CN101695279B

CN101695279B - 一种美洲黑杨湘林101组织培养方法

Info

Publication number: CN101695279B
Application number: CN2009100443475A
Authority: CN
Inventors: 唐作钧; 盛金明; 肖兴翠; 梁丽容; 刘景�
Original assignee: HUNAN MAOYUAN FOREST INDUSTRIAL Co Ltd
Current assignee: HUNAN MAOYUAN FOREST INDUSTRIAL Co Ltd
Priority date: 2009-09-11
Filing date: 2009-09-11
Publication date: 2011-11-09
Anticipated expiration: 2029-09-11
Also published as: CN101695279A

Abstract

本发明公开了一种美洲黑杨湘林101组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：①外植体消毒处理；②外植体选择；③外植体诱导分化丛生芽；④增殖培养；⑤生根培养；⑥炼苗移栽。本发明对美洲黑杨湘林101离体培养，具有繁殖率高的优点。

Description

一种美洲黑杨湘林101组织培养方法

技术领域：

本发明涉及苗木的培养技术，尤其是一种杨树的组织培养方法。本发明也适合于湘林系列的其他品种繁殖。

背景技术：

湘林101是我国选育的美洲黑杨杂交新品种，干直，喜水，喜高温，生长期长、生长量大、木材重、为优质速生南方型杨树新品种，适合洞庭湖区栽植，广泛用作行道树、防护林及速生用材树种。其材质松软、纤维长、白度高，可解决造纸生产原料供应问题。多年来一直以扦插繁殖为主，繁殖率低，远不能满足社会的需求。由于存在年龄效应，扦插几代后生长容易出现退化，只有通过脱毒和杂交才能达到原来的效果。采用组织培养方法培养出的再生植株，不仅解决了脱毒复壮的问题，而且能在短时间内提供大量优良苗木。

发明内容：

本发明目的在于提供一种对美洲黑杨湘林101离体培养且繁殖率高的组织培养技术。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种美洲黑杨湘林101组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：

①外植体消毒处理：取美洲黑杨湘林101叶片、叶柄、茎段，消毒后切除伤口，平放在MS培养基上，每瓶接种一个外植体，置于培养架上进行光照培养；

②外植体选择：将叶片、叶柄、茎段接种到相同培养基上，分析各外植体的愈伤组织诱导率、愈伤组织不定芽分化率，选择最佳外植体；

③外植体诱导分化丛生芽：把叶柄接入不同分化培养基中；

④增殖培养：把约2.5cm的健壮组培苗接入增殖培养基中；

⑤生根培养：把增殖培养所得2-3.5cm以上的再生植株切下接入生根培养基中培养；

⑥炼苗移栽。

所述培养的培养条件是培养基加入蔗糖3％和琼脂0.6％，pH6.0，培养室温度为25±2℃，光照强度5000～6000lx，光照时间16小时/天。

本发明对美洲黑杨湘林101组织培养，具有繁殖率高的优点。

具体实施方式：

1材料与方法

1.1试验材料

美洲黑杨湘林101

1.2试验方法

1.2.1外植体消毒处理

水培新萌枝条，剪取叶片、叶柄、茎段，流水冲洗30分钟，无菌水反复冲洗10分钟，滤纸吸干水分待用。0.1％升汞分别消毒不同时间，无菌水冲洗5次，消毒后切除伤口，平放在培养基上，每瓶接种一个外植体，置于培养架上光照培养。

1.2.2外植体选择

将叶片、叶柄、茎段按照最佳消毒方式处理后，接种到培养基上，30天后统计各外植体的愈伤组织诱导率、愈伤组织不定芽分化率，选择最佳外植体。所用培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。

1.2.3芽诱导分化丛生芽培养

选取最佳外植体，接入芽诱导分化培养基中。芽诱导分化培养基为MS基本培养基，添加不同浓度的生长调节剂。

1.2.4增殖培养

切取2.5cm左右的健壮苗，接入到添加不同生长调节剂的增殖培养基中进行增殖培养。

1.2.5生根培养

切取2-3.5cm的健壮苗，接入生根培养基中，生根培养以1/2MS为基本培养基，添加不同浓度的生长调节剂，以1/2MS基本培养基为对照，培养15天后统计生根情况。

1.2.6培养条件

培养条件为培养基中加入蔗糖3％、琼脂0.6％，pH6.0，培养室温度为25±2℃，光照5000～6000lx，光照时间16小时/天。

1.2.7炼苗移栽

组培苗根长约2cm，3～5条根后，移到大棚闭瓶炼苗两周，再移栽到各种混合基质中。

2结果与分析

2.1外植体消毒处理

灭菌材料接种到培养基上，一个月后统计所得，叶片0.1％升汞最佳消毒时间4分钟，叶柄5-6分钟，茎段10分钟。

2.2外植体的选择

消毒处理后，各外植体接种到培养基上，40天后大部分叶片和茎段只分化出少量愈伤组织和丛生芽，经统计分析叶柄分化效果最好，两头伤口处75％以上能分化出大量丛生芽。

2.3外植体诱导分化丛生芽

把消毒后的叶柄接种到诱导分化培养基上，12天后叶柄两头开始膨大，切口处形成绿色的愈伤组织，30左右愈伤组织上开始分化出大量的不定芽，经统计分析MS+6-BA0.6～1mg/L+TDZ0.002～0.005mg/L+NAA0.1mg/L分化效果最好，诱导率达91％以上。

2.4增殖培养

把健壮苗切下，转接到增殖培养基上，大部分基部伤口处分化出小量愈伤组织及丛生芽团，或是部分腋芽萌动，经20天培养，部分腋芽可长约2cm，基部新分化芽长1.5～2.5cm。增殖系数为4.9～6.1。经统计分析，增殖最佳培养基为MS+6-BA0.2-0.3mg/L+NAA0.1mg/L。

2.5生根培养

当芽长至2-3.5cm高时，接入不同浓度的NAA生根培养基中，以不加任何生长调节剂的1/2MS培养基作对照，10天左右，幼苗基部长出白色绒毛状细根，且粗壮，经统计分析，1/2MS+NAA0.02～0.05mg/L适合湘林101生根，生根率达98％。

2.6炼苗移栽

根长2cm，3～5条根，移栽到树皮∶珍珠岩∶园土＝1∶1∶1，遮阴保湿，培养一个月左右，成活率90％以上。

下面通过具体实验对本发明作进一步说明：

实验1：规模化试验

2009年2月，以美洲黑杨湘林101叶柄，采用组织培养方法，培育出组培苗3000株，外植体诱导率达91.5％，增增殖系数达5.9，生根率100％。移栽成活率95.6％。

实验2：产业化生产1

2009年3-5月，培育出美洲黑杨湘林101组培苗20000株，增增殖系数达5.6，生根率96.5％。移栽成活率98.3％。

实验3：产业化生产2

2009年6-9月，以美洲黑杨湘林75叶柄，采用湘林101的组织培养方法，培育出组培苗5000株，外植体诱导率达90.5％，增增殖系数达5.7，生根率97.1％。移栽成活率94.5％。各阶段的培养情况与美洲黑杨湘101相当。

实验4：产业化生产3

2009年6-9月，用美洲黑杨湘林77叶柄，采用湘林101的组织培养方法，培育出组培苗5000株，外植体诱导率达91.2％，增增殖系数达5.3。生根率94.2％。移栽成活率95.8％。各阶段的培养情况与美洲黑杨湘101相当。

实验5：产业化生产4

2009年6-9月，用美洲黑杨湘林90叶柄，采用湘林101的组织培养方法，培育出组培苗5000株，外植体诱导率达92.3％，增增殖系数达6.0，生根率961.3％。移栽成活率96.8％。各阶段的培养情况与美洲黑杨湘101相当。

Claims

1.一种美洲黑杨湘林101组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：

①外植体消毒处理：取湘林101的叶片、叶柄、茎段，消毒后切除伤口，平放在MS培养基上，每瓶接种一个外植体，置于培养架上光照培养；

②外植体选择：将叶片、叶柄、茎段进行最佳消毒处理后，接种到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L培养基上培养；所述的最佳消毒处理是：叶片0.1％升汞最佳消毒时间4分钟，叶柄5-6分钟，茎段10分钟；

③外植体诱导分化成丛生芽：把叶柄接入不同的分化培养基MS+6-BA0.6～1mg/L+TDZ0.002～0.005mg/L+NAA0.1mg/L中；

④增殖培养：把约2.5cm的健壮苗接于增殖培养基中；所述增殖培养基是MS+6-BA0.2～0.3mg/L+NAA0.1mg/L；

⑤生根培养：把增殖培养所得2-3.5cm以上的健壮苗切下接入生根培养基中培养；所述生根培养基是1/2MS+NAA0.02～0.05mg/L；

⑥培养条件是培养基加入蔗糖3％和琼脂0.6％，pH6.0，培养室温度为25±2℃，光照强度5000～60001x，光照时间16小时/天；

⑦炼苗移栽。

2.根据权利要求1所述的美洲黑杨湘林101组织培养方法，其特征在于：对外植体消毒处理为流水冲洗30分钟，无菌水反复冲洗10分钟。

3.根据权利要求书1所述的美洲黑杨湘林101组织培养方法，其特征在于：所述移栽的基质成分为树皮∶珍珠岩∶园土＝1∶1∶1，遮阴保湿培养一个月，逐渐揭膜。