苗转接到增殖培养基中进行培养，每隔20～25d转接一次，连续转接4～6次，得栀子丛生芽；
(3)将步骤(1)所得栀子无菌苗的叶子置于诱导培养基中培养14～21d，得栀子愈伤组织；
(4)将步骤(2)所得的栀子丛生芽和步骤(3)所得的栀子愈伤组织置于壮苗培养基中培养14～28d，得栀子再生苗；
(5)将上述所得栀子再生苗置于生根培养基中进行培养，直至苗高为4～6cm，带有5～7条根，得栀子完整再生苗；
(6)对上述所得栀子完整再生苗依次进行封闭炼苗和通风炼苗，得栀子移栽苗；
(7)将上述所得栀子移栽苗的根部浸没于多菌灵溶液中，然后移入育苗基质中进行育苗培养，待苗高为10～12cm时移至大田，浇透水，并覆盖松针和干茅草，得栀子组培苗。
在本发明中，步骤(1)中所述培养20～25d，进一步优选为培养23d。
在本发明中，步骤(1)～步骤(5)中所述培养的温度独立优选为21～27℃，进一步优选为23～25℃，更进一步优选为24℃；所述培养的光照强度独立优选为2500～3500lx，进一步优选为2800～3200lx，更进一步优选为3000lx；所述培养的光照时间独立优选为14～16h/d，进一步优选为15h/d。
在本发明中，步骤(2)中所述每隔20～25d转接一次，连续转接4～6次，进一步优选为每隔23d转接一次，连续转接5次。
在本发明中，步骤(3)中所述将步骤(1)所得栀子无菌苗的叶子置于诱导培养基中培养14～21d，进一步优选将步骤(1)所得栀子无菌苗的叶子置于诱导培养基中培养16～19d，更进一步优选将步骤(1)所得栀子无菌苗的叶子置于诱导培养基中培养17d。
在本发明中，步骤(4)中所述置于壮苗培养基中培养14～28d，进一步优选置于壮苗培养基中培养18～24d，更进一步优选置于壮苗培养基中培养21d。
在本发明中，步骤(5)中所述直至苗高为4～6cm，带有5～7条根，进一步优选为直至苗高为5cm，带有6条根。
在本发明中，步骤(6)中所述封闭炼苗的时间优选为6～8d，进一步优选为7d；所述通风炼苗的时间优选为1～3d，进一步优选为2d。
在本发明中，步骤(7)中所述浸没的时间优选为20～30min，进一步优选为24～26min，更进一步优选为25min；所述多菌灵溶液的浓度优选为20～40wt％，进一步优选为25～35wt％，更进一步优选为30wt％。
在本发明中，步骤(7)中所述育苗基质优选包括腐殖土、蛭石和河沙，所述腐殖土、蛭石和河沙的质量比优选为2～4:1～3:1～2，进一步优选为3:2:1。
在本发明中，步骤(7)中所述待苗高为10～12cm时移至大田，进一步优选为待苗高为11cm时移至大田。
在本发明中，步骤(7)中所述覆盖的厚度优选为2～5cm，进一步优选为3～4cm，更进一步优选为3.5cm；所述松针和干茅草的质量比优选为1～3:1，进一步优选为2:1。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
以下实施例和对比例中的栀子品种为“温栀1号”。
实施例1
(1)以栀子种子为外植体，先用洗衣粉水(洗衣粉和水的用量比为3g:1L)清洗，再用流水冲洗后，吸干顶芽表面的水，然后用浓度为75vt％的酒精震荡消毒30s，再用无菌水冲洗1次，之后用浓度为0.1wt％的升汞浸泡6min，期间不断摇晃，使其消毒更加彻底，再用无菌水冲洗4次，然后将其置于无菌滤纸上吸干水分，得处理后的栀子种子。
(2)将上述处理后的栀子种子置于无菌培养基中(所述无菌培养基为MS+6-BA1mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂7g/L+蔗糖25g/L，所述无菌培养基的pH为5.8)培养20d，得栀子无菌苗；
(3)将步骤(2)所得栀子无菌苗转接到增殖培养基(所述增殖培养基为MS+6-BA1mg/L+NAA 0.1mg/L+IBA 0.4mg/L+琼脂7g/L+蔗糖25g/L，所述增殖培养基的pH为5.8)中进行培养，每隔20d转接一次，连续转接4次，得栀子丛生芽；
(4)将步骤(2)所得栀子无菌苗的叶子置于诱导培养基(所述诱导培养基为MS+6-BA2mg/L+IBA 0.1mg/L+琼脂7g/L+蔗糖25g/L，所述诱导培养基的pH为5.8)中培养14d，得栀子愈伤组织；
(5)将步骤(3)所得的栀子丛生芽和步骤(4)所得的栀子愈伤组织置于壮苗培养基(所述壮苗培养基为WPM+6-BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+琼脂7g/L+蔗糖25g/L，所述壮苗培养基的pH为5.8)中培养14d，得栀子再生苗；
(6)将上述所得栀子再生苗置于生根培养基(所述生根培养基为1/2MS+NAA0.4mg/L+活性炭0.4g/L+琼脂7g/L+蔗糖25g/L，所述生根培养基的pH为5.8)中进行培养，直至苗高为4cm，带有5条根，得栀子完整再生苗；步骤(2)～步骤(6)中所述培养的温度均为21℃，所述培养的光照强度均为2500lx，所述培养的光照时间均为14h/d；
(7)对上述所得栀子完整再生苗依次进行封闭炼苗6d和通风炼苗1d，得栀子移栽苗；
(8)将上述所得栀子移栽苗根部的培养基洗净，随后将根部浸没于浓度为20wt％的多菌灵溶液中，然后移入含有育苗基质(所述育苗基质为腐殖土、蛭石和河沙的混合物，所述腐殖土、蛭石和河沙的质量比为2:1:1)的育苗穴盘中进行培养，在有遮阳网的塑料拱棚条件下过渡。待苗高为10cm时移至室外大田，移栽时间选择下午5:00，浇透水，并覆盖2cm厚的松针和干茅草(所述松针和干茅草的质量比为1:1)进行遮阳，得栀子组培苗。
实施例2
(1)以栀子种子为外植体，先用洗衣粉水(洗衣粉和水的用量比为3g:1L)清洗，再用流水冲洗后，吸干顶芽表面的水，然后用浓度为75vt％的酒精震荡消毒30s，再用无菌水冲洗1次，之后用浓度为0.1wt％的升汞浸泡6min，期间不断摇晃，使其消毒更加彻底，再用无菌水冲洗4次，然后将其置于无菌滤纸上吸干水分，得处理后的栀子种子。
(2)将上述处理后的栀子种子置于无菌培养基中(所述无菌培养基为MS+6-BA2mg/L+NAA 0.2mg/L+琼脂7.3g/L+蔗糖27.5g/L，所述无菌培养基的pH为5.9)培养23d，得栀子无菌苗；
(3)将步骤(2)所得栀子无菌苗转接到增殖培养基(所述增殖培养基为MS+6-BA2mg/L+NAA 0.2mg/L+IBA 0.5mg/L+琼脂7.3g/L+蔗糖27.5g/L，所述增殖培养基的pH为5.9)中进行培养，每隔23d转接一次，连续转接5次，得栀子丛生芽；
(4)将步骤(2)所得栀子无菌苗的叶子置于诱导培养基(所述诱导培养基为MS+6-BA 3mg/L+IBA 0.2mg/L+琼脂7.3g/L+蔗糖27.5g/L，所述诱导培养基的pH为5.9)中培养17d，得栀子愈伤组织；
(5)将步骤(3)所得的栀子丛生芽和步骤(4)所得的栀子愈伤组织置于壮苗培养基(所述壮苗培养基为WPM+6-BA 3mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂7.3g/L+蔗糖27.5g/L，所述壮苗培养基的pH为5.9)中培养21d，得栀子再生苗；
(6)将上述所得栀子再生苗置于生根培养基(所述生根培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+活性炭0.5g/L+琼脂7.3g/L+蔗糖27.5g/L，所述生根培养基的pH为5.9)中进行培养，直至苗高为5cm，带有6条根，得栀子完整再生苗；步骤(2)～步骤(6)中所述培养的温度均为24℃，所述培养的光照强度均为3000lx，所述培养的光照时间均为15h/d；
(7)对上述所得栀子完整再生苗依次进行封闭炼苗7d和通风炼苗2d，得栀子移栽苗；
(8)将上述所得栀子移栽苗根部的培养基洗净，随后将根部浸没于浓度为30wt％的多菌灵溶液中，然后移入含有育苗基质(所述育苗基质为腐殖土、蛭石和河沙的混合物，所述腐殖土、蛭石和河沙的质量比为3:2:1)的育苗穴盘中进行培养，在有遮阳网的塑料拱棚条件下过渡。待苗高为11cm时移至室外大田，移栽时间选择下午5:30，浇透水，并覆盖3.5cm厚的松针和干茅草(所述松针和干茅草的质量比为2:1)进行遮阳，得栀子组培苗。
实施例3
(1)以栀子种子为外植体，先用洗衣粉水(洗衣粉和水的用量比为3g:1L)清洗，再用流水冲洗后，吸干顶芽表面的水，然后用浓度为75vt％的酒精震荡消毒30s，再用无菌水冲洗1次，之后用浓度为0.1wt％的升汞浸泡6min，期间不断摇晃，使其消毒更加彻底，再用无菌水冲洗4次，然后将其置于无菌滤纸上吸干水分，得处理后的栀子种子。
(2)将上述处理后的栀子种子置于无菌培养基中(所述无菌培养基为MS+6-BA3mg/L+NAA 0.3mg/L+琼脂7.5g/L+蔗糖30g/L，所述无菌培养基的pH为6)培养25d，得栀子无菌苗；
(3)将步骤(2)所得栀子无菌苗转接到增殖培养基(所述增殖培养基为MS+6-BA3mg/L+NAA 0.3mg/L+IBA 0.6mg/L+琼脂7.5g/L+蔗糖30g/L，所述增殖培养基的pH为6)中进行培养，每隔25d转接一次，连续转接6次，得栀子丛生芽；
(4)将步骤(2)所得栀子无菌苗的叶子置于诱导培养基(所述诱导培养基为MS+6-BA 4mg/L+IBA 0.3mg/L+琼脂7.5g/L+蔗糖30g/L，所述诱导培养基的pH为6)中培养21d，得栀子愈伤组织；
(5)将步骤(3)所得的栀子丛生芽和步骤(4)所得的栀子愈伤组织置于壮苗培养基(所述壮苗培养基为WPM+6-BA 4mg/L+NAA 0.15mg/L+琼脂7.5g/L+蔗糖30g/L，所述壮苗培养基的pH为6)中培养28d，得栀子再生苗；
(6)将上述所得栀子再生苗置于生根培养基(所述生根培养基为1/2MS+NAA0.6mg/L+活性炭0.6g/L+琼脂7.5g/L+蔗糖30g/L，所述生根培养基的pH为6)中进行培养，直至苗高为6cm，带有7条根，得栀子完整再生苗；步骤(2)～步骤(6)中所述培养的温度均为27℃，所述培养的光照强度均为3500lx，所述培养的光照时间均为16h/d；
(7)对上述所得栀子完整再生苗依次进行封闭炼苗8d和通风炼苗3d，得栀子移栽苗；
(8)将上述所得栀子移栽苗根部的培养基洗净，随后将根部浸没于浓度为40wt％的多菌灵溶液中，然后移入含有育苗基质(所述育苗基质为腐殖土、蛭石和河沙的混合物，所述腐殖土、蛭石和河沙的质量比为4:3:2)的育苗穴盘中进行培养，在有遮阳网的塑料拱棚条件下过渡。待苗高为12cm时移至室外大田，移栽时间选择下午6:00，浇透水，并覆盖5cm厚的松针和干茅草(所述松针和干茅草的质量比为3:1)进行遮阳，得栀子组培苗。
对比例1
(1)以在野外获得的栀子腋芽为外植体建立无菌系，所述腋芽培养缓冲培养基为MS培养基，获得的腋芽培养无菌苗转接到增殖培养基(所述增殖培养基为MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L)中进行培养，每隔23d转接一次，连续转接4次，得到栀子丛生芽；
(2)将步骤(1)获得的栀子丛生芽转接到壮苗和生根培养基(所述壮苗培养基为MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.1mg/L；所述生根培养基为1/2MS+NAA 0.5mg/L)中培养30d，得到栀子组培苗。以上培养基的pH均为5.9，均需要加琼脂7.3g/L，蔗糖27.5g/L，所述培养条件均为温度24℃，光强为3000lx；光照时间为15h/d。
实验例1
以本发明实施例2为实验组，以对比例1为对照组，研究不同方法对栀子组培苗的影响，结果如表1、表2和表3所示。
表1不同方法对栀子组培苗品质的影响
Figure BDA0003656096370000111
表2不同方法对栀子组培苗褐化和黄化现象的影响
Figure BDA0003656096370000112
表3不同方法对栀子组培苗移栽成活率的影响
Figure BDA0003656096370000113
由表1、表2和表3可知，与对比例1相比，本发明实施例2所得的栀子组培苗品质更好，褐化和黄化现象明显较低，且组培苗移栽成活高，栀子不定芽增殖系数也更高，可达4.2。
综上所述，本发明所获得的栀子组培苗能够保持母本的优良特性，发生变异的可能性较低，是遗传转化的绝佳材料。此外，本发明建立的栀子离体快繁技术体系不会被天气、季节等难控因素限制。因此它也具有生产效率高的优点，能够有效减少人力、财力的支出，节省土地和繁殖材料，对长期使用无性繁殖，并开始退化的栀子品种也具有品种复壮的作用。且本发明方法可使栀子个体发育向年轻阶段转化。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种栀子组培苗的无菌培养基，其特征在于，所述无菌培养基以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：6-BA 1～3mg/L，NAA 0.1～0.3mg/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述无菌培养基的pH为5.8～6。
2.一种栀子组培苗的增殖培养基，其特征在于，所述增殖培养基以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：6-BA 1～3mg/L，NAA 0.1～0.3mg/L，IBA 0.4～0.6mg/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述增殖培养基的pH为5.8～6。
3.一种栀子组培苗的诱导培养基，其特征在于，所述诱导培养基以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：6-BA 2～4mg/L，IBA 0.1～0.3mg/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述诱导培养基的pH为5.8～6。
4.一种栀子组培苗的壮苗培养基，其特征在于，所述壮苗培养基以WPM为基础培养基，包括以下浓度的组分：6-BA2～4mg/L，NAA 0.05～0.15mg/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述壮苗培养基的pH为5.8～6。
5.一种栀子组培苗的生根培养基，其特征在于，所述生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：NAA 0.4～0.6mg/L，活性炭0.4～0.6g/L，琼脂7～7.5g/L和蔗糖25～30g/L，所述生根培养基的pH为5.8～6。
6.一种栀子组培苗快繁的培养基组合，其特征在于，包括权利要求1～5所述的无菌培养基、增殖培养基、诱导培养基、壮苗培养基和生根培养基。
7.一种栀子组培苗的快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将栀子种子置于权利要求1所述的无菌培养基中培养20～25d，得栀子无菌苗；
(2)将步骤(1)所得栀子无菌苗转接到权利要求2所述的增殖培养基中进行培养，每隔20～25d转接一次，连续转接4～6次，得栀子丛生芽；
(3)将步骤(1)所得栀子无菌苗的叶子置于权利要求3所述的诱导培养基中培养14～21d，得栀子愈伤组织；
(4)将步骤(2)所得的栀子丛生芽和步骤(3)所得的栀子愈伤组织置于权利要求4所述的壮苗培养基中培养14～28d，得栀子再生苗；
(5)将上述所得栀子再生苗置于权利要求5所述的生根培养基中进行培养，直至苗高为4～6cm，带有5～7条根，得栀子完整再生苗；
(6)对上述所得栀子完整再生苗依次进行封闭炼苗和通风炼苗，得栀子移栽苗；
(7)将上述所得栀子移栽苗的根部浸没于多菌灵溶液中，然后移入育苗基质中进行育苗培养，待苗高为10～12cm时移至大田，浇透水，并覆盖松针和干茅草，得栀子组培苗。
8.根据权利要求7所述的一种栀子组培苗的快繁方法，其特征在于，步骤(1)～步骤(5)中所述培养的温度独立为21～27℃，所述培养的光照强度独立为2500～3500lx，所述培养的光照时间独立为14～16h/d。
9.根据权利要求7或8所述的一种栀子组培苗的快繁方法，其特征在于，步骤(6)中所述封闭炼苗的时间为6～8d，所述通风炼苗的时间为1～3d。
10.根据权利要求9所述的一种栀子组培苗的快繁方法，其特征在于，步骤(7)中所述浸没的时间为20～30min，所述多菌灵溶液的浓度为20～40wt％；
所述育苗基质包括腐殖土、蛭石和河沙，所述腐殖土、蛭石和河沙的质量比为2～4:1～3:1～2；
所述覆盖的厚度为2～5cm，所述松针和干茅草的质量比为1～3:1。
CN202210559815.8A 2022-05-23 2022-05-23 一种栀子组培苗的快繁方法和培养基 Active CN114793905B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210559815.8A CN114793905B (zh) 2022-05-23 2022-05-23 一种栀子组培苗的快繁方法和培养基

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210559815.8A CN114793905B (zh) 2022-05-23 2022-05-23 一种栀子组培苗的快繁方法和培养基

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114793905A true CN114793905A (zh) 2022-07-29
CN114793905B CN114793905B (zh) 2022-11-04

Family

ID=82516465

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210559815.8A Active CN114793905B (zh) 2022-05-23 2022-05-23 一种栀子组培苗的快繁方法和培养基

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114793905B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116019011A (zh) * 2023-03-06 2023-04-28 浙江省亚热带作物研究所(浙南林业科学研究院) 一种栀子同源四倍体的诱导方法
CN116326479A (zh) * 2023-03-17 2023-06-27 德兴市中医研究院试验培训基地 一种通过愈伤组织诱导得到茜草组培苗的培养方法
CN116616179A (zh) * 2023-06-02 2023-08-22 江西省林业科学院 一种高栀子苷含量的江栀子优良无性系的组培快繁方法
CN117158315A (zh) * 2023-05-19 2023-12-05 淮南师范学院 一种小叶栀子的组织培养方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102090336A (zh) * 2010-12-13 2011-06-15 江苏省中国科学院植物研究所 一种杜衡组织培养的繁殖方法
CN102405838A (zh) * 2011-09-22 2012-04-11 董永武 一种栀子花组织培育及其无公害种植方法
CN103430844A (zh) * 2013-08-13 2013-12-11 广州白云山明兴制药有限公司 栀子组织培养的方法
CN103461127A (zh) * 2013-09-17 2013-12-25 南京通泽农业科技有限公司 一种山栀子的快速繁殖方法
CN106069784A (zh) * 2016-08-10 2016-11-09 福建省农业科学院果树研究所 一种大花栀子花苞的组织培养方法
CN110999782A (zh) * 2019-11-10 2020-04-14 六安市裕安区天缘中药材种植专业合作社 一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法
CN112616674A (zh) * 2021-01-08 2021-04-09 南京农业大学 一种玫瑰红景天组培快繁的诱导增殖培养基及组培快繁的方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102090336A (zh) * 2010-12-13 2011-06-15 江苏省中国科学院植物研究所 一种杜衡组织培养的繁殖方法
CN102405838A (zh) * 2011-09-22 2012-04-11 董永武 一种栀子花组织培育及其无公害种植方法
CN103430844A (zh) * 2013-08-13 2013-12-11 广州白云山明兴制药有限公司 栀子组织培养的方法
CN103461127A (zh) * 2013-09-17 2013-12-25 南京通泽农业科技有限公司 一种山栀子的快速繁殖方法
CN106069784A (zh) * 2016-08-10 2016-11-09 福建省农业科学院果树研究所 一种大花栀子花苞的组织培养方法
CN110999782A (zh) * 2019-11-10 2020-04-14 六安市裕安区天缘中药材种植专业合作社 一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法
CN112616674A (zh) * 2021-01-08 2021-04-09 南京农业大学 一种玫瑰红景天组培快繁的诱导增殖培养基及组培快繁的方法

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
IMAN M. EL-SAYED等: "OPTIMIZATION OF MICROPROPAGATION PROTOCOL AND SECONDARY METABOLITES OF GARDENIA JASMINOIDES PLANT", 《PLANT ARCHIVES》 *
吴丽芳等: "不同基质对密闭培养下栀子组培苗移栽成活率的影响", 《江苏农业科学》 *
夏咛等: "福建黄栀的组培快繁技术研究", 《现代农业科技》 *
崔思然等: "栀子优良品种快繁体系的建立", 《中国农学通报》 *
彭远英等: "栀子组织培养一步成苗", 《园艺学报》 *
曾妮等: "栀子腋芽丛生离体繁殖及开花诱导", 《四川大学学报(自然科学版)》 *
田亚等: "栀子叶片愈伤组织诱导优化研究", 《世界中医药》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116019011A (zh) * 2023-03-06 2023-04-28 浙江省亚热带作物研究所(浙南林业科学研究院) 一种栀子同源四倍体的诱导方法
CN116019011B (zh) * 2023-03-06 2023-11-24 浙江省亚热带作物研究所(浙南林业科学研究院) 一种栀子同源四倍体的诱导方法
CN116326479A (zh) * 2023-03-17 2023-06-27 德兴市中医研究院试验培训基地 一种通过愈伤组织诱导得到茜草组培苗的培养方法
CN117158315A (zh) * 2023-05-19 2023-12-05 淮南师范学院 一种小叶栀子的组织培养方法
CN116616179A (zh) * 2023-06-02 2023-08-22 江西省林业科学院 一种高栀子苷含量的江栀子优良无性系的组培快繁方法
CN116616179B (zh) * 2023-06-02 2024-02-13 江西省林业科学院 一种高栀子苷含量的江栀子优良无性系的组培快繁方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN114793905B (zh) 2022-11-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114793905B (zh) 一种栀子组培苗的快繁方法和培养基
CN101647393A (zh) 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法
CN105104203A (zh) 一种非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法
CN109287483B (zh) 一种大叶绣球容器苗快速培育的方法
CN111616052A (zh) 一种苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法、应用
CN104885773A (zh) 一种快速培育蓝莓早期定型组培商品苗的方法
CN102283126A (zh) 一种中山杉品种302的组织培养繁殖方法
CN106386478A (zh) 一种楠木组培快繁方法
CN103444531A (zh) 一种金丝楠木组织培养的快繁方法
CN107683770A (zh) 一种矾根‘抹茶’种苗的培育方法
CN102144543A (zh) 一项铁线莲阿拉贝拉组织培养快繁技术
CN113243295B (zh) 朱顶红组培繁育方法
CN105145363B (zh) 一种显著提高杉木组培生产出苗率的方法
CN107197746A (zh) 一种杉木野外优异资源的繁育方法
CN117256472A (zh) 一种粉花大花蒂牡花茎段组培快繁育苗方法
CN102119663A (zh) 一项铁线莲茱莉亚组织培养快繁技术
CN106386499A (zh) 一种土田七的组织培养快速繁殖方法
CN107006367B (zh) 一种‘阳光’樱组培快繁方法
CN111758573B (zh) 一种美味猕猴桃砧木组培快繁方法
CN107960328B (zh) 一种余甘子组织培养的方法
CN111374057A (zh) 一种耐寒丰花月季环保高效微繁殖方法
CN111919751A (zh) 一种千里香种子组织培养的方法
CN105123519B (zh) 地被银桦组织培养的方法
CN117581788B (zh) 一种简单的西番莲属种质长期离体保存的方法
CN113287519B (zh) 矮生碗柱草组织培养用培养基、组织培养方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant