CN110999782A - 一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，该方法包括如下步骤：原料准备：选材、准备培养基、配置培养液、放置营养液、分化培养、增殖培养、生根培养和移植，本发明通过五个步骤，以水栀子的茎部组织作为外植体，进行植株再生和快速繁殖，方法的步骤简单易操作，提高了水栀子的培养和繁殖速度和效率。

Description

一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法
技术领域
本发明涉及植物培养技术领域，尤其涉及一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法。
背景技术
水栀子为茜草科，又名雀舌栀子。常绿小灌木，干灰色，小枝绿色。叶对生或三枚轮生，倒卵状长椭圆形，叶小，革质而有光泽，全缘。花单生枝顶或叶腋，白色，浓香，花小，重瓣。花期6-8月，果熟期10月。
水栀子叶色亮绿，四季常青，夏日开花洁白、芳香，又有一定的耐阴及抗有毒气体的能力，故为优良的绿化、美化、香化树种。可丛植或配于林缘、树下及建筑物周围，也可作花篱用。水栀子又系重要切花，国内多用于佩带，国外则为名贵的花束材料。此外，果可作染料，还能消炎解毒。
水栀子在药用和观赏方面的应用已引起了人们的广泛关注，但目前主要用扦插和压条的方法来繁殖，繁殖系数较小且常发生“缺绿病”。因此，利用组织培养技术来提高水栀子的繁殖速度和苗木质量具有十分重要的意义。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，以水栀子的茎部组织作为外植体，进行植株再生和快速繁殖，方法的步骤简单易操作，提高了水栀子的培养和繁殖速度和效率。
本发明提出的一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，该方法包括如下步骤：
一、选材：选取当年生的水栀子的幼嫩茎段进行消毒杀菌处理，消毒杀菌后放置再铺有滤纸的培养皿中进行培养；
二、准备培养基：准备三个培养基，分别为分化培养基、增殖培养基和生根培养基；
三、配置营养液：分化培养基：硝酸铵溶液、硝酸钾溶液，二水氯化钙溶液、蔗糖和琼脂；增殖培养基：维生素溶液，蔗糖溶液，激动素溶液和琼脂；生根培养基：萘乙酸，10％椰子汁，活性炭，蔗糖和琼脂。
四、放置营养液：将步骤三中配置的营养液进行灭菌，灭菌结束后将其放置在培养室内；
五、分化培养：将步骤一种经过消毒杀菌处理的水栀子幼嫩茎段放入步骤三中的分化培养基中进行初次培养，得到水栀子不定芽；
六、增殖培养：将步骤五中得到的水栀子不定芽切成水栀子小段并放入步骤三中的增殖培养基中进行培养得到水栀子嫩茎；
七、生根培养：将步骤六中的增殖培养所得的水栀子嫩茎放入生根培养基中进行培养得到水栀子试管苗；
八、移植：将步骤七中得到的水栀子试管苗移栽至泥土中。
所述步骤四中的灭菌时间至少为20分钟。
所述步骤一种的培养皿和滤纸在放入水栀子幼嫩茎段之前均经过高温灭菌。
所述步骤四中的培养室的温度为20±2℃，每日光照16h，光照强度为 2000lx。
所述步骤六中的水栀子小段的长度为1.5cm-2.5cm。
所述步骤八中移植之前将水栀子试管苗在不打开生根培养基的情况下在培养室内放置5天，然后在打开生根培养基的情况下再在培养室内放置2天。
所述步骤八中的泥土由80％的砂泥和20％的粘土混合而成。
本发明提供的一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法的优点在于：选用水栀子的茎部组织作为外植体，进行植株再生和快速繁殖，方法的步骤简单易操作，提高了水栀子的培养和繁殖速度和效率；本发明通过步骤一中对水栀子的幼嫩茎段以及培养皿和滤纸进行消毒杀菌处理，有效防止了幼嫩茎段上原有的细菌影响茎段的发育和成长；通过设置培养室中适宜的温度和光照，有利于促进水栀子幼嫩茎段的成长；通过设置步骤八中80％的砂泥和20％的粘土作为水栀子的栽培土，砂泥和粘土中的营养成分能很好地促进水栀子试管苗的发育和成长，提高水栀子组织培养和快速繁殖的效率。
说明书附图
图1发明的方法流程图。
具体实施方式
如图1所示，图1为本发明公开的一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，以水栀子的茎部组织作为外植体，进行植株再生和快速繁殖，方法的步骤简单易操作，提高了水栀子的培养和繁殖速度和效率。
实施例一
一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，该方法包括如下步骤：
一、选材：选取当年生的水栀子的幼嫩茎段进行消毒杀菌处理，消毒杀菌前先将茎段表面的灰尘用清水处理干净，再用酒精溶液浸泡2分钟，浸泡过后，再用无菌水冲洗2遍，消毒杀菌后放置再铺有滤纸的培养皿中进行培养；
二、准备培养基：准备三个培养基，分别为分化培养基、增殖培养基和生根培养基，对这三个培养基进行清洗、消毒、灭菌和干燥；
三、配置营养液：分化培养基：硝酸铵溶液33000mg/l、硝酸钾溶液38000mg/l，二水氯化钙溶液8800mg/l、蔗糖30g/l和琼脂8g/l；增殖培养基：维生素溶液 25000mg/l，蔗糖溶液20g/l，激动素溶液5000mg/l和琼脂5g/l；生根培养基：萘乙酸0.5mg/l，10％椰子汁20g/l，活性炭0.4g/l，蔗糖30g/l和琼脂5g/l。
四、放置营养液：将步骤三中配置的营养液放到1kg/cm2的压力和130℃的温度环境下进行灭菌，灭菌结束后将其放置在培养室内；
五、分化培养：将步骤一种经过消毒杀菌处理的水栀子幼嫩茎段放入步骤三中的分化培养基中进行初次培养，得到水栀子不定芽；
六、增殖培养：将步骤五中得到的水栀子不定芽切成水栀子小段并放入步骤三中的增殖培养基中进行培养得到水栀子嫩茎，培养时间为三周；
七、生根培养：将步骤六中的增殖培养所得的水栀子嫩茎放入生根培养基中进行培养得到水栀子试管苗，培养时间为二十天；
八、移植：将步骤七中得到的水栀子试管苗移栽至泥土中。
所述步骤四中的灭菌时间至少为20分钟。
所述步骤一种的培养皿和滤纸在放入水栀子幼嫩茎段之前均经过高温灭菌。这样防止培养皿本身所携带的细菌影响水栀子幼嫩茎段的分化。
所述步骤四中的培养室的温度为18，每日光照16h，光照强度为2000lx。适宜的光照和温度有利于促进水栀子幼嫩茎段的成长。
所述步骤六中的水栀子小段的长度为1.5cm。
所述步骤八中移植之前将水栀子试管苗在不打开生根培养基的情况下在培养室内放置5天，然后在打开生根培养基的情况下再在培养室内放置2天。
所述步骤八中的泥土由80％的砂泥和20％的粘土混合而成。
实施例二
一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，该方法包括如下步骤：
一、选材：选取当年生的水栀子的幼嫩茎段进行消毒杀菌处理，消毒杀菌前先将茎段表面的灰尘用清水处理干净，再用酒精溶液浸泡3分钟，浸泡过后，再用无菌水冲洗3遍，消毒杀菌后放置再铺有滤纸的培养皿中进行培养；
二、准备培养基：准备三个培养基，分别为分化培养基、增殖培养基和生根培养基，对这三个培养基进行清洗、消毒、灭菌和干燥；
三、配置营养液：分化培养基：硝酸铵溶液33000mg/l、硝酸钾溶液38000mg/l，二水氯化钙溶液8800mg/l、蔗糖30g/l和琼脂8g/l；增殖培养基：维生素溶液 25000mg/l，蔗糖溶液20g/l，激动素溶液5000mg/l和琼脂5g/l；生根培养基：萘乙酸0.5mg/l，10％椰子汁20g/l，活性炭0.4g/l，蔗糖30g/l和琼脂5g/l。
四、放置营养液：将步骤三中配置的营养液放到1kg/cm2的压力和130℃的温度环境下进行灭菌，灭菌结束后将其放置在培养室内；
五、分化培养：将步骤一种经过消毒杀菌处理的水栀子幼嫩茎段放入步骤三中的分化培养基中进行初次培养，得到水栀子不定芽；
六、增殖培养：将步骤五中得到的水栀子不定芽切成水栀子小段并放入步骤三中的增殖培养基中进行培养得到水栀子嫩茎，培养时间为四周；
七、生根培养：将步骤六中的增殖培养所得的水栀子嫩茎放入生根培养基中进行培养得到水栀子试管苗，培养时间为二十五天；
八、移植：将步骤七中得到的水栀子试管苗移栽至泥土中。
所述步骤四中的灭菌时间至少为20分钟。
所述步骤一种的培养皿和滤纸在放入水栀子幼嫩茎段之前均经过高温灭菌。这样防止培养皿本身所携带的细菌影响水栀子幼嫩茎段的分化。
所述步骤四中的培养室的温度为20℃，每日光照16h，光照强度为2000lx。适宜的光照和温度有利于促进水栀子幼嫩茎段的成长。
所述步骤六中的水栀子小段的长度为2cm。
所述步骤八中移植之前将水栀子试管苗在不打开生根培养基的情况下在培养室内放置5天，然后在打开生根培养基的情况下再在培养室内放置2天。
所述步骤八中的泥土由80％的砂泥和20％的粘土混合而成。
实施例三
一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，该方法包括如下步骤：
一、选材：选取当年生的水栀子的幼嫩茎段进行消毒杀菌处理，消毒杀菌前先将茎段表面的灰尘用清水处理干净，再用酒精溶液浸泡4分钟，浸泡过后，再用无菌水冲洗4遍，消毒杀菌后放置再铺有滤纸的培养皿中进行培养；
二、准备培养基：准备三个培养基，分别为分化培养基、增殖培养基和生根培养基，对这三个培养基进行清洗、消毒、灭菌和干燥；
三、配置营养液：分化培养基：硝酸铵溶液33000mg/l、硝酸钾溶液38000mg/l，二水氯化钙溶液8800mg/l、蔗糖30g/l和琼脂8g/l；增殖培养基：维生素溶液 25000mg/l，蔗糖溶液20g/l，激动素溶液5000mg/l和琼脂5g/l；生根培养基：萘乙酸0.5mg/l，10％椰子汁20g/l，活性炭0.4g/l，蔗糖30g/l和琼脂5g/l。
四、放置营养液：将步骤三中配置的营养液放到1kg/cm2的压力和130℃的温度环境下进行灭菌，灭菌结束后将其放置在培养室内；
五、分化培养：将步骤一种经过消毒杀菌处理的水栀子幼嫩茎段放入步骤三中的分化培养基中进行初次培养，得到水栀子不定芽；
六、增殖培养：将步骤五中得到的水栀子不定芽切成水栀子小段并放入步骤三中的增殖培养基中进行培养得到水栀子嫩茎，培养时间为五周；
七、生根培养：将步骤六中的增殖培养所得的水栀子嫩茎放入生根培养基中进行培养得到水栀子试管苗，培养时间为三十天；
八、移植：将步骤七中得到的水栀子试管苗移栽至泥土中。
所述步骤四中的灭菌时间至少为20分钟。
所述步骤一种的培养皿和滤纸在放入水栀子幼嫩茎段之前均经过高温灭菌。这样防止培养皿本身所携带的细菌影响水栀子幼嫩茎段的分化。
所述步骤四中的培养室的温度为22℃，每日光照16h，光照强度为2000lx。适宜的光照和温度有利于促进水栀子幼嫩茎段的成长。
所述步骤六中的水栀子小段的长度为2.5cm。
所述步骤八中移植之前将水栀子试管苗在不打开生根培养基的情况下在培养室内放置5天，然后在打开生根培养基的情况下再在培养室内放置2天。
所述步骤八中的泥土由80％的砂泥和20％的粘土混合而成。
将实施例一、实施例二和实施例三中的水栀子幼嫩茎与在作为对比例的外面普通泥土中培养的水栀子幼嫩茎进行对比，对比结果如下表所示。
案例 原始长度(cm) 培养后长度(cm) 增长率(％)
实施例一 1.5 1.9 26.7
实施例二 2 2.7 35
实施例三 2.5 3.8 52
对比例 3 3.6 20
发现上述方法培养出的水栀子的茎段明显长于普通泥土培养出的，可得出该水栀子组织培养和快速繁殖的方法是有效的。
本发明中提供的一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，选用水栀子的茎部组织作为外植体，进行植株再生和快速繁殖，方法的步骤简单易操作，提高了水栀子的培养和繁殖速度和效率；本发明通过步骤一中对水栀子的幼嫩茎段以及培养皿和滤纸进行消毒杀菌处理，有效防止了幼嫩茎段上原有的细菌影响茎段的发育和成长；通过设置培养室中适宜的温度和光照，有利于促进水栀子幼嫩茎段的成长；通过设置步骤八中80％的砂泥和20％的粘土作为水栀子的栽培土，砂泥和粘土中的营养成分能很好地促进水栀子试管苗的发育和成长，提高水栀子组织培养和快速繁殖的效率。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
一、选材：选取当年生的水栀子的幼嫩茎段进行消毒杀菌处理，消毒杀菌后放置再铺有滤纸的培养皿中进行培养；
二、准备培养基：准备三个培养基，分别为分化培养基、增殖培养基和生根培养基；
三、配置营养液：分化培养基：硝酸铵溶液、硝酸钾溶液，二水氯化钙溶液、蔗糖和琼脂；增殖培养基：维生素溶液，蔗糖溶液，激动素溶液和琼脂；生根培养基：萘乙酸，椰子汁，活性炭，蔗糖和琼脂。
四、放置营养液：将步骤三中配置的营养液进行灭菌，灭菌结束后将其放置在培养室内；
五、分化培养：将步骤一种经过消毒杀菌处理的水栀子幼嫩茎段放入步骤三中的分化培养基中进行初次培养，得到水栀子不定芽；
六、增殖培养：将步骤五中得到的水栀子不定芽切成水栀子小段并放入步骤三中的增殖培养基中进行培养得到水栀子嫩茎；
七、生根培养：将步骤六中的增殖培养所得的水栀子嫩茎放入生根培养基中进行培养得到水栀子试管苗；
八、移植：将步骤七中得到的水栀子试管苗移栽至泥土中。
2.根据权利要求1所述的一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤四中的灭菌时间至少为20分钟。
3.根据权利要求1所述的一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤一种的培养皿和滤纸在放入水栀子幼嫩茎段之前均经过高温灭菌。
4.根据权利要求1所述的一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤四中的培养室的温度为20±2℃，每日光照16h，光照强度为2000lx。
5.根据权利要求1所述的一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤六中的水栀子小段的长度为1.5cm-2.5cm。
6.根据权利要求1所述的一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤八中移植之前将水栀子试管苗在不打开生根培养基的情况下在培养室内放置5天，然后在打开生根培养基的情况下再在培养室内放置2天。
7.根据权利要求1所述的一种水栀子组织培养和快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤八中的泥土由80％的砂泥和20％的粘土混合而成。
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