CN105918126B - 掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法，属于植物生物技术领域，通过取材灭菌、嫩枝诱导培养、根苗诱导培养、根苗扩繁培养及炼苗培养五大步骤，利用根苗生苗的方法，没有愈伤组织的形成，在扩繁培养基中可以一代代继代培养，克服了现有技术中采用扦插、压条、分株和根蘖等无性繁殖方法导致繁殖系数低以及种苗来源受到较大限制的问题，也克服了现有技术中长期采用无性繁殖导致产量下降和品质变劣的问题，从而保证了掌叶覆盆子的优良特性和性状，防止品种过快退化，并且繁殖周期短、速度快、系数高，适合规模化生产种苗，方便建立工厂化掌叶覆盆子组培苗的生产体系，为我国掌叶覆盆子产业提供大量高质量种苗，弥补掌叶覆盆子市场的不足。

Description

掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法
技术领域
本发明涉及植物生物技术领域，尤其涉及一种掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法。
背景技术
掌叶覆盆子(Rubus chingii Hu)俗称角公、牛雹等，蔷薇科(Rosaceae)悬钩子属(Rubus L.)多年生浆果类果树。果实在已饱满呈绿色未成熟时采摘，可做为常用的中药材，据本草纲目记载，有健肾益胃，补足精气，治肾虚、遗尿等功效。其成熟果实是新型高营养果品，富含氨基酸、糖、有机酸及多种维生素、矿质元素，尤其是过氧化物歧化酶(SOD)含量为水果之最，是具有抗衰老、保健、美容之功效的“新型第三代水果”。因此,开发和利用掌叶覆盆子有着极大的潜力和广阔的前景。
因此,开发和利用掌叶覆盆子有着极大的潜力和广阔的前景。目前作为药材使用的掌叶覆盆子全国产量在500吨左右，国内需求量在450～470吨，基本处于产销平衡。而随着中药材价格的普涨，掌叶覆盆子的价格也在逐年攀升，2006年价格达到65元/kg,2010年高达110元/kg,2015年达到160元/kg。
我国掌叶覆盆子野生资源丰富，生于溪旁或山坡林地，目前，人工栽培一般采用扦插、压条、分株和根蘖等无性繁殖方法，繁殖系数低，种苗的来源受到较大限制，并且长期的无性繁殖，使病毒积累，危害加重，导致产量下降，品质变劣。
发明内容
针对上述存在的问题，本发明提供一种掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法，以克服现有技术中采用扦插、压条、分株和根蘖等无性繁殖方法导致繁殖系数低以及种苗来源受到较大限制的问题，也克服现有技术中长期采用无性繁殖导致产量下降和品质变劣的问题，从而保证了掌叶覆盆子的优良特性和性状，防止品种过快退化，并且繁殖周期短、速度快、系数高，适合规模化生产种苗，方便建立工厂化掌叶覆盆子组培苗的生产体系，为我国掌叶覆盆子产业提供大量高质量种苗，弥补掌叶覆盆子市场的不足。
为了实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法，其中，包括：
1)取材灭菌：选择带有掌叶覆盆子腋芽的茎段作为外植体，对所述外植体进行灭菌处理；
2)嫩枝诱导培养：将灭菌后的所述外植体接种到配置好的第一培养基中培养，生长出嫩枝，其中，所述第一培养基为MS培养基，并在所述MS培养基中加入浓度为1.0-1.5mg/L的6-BA以及浓度为0.05-0.1mg/L的NAA；
3)根苗诱导培养：将长出的嫩枝直接或者切分转接到第二培养基中进行根苗诱导培养，所述第二培养基为QL培养基，并在所述QL培养基中加入浓度0.5-1.0mg/L的6-BA以及浓度为0.05-0.1mg/L的NAA；
4)根苗扩繁培养：将诱导出的根苗转接到第三培养基中进行根苗扩繁培养，所述第三培养基与步骤3)中的第二培养基成分相同；
5)炼苗培养：将扩繁培养后的根苗从第三培养基中移栽至穴盘中，在温室中进行炼苗、壮苗生长以及常规管理。
上述的掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法，其中，在步骤1)中，将带有腋芽的茎段在流动的自来水下冲洗1～2小时，并在冲洗过程中，小心去除所述外植体的叶片和叶柄，经1～2小时水流后即可进行灭菌处理。
上述的掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法，其中，所述灭菌处理包括：在超净工作台上用70％酒精表面消毒30秒，然后用13％～15％的双氧水消毒15分钟，再用无菌水冲洗3～5遍。
上述的掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法，其中，所述掌叶覆盆子茎段的长度为1cm。
上述的掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法，其中，所述第一培养基为MS培养基，并在所述MS培养基中加入浓度为1.0mg/L的6-BA以及浓度为0.1mg/L的NAA。
上述的掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法，其中，所述第二培养基和所述第三培养基均为QL培养基，并在所述QL培养基中加入浓度1.0mg/L的6-BA以及浓度为0.1mg/L的NAA。
上述技术方案具有如下优点或者有益效果：
本发明提供的掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法，通过取材灭菌、嫩枝诱导培养、根苗诱导培养、根苗扩繁培养以及炼苗培养这五大步骤，利用根苗生苗的方法，没有愈伤组织的形成，在扩繁培养基中可以一代一代继代培养，克服了现有技术中采用扦插、压条、分株和根蘖等无性繁殖方法导致繁殖系数低以及种苗来源受到较大限制的问题，也克服了现有技术中长期采用无性繁殖导致产量下降和品质变劣的问题，从而保证了掌叶覆盆子的优良特性和性状，防止品种过快退化，并且繁殖周期短、速度快、系数高，适合规模化生产种苗，方便建立工厂化掌叶覆盆子组培苗的生产体系，为我国掌叶覆盆子产业提供大量高质量种苗，弥补掌叶覆盆子市场的不足。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，但是不作为本发明的限定。
实施例1：
本发明实施例1提供的掌叶覆盆子的快速繁殖方法包括：
1)取材灭菌
取带掌叶覆盆子腋芽的茎段作为外植体，在流动的自来水下冲洗1～2小时，在冲洗的过程中，小心去除叶片和叶柄，注意不要碰伤腋芽，经1～2小时水流后即可进行灭菌处理；
在超净工作台上用70％酒精表面消毒30秒，然后用约14％的双氧水消毒15分钟，再用无菌水冲洗3遍，然后将带掌叶覆盆子腋芽的茎段切成1厘米长度，将1厘米长度的带掌叶覆盆子腋芽的茎段接种于事先准备好的嫩枝诱导培养基(第一培养基)中。
2)嫩枝诱导培养
在带掌叶覆盆子腋芽茎段灭菌处理后，在超净工作台上经切割、接种在NAA固定浓度为0.1mg/L，6-BA为0.1-1.5mg/L的培养基上；以及6-BA固定浓度为1.0mg/L，不同NAA浓度的培养基上。实验结果见表1：
表1：茎段在不同激素浓度MS培养基上的发育情况
(在6-BA浓度为1.1-1.5mg/L时，随着浓度增加褐化现象加重；NAA浓度超过0.4mg/L时，出现愈伤组织以及玻璃化现象)
由表1可得：对激素浓度的筛选得出，茎段的诱导培养以MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L组合最好。
3)根苗诱导培养及根苗扩繁培养
带掌叶覆盆子腋芽茎段在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培养基上诱导培养15天左右，腋芽就会生长至1厘米左右的嫩枝。将这些嫩枝切成1cm的茎段，再将1cm的茎段接种到不同激素配比的培养基进行诱导扩繁培养。在这一试验中我们分四个处理，处理结果见表2：
表2
由表2可得：最佳的扩繁培养基为QL+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L
4)炼苗培养
将掌叶覆盆子根苗从培养瓶移栽至穴盘中，在温室中进行炼苗、壮苗生长，常规管理，常规管理包括：光照的管理，室内光照，保持其光照强度为10000lux左右；浇水管理，第一次浇水浇透，保证70～80％的相对湿度，一周后，见干见湿；肥料的管理，一周后，1/2MS浇施。
综上所述，本发明实施例1提供的掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法中，通过取材灭菌、嫩枝诱导培养、根苗诱导培养、根苗扩繁培养以及炼苗培养这五大步骤，利用根苗生苗的方法，没有愈伤组织的形成，在扩繁培养基中可以一代一代继代培养，在快繁过程中产生的根苗本身就已经有完整的根系，不需要再经过壮苗、生根等培养过程，节省了时间，提高了效率，克服了现有技术中采用扦插、压条、分株和根蘖等无性繁殖方法导致繁殖系数低以及种苗来源受到较大限制的问题，也克服了现有技术中长期采用无性繁殖导致产量下降和品质变劣的问题，从而保证了掌叶覆盆子的优良特性和性状，防止品种过快退化，并且繁殖周期短、速度快、系数高，适合规模化生产种苗，方便建立工厂化掌叶覆盆子组培苗的生产体系，为我国掌叶覆盆子产业提供大量高质量种苗，弥补掌叶覆盆子市场的不足。
本领域技术人员应该理解，本领域技术人员结合现有技术以及上述实施例可以实现所述变化例，在此不予赘述。这样的变化例并不影响本发明的实质内容，在此不予赘述。
以上对本发明的较佳实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式；任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明技术方案作出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例，这并不影响本发明的实质内容。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。

Claims (1)

1.一种掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法，其特征在于，包括：
1)取材灭菌：选择带有掌叶覆盆子腋芽的茎段作为外植体，对所述外植体进行灭菌处理；
2)嫩枝诱导培养：将灭菌后的所述外植体接种到配置好的第一培养基中培养，生长出嫩枝，其中，所述第一培养基为MS培养基，并在所述MS培养基中加入浓度为1.0-1.5mg/L的6-BA以及浓度为0.05-0.1mg/L的NAA；
3)根苗诱导培养：将长出的嫩枝直接或者切分转接到第二培养基中进行根苗诱导培养，所述第二培养基为QL培养基，并在所述QL培养基中加入浓度0.5-1.0mg/L的6-BA以及浓度为0.05-0.1mg/L的NAA；
4)根苗扩繁培养：将诱导出的根苗转接到第三培养基中进行根苗扩繁培养，所述第三培养基与步骤3)中的第二培养基成分相同；
5)炼苗培养：将扩繁培养后的根苗从第三培养基中移栽至穴盘中，在温室中进行炼苗、壮苗生长以及常规管理；
其中，在步骤1)中，将带有腋芽的茎段在流动的自来水下冲洗1～2小时，并在冲洗过程中，小心去除所述外植体的叶片和叶柄，经1～2小时水流后即可进行灭菌处理；所述灭菌处理包括：在超净工作台上用70％酒精表面消毒30秒，然后用13％～15％的双氧水消毒15分钟，再用无菌水冲洗3～5遍；所述掌叶覆盆子茎段的长度为1cm；所述第一培养基为MS培养基，并在所述MS培养基中加入浓度为1.0mg/L的6-BA以及浓度为0.1mg/L的NAA；所述第二培养基和所述第三培养基均为QL培养基，并在所述QL培养基中加入浓度1.0mg/L的6-BA以及浓度为0.1mg/L的NAA。
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