CN103651137A - 狐狸尾兰原球茎快速繁殖方法 - Google Patents

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高宏秀
强承魁
张光琴
张莹
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Abstract

本发明涉及一种狐狸尾兰原球茎快速繁殖方法，属多年生草本植物领域。以狐狸尾兰种子作外植体，通过从种子→原球茎(类原球茎体)→丛生芽→完整植株的繁殖途径进行繁殖，结果表明，狐狸尾兰种子在温度(25±2)℃，光照强度1500-2000lx，光照时间12h/d的条件下，最适培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，增殖培养最适培养基为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L，生根培养基为1/2MS+NAA1.0mg/L。可以在短期内获得大量优质种苗；利用狐狸尾兰未成熟种子作外植体，应用组织培养等生物技术对狐狸尾兰类原球茎体诱导、增殖和催根，对组培苗壮苗、生根培养和移栽等。为狐狸尾兰工厂化育苗提供一种新方法。

Description

狐狸尾兰原球茎快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种狐狸尾兰原球茎快速繁殖方法，属兰科钻喙兰属的多年生草本植物领域。
背景技术
兰科狐狸尾兰是多年生草本植物，为典型的热带附生兰，也是海南野生兰花优良种质资源之一，狐狸尾兰叶片肥厚、翠绿，花朵清丽，香味四溢，花期长，而且其生长适应性强，栽培容易，花期为我国传统春节前后，是极好的新春贺岁花卉，颇受广大群众青睐。然而，由于其生长环境热带森林过量采伐，其适生环境严重恶化，加上人们为了追求眼前利益，过度采集出售，致使野生狐狸尾兰数量锐减，严重影响了狐狸尾兰生态群的构成，几近濒危。由于其种子在自然条件下不易萌发，常规繁殖多采用分株方法，但是此法繁殖系数低，繁殖速度慢，远不能满足市场需求。
发明内容
本发明提供一种狐狸尾兰原球茎快速繁殖方法，可以在短期内获得大量优质种苗；利用狐狸尾兰未成熟种子作外植体，应用组织培养等生物技术对狐狸尾兰类原球茎体诱导、增殖和催根，对组培苗壮苗、生根培养和移栽等。通过对狐狸尾兰的快繁技术系统化研究，为狐狸尾兰工厂化育苗提供一种新方法。
本发明是以如下技术方案实现的：一种狐狸尾兰原球茎快速繁殖方法，具体步骤如下：
1）无菌材料的获得：取狐狸尾兰9成熟果实；先用自来水冲洗狐狸尾兰果实表面，然后在超净工作台上用70%酒精表面消毒果实2min，无菌水冲洗1次，再用无菌滤纸吸干水分，然后用解剖刀切开荚果，取出细小种子，轻轻将种子均匀散落到固体培养基上，每瓶接种量为100粒左右；所述的培养基为VW+6BA1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L或MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L的培养基；
2）类原球茎体诱导：把狐狸尾兰的种子分别接种于VW+6-BA-2.0mg/L+NAA0.2mg/L、MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L的诱导培养基中，诱导原球茎(类原球茎体)的形成；
3）类原球茎体增殖培养。类原球茎体萌发后，转接到新鲜培养基中，继续培养约20d左右，顶部膨大并分化出子叶，同时在基部分化出2-3粗状的假根，在进行增殖培养时，可把基部的假根切掉，增殖培养基为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L。
4）生根培养：当小芽具有3-4，叶长2-3生长健壮的小芽单株切下，转接入1/2MS+NAA1.0mg/L的生根培养基中，诱导其生根。
本发明的有益效果是：可以在短期内获得大量优质种苗；利用狐狸尾兰未成熟种子作外植体，应用组织培养等生物技术对狐狸尾兰类原球茎体诱导、增殖和催根，对组培苗壮苗、生根培养和移栽等。为狐狸尾兰工厂化育苗提供一种新方法。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的方法和效果进一步说明。
实施例1
1、类原球茎体的萌发培养
将未成熟种子接种到培养基中培养约50d右开始膨大，60-70d化出白色、结构疏松的前期原球茎胚状体，继续培养15d，胚状体萌发形成绿色原球茎，上端有叶原基，下端有许多不定根，在VW+6BA1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L和MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L的培养基中均能诱导类原球茎体的萌发。试验结果表明，诱导类原球茎体以MS附加6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L的激素配比较好，分化时间短，未成熟种子接种100d左右就能全部诱导原球茎(类原球茎体)的萌发。
3、类原球茎体的增殖培养：类原球茎体萌发后，转接到新鲜培养基中继续培养约18d左右，顶部膨大并分化出子叶，同时在基部分化出1-2条粗状的假根，继续培养，可逐渐分化出真叶，培养60d左右，已经形成具有2-3片真叶的不定芽。之后每50d转接入相同的新鲜培养基中进行继代增殖培养，增殖培养基为MS+6-BA0-3.0mg/L+NAA0-0.2mg/L，其中以MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L最好，平均增殖系数为3-8，且生长健壮。继代增殖培养中不断分化出小芽，切分转入新鲜培养基中，可保持不断增殖的状态。在植物的组织培养过程中常常会发生体细胞无性系变异，利用体细胞无性系变异可以创造更多遗传变异及扩大可利用的种质资源范围，选育出新的物种或品系，为培养作物优良品种开辟了新的途径，这可以做为一种育种手段，但是对于商业生产来说却是不利的。因此，必须在通过类原球茎体增殖培养时，特别是多代增殖培养时剔除褐变、玻璃化、细弱以及性状、形态变异不正常的植株、组织。
4、生根培养：把生长健壮并具有2-3片真叶的单个小芽，转接到生根培养基上，培养基为1/2MS+NAA1.0mg/L，经60d培养，即可获得叶片长2cm，有2-3条粗壮的根，生长健壮的完整植株。或把在类原球茎萌发增殖时，就已经形成具有2-3片真叶的不定芽，并带有已经发育的根的小苗，可直接转接入的1/2MS+NAA1.0mg/L的培养基中做生根培养。
5、炼苗移栽
生根苗培养约60d后，根长到1-2cm时，可将瓶苗移入无直射阳光的地方炼苗5d；打开瓶盖，继续练苗2d；用镊子轻轻将小苗从瓶中取出，用自来水洗净根部附着的培养基，然后放置于室内半天以晾干水珠，即可移栽到事先准备好的砂床上，并适度遮阴。狐狸尾兰试管苗移栽时，不宜太湿，否则易烂根，移栽基质多以粗椰糠与河沙按一定的比例混合，保湿又透气，其中以粗椰糠∶河沙为1∶1的比例混合较好，湿度保持在80%-90%，移栽成活率达90%以上。
结论
试验以狐狸尾兰种子作外植体，通过从种子→原球茎(类原球茎体)→丛生芽→完整植株的繁殖途径进行繁殖，结果表明，狐狸尾兰种子在温度(25±2)℃，光照强度1500-2000lx，光照时间12h/d的条件下，最适培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，增殖培养最适培养基为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L，生根培养基为1/2MS+NAA1.0mg/L。

Claims (1)

1.一种狐狸尾兰原球茎快速繁殖方法，具体步骤如下：
1）无菌材料的获得：取狐狸尾兰9成熟果实；先用自来水冲洗狐狸尾兰果实表面，然后在超净工作台上用70%酒精表面消毒果实2min，无菌水冲洗1次，再用无菌滤纸吸干水分，然后用解剖刀切开荚果，取出细小种子，轻轻将种子均匀散落到固体培养基上，每瓶接种量为100粒左右；所述的培养基为VW+6BA1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L或MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L的培养基；
2）类原球茎体诱导：把狐狸尾兰的种子分别接种于VW+6-BA-2.0mg/L+NAA0.2mg/L、MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L的诱导培养基中，诱导类原球茎体的形成；
3）类原球茎体增殖培养：类原球茎体萌发后，转接到新鲜培养基中，继续培养约20d左右，顶部膨大并分化出子叶，同时在基部分化出2-3粗状的假根，在进行增殖培养时，可把基部的假根切掉，增殖培养基为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L。4）生根培养：当小芽具有3-4，叶长2-3生长健壮的小芽单株切下，转接入1/2MS+NAA1.0mg/L的生根培养基中，诱导其生根；
4）生根培养：当小芽具有3-4，叶长2-3生长健壮的小芽单株切下，转接入1/2MS+NAA1.0mg/L的生根培养基中，诱导其生根。
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