CN101341853B - 一种北京杨组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种北京杨组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：①取材及初代芽诱导分化培养：②丛生芽抽茎培养；③壮苗培养；④增殖培养；⑤生根培养：⑥炼苗移栽。本发明对北京杨离体培养，具有繁殖率高的优点。
Description
一、技术领域：
本发明涉及苗木的培养技术，尤其是一种杨树的组织培养方法。
二、背景技术：
北京杨是我国选育的杨树新品种，为钻天杨和青杨的杂交后代。其木材清软、纤维长，可供建筑、桥梁、矿柱、胶合板、造纸等用。也是优良的用材林、防护林、行道树和“四旁”绿化树种。由于它材质好、生长快、抗性强，深受人民的欢迎，但多年来一直以常规扦插育苗为主，繁殖率低，远不能满足社会的需求。
三、发明内容：
本发明目的在于提供一种对北京杨离体培养且繁殖率高的组织培养技术。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种北京杨组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：
①取材及初代芽诱导分化培养：取北京杨的叶柄，清洗消毒后切除两头伤口，平放在诱导培养基上，每瓶接种一个外植体，置于培养架上光照培养，所述诱导培养基是MS+6-BA0.4mg/L+TDZ0.001mg/L+NAA0.1mg/L；
②丛生芽抽茎培养：不定芽长约0.5cm，切下接入抽茎培养基中培养，所述抽茎培养基是MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L。；
③壮苗培养；待芽长约1.5cm，切下接入MS培养基中进行壮苗培养；
④增殖培养：把约1.5cm的健壮苗接于增殖培养基上，所述增殖培养基是MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.05mg/L；
⑤生根培养：把增殖培养所得2cm以上的健壮苗切下接入生根培养基中培养，所述生根培养基是MS；
⑥炼苗移栽。
所述培养的培养条件是培养基加入30g/L蔗糖和6.5g/L琼脂，pH6.0，培养室温度为25±1℃，光照强度1500～20001x，光照时间12小时/天。
本发明对北京杨离体培养，具有繁殖率高的优点。
四、具体实施方式：
下面结合实施例对本发明进一步说明：
实施例：
1材料与方法
1.1试验材料
北京杨
1.2试验方法
1.2.1材料处理
室内盆栽苗新萌叶片，剪取叶柄，无菌水反复冲洗30分钟，滤纸吸干水分待用。
1.2.2初代芽诱导分化培养
将外植体置于超净工作台上，0.1％升汞消毒6分钟，无菌水冲洗5次。切除叶柄两头伤口，平放在诱导培养基上，每个接种瓶接一个外植体，放在培养架上光照培养。
1.2.3抽茎培养
把诱导出的丛生芽团，切成小芽团，接入添加了不同激素浓度的抽茎培养基本中进行抽茎培养。
1.2.4壮苗培养
初代丛生芽抽茎后组培苗比较细弱，待芽长约1.5cm，切下接入不加任何激素的MS培养基中进行壮苗培养。
1.2.5增殖培养
切取壮苗后的健壮苗，接入增殖培养基中进行增殖培养。增殖培养以MS为基本培养基，添加不同浓度的激素。
1.2.6生根培养
切取2cm以上的健壮苗，转入生根培养基中，生根培养以MS为基本培 养基，添加不同激素，以MS基本培养基为对照，培养20天后统计生根情况。
1.2.7培养条件
培养条件为培养基中加入30g/L蔗糖、6.5g/L琼脂，pH6.0，培养室温度为25±1℃，光照1500～20001x，光照时间12小时/天。
1.2.8炼苗移栽
组培苗根长至1～2cm，2～4条根时，即可进行炼苗移栽。移栽前组培生根苗须移到自然光照下闭瓶炼苗3-5天，让试管苗接受强光的照射，使其长得壮实起来，然后再开瓶炼苗1-2天，经受较低湿度的处理，以适应将来自然湿度的条件。
2结果与分析
2.1外植体诱导结果
灭菌材料接种到芽诱导分化培养基上，两周左右叶柄两头伤口处产生新的绿点，30天左右，能产生大量芽团，约0.3～0.5cm，芽色嫩绿。经统计分析MS+6-BA0.4mg/L+TDZ0.001mg/L+NAA0.1mg/L分化效果最好。
2.2芽的抽茎培养与生长情况
把初代培养诱导出的芽团切成小芽团，接到抽茎培养基上，20天左右小芽生长高度可达1.5～2cm，经统计，对比分析得到MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L抽茎效果最好。
2.4增殖培养
把壮苗培养后健壮苗切下，转接到增殖培养基上，少形成大量丛生芽团，多为腋芽萌动或是基部伤口处分化出小量健壮芽，经过20天左右培养，腋芽可长约2cm左右健壮芽，而基部新分化芽长约1.5cm。增殖系数为3.5～4.5。经统计分析，增殖最佳培养基为MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.05mg/L。
2.5生根培养
当芽长至2cm高时，接入不同浓度的NAA生根培养基中，以不加任何激素的MS培养基作对照，经统计分析，MS比较适合北京杨生根。
2.6炼苗移栽
组培生根苗根长1-2cm，2～4条根时，炼苗后移栽到沙∶珍珠岩∶园土＝2∶1∶1，遮阴保湿，培养两周左右，逐渐揭开薄膜，成活率85％以上。
Claims (5)
1.一种北京杨组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：
①取材及初代芽诱导分化培养：取北京杨的叶柄，清洗消毒后切除两头伤口，平放在诱导培养基上，每瓶接种一个外植体，置于培养架上光照培养，所述诱导培养基是MS+6-BA0.4mg/L+TDZ0.001mg/L+NAA0.1mg/L；
②丛生芽抽茎培养：不定芽长约0.5cm，切下接入抽茎培养基中培养，所述抽茎培养基是MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L；
③壮苗培养；待芽长约1.5cm，切下接入MS培养基中进行壮苗培养；
④增殖培养：把约1.5cm的健壮苗接于增殖培养基上，所述增殖培养基是MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.05mg/L；
⑤生根培养：把增殖培养所得2cm以上的健壮苗切下接入生根培养基中培养，所述生根培养基是MS；
⑥炼苗移栽。
2.根据权利要求1所述的北京杨组织培养方法，其特征在于：所述的培养条件是培养基加入30g/L蔗糖和6.5g/L琼脂，pH6.0，培养室温度为25±1℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12小时/天。
3.根据权利要求1所述的北京杨组织培养方法，其特征在于：对外植物体洗净方法是无菌水反复冲洗30分钟。
4.根据权利要求1所述的北京杨组织培养方法，其特征在于：初代诱导芽分化培养中的消毒方法是用0.1％升汞消毒6分钟，无菌水清洗5次。
5.根据权利要求1所述的北京杨组织培养方法，其特征在于：所述移栽中的基质成分为沙∶珍珠岩∶园土＝2∶1∶1。
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