CN105075863B - 一种紫斑牡丹快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种紫斑牡丹快速繁殖方法，包括如下步骤：1)将紫斑牡丹的胚接种于1号培养基，诱导紫斑牡丹离体胚萌芽；2)将步骤1)培养所得牡丹苗移入2号培养基中诱导紫斑牡丹苗生根；3)将步骤2)培养所得牡丹苗接种到3号培养基中生根培养；4)将步骤3)培养所得生根完整的离体胚苗炼苗后在土壤中培养15～20天，将其移出苗圃用于大田生产。本发明公开的高效稳定的紫斑牡丹成苗体系，即采用胚培养技术在室内人工控制条件下获得紫斑牡丹再生完整植株，该方法具有种子萌发率和生根率高，成苗出圃周期短，且成苗生长健壮、无病虫害等优点，具有良好的市场应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种紫斑牡丹快速繁殖方法，具体是采用胚培养技术在室内人工控制条件下获得紫斑牡丹再生完整植株的方法。
背景技术
紫斑牡丹[Paeoniarockii(S.G.Haw et L.A.Lauener)T.Hong et J.J.Li]属于芍药科芍药属牡丹组，我国特有的观赏及药用植物，花大色美、花梗长且挺直，因花瓣基部有明显的大块紫斑而得名，也是所有野生牡丹中受威胁程度最高的种类，在1987年被列为国家三级保护植物。紫斑牡丹根皮药用，其籽油含有极其丰富的不饱和脂肪酸，产油量高，2011年被认定为我国新一代木本油料作物，集中分布在甘肃兰州、临夏、临洮等地，其种植规模、品种数量以及在国内外的影响使之成为中国牡丹中仅次于中原牡丹的第二大品种群，同时也是我国园艺牡丹育种和遗传改良工作中极其珍贵的野生种质资源。但由于资源过度采伐以及生态环境的恶化，使紫斑牡丹的种质资源受到严重破坏，无法满足市场实际需求，种苗的快速繁育成为是优良品种产业化的瓶颈，解决这一难题并降低繁育成本，满足市场需要，对促进紫斑牡丹产业发展具有重要意义。
紫斑牡丹在繁殖过程中只能进行种子专性繁殖，但其种子属于顽拗性种子并具有典型的上胚轴休眠特性，存在萌发率极低、萌发极不整齐、及隔年萌发的现象，萌芽需要至少6个月时间。因此，长期以来生产上均采用嫁接繁殖的快速方法，但该方法存在受季节影响并且耗费大量人力及财力等缺点。为此，如何破除技术瓶颈，建立一种萌发率和生根率高、成苗周期短的紫斑牡丹快速繁殖技术已成为一项具有挑战且颇有市场应用前景的研究课题。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的不足，提供了一种紫斑牡丹快速繁殖方法，该方法采用胚培养技术在室内人工控制条件下获得紫斑牡丹再生完整植株，其具有种子萌发率和生根率高，成苗出圃周期短，且成苗生长健壮、无病虫害等优点。
本发明为解决上述问题所采用的技术方案是：一种紫斑牡丹快速繁殖方法，包括如下步骤：
1)将紫斑牡丹的胚接种于1号培养基，诱导紫斑牡丹离体胚萌芽；培养时间为15～20天，培养条件：光照时间12～16h/d，光照培养温度：20～25℃，黑暗培养温度：18～20℃；
2)将步骤1)培养所得牡丹苗移入2号培养基中，诱导紫斑牡丹苗生根；培养时间为30～40天，培养条件：光照时间8～10h/d，光照培养温度：25～30℃，黑暗培养温度：20～25℃；
3)将步骤2)培养所得牡丹苗接种到3号培养基中，进行生根培养；培养时间为10～25天，培养条件：室内环境培养,光照时间12～16h/d左右，培养温度：18℃～25℃；
4)将步骤3)培养所得生根完整的离体胚苗室内炼苗5～6d，移植于土壤中培养15～20天后，移出苗圃用于大田生产；
其中，
1号培养基为：B5+6-BA 2mg/L～2.5mg/L+CH 0.5g/L+蔗糖20g/L+琼脂4g/L～6g/L；
2号培养基为：B5+IBA 0.1mg/L～0.5mg/L+CH 0.5g/L+蔗糖20g/L+琼脂4g/L～6g/L；
3号培养基为：1/2WPM+IBA 0.05mg/L～0.1mg/L+AC 0.3g/L～0.6g/L+蔗糖20g/L+琼脂4g/L～6g/L；
其中，步骤1)至步骤3)中空气相对湿度为70％～80％，光照培养时光强为2000～2500lx。
本领域技术人员容易理解，在繁殖培养过程中需要先对种子进行一定的清洗处理，这是生物学领域通用的。作为示例，本发明采用的预处理方式为取紫斑牡丹健康种子，清水浸泡后剥除种皮，胚乳用75％酒精消毒，然后用升汞消毒后，无菌水冲洗干净，切开胚乳，挑出胚进行接种。
申请人通过试验研究了几种培养基组分、含量和各步骤培养条件对紫斑牡丹离体胚萌芽率和紫斑牡丹苗生根率的影响，得到如下结论：
首先，步骤1)中优选如下组分配比的1号培养基和培养条件，紫斑牡丹离体胚萌芽至少超过90％。该优选1号培养基为：B5+6-BA 2.5mg/L+CH 0.5g/L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L；优选培养条件为：光照时间15h/d，光照培养温度：25℃，黑暗培养温度：20℃，空气相对湿度为70％～80％。
同样地，步骤2)中优选如下组分配比的2号培养基和培养条件，紫斑牡丹苗生根率可达78.48％。该优选2号培养基为：B5+IBA 0.5mg/L+CH 0.5g/L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，优选培养条件为：光照时间10h/d，光照培养温度：30℃，黑暗培养温度：25℃，空气相对湿度为70％～80％。
同样地，步骤3)中优选如下组分配比的3号培养基和培养条件：1/2WPM+IBA0.1mg/L+AC 0.5g/L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，培养条件为：室内环境培养,光照时间15h/d左右，培养温度：18℃～25℃，空气相对湿度为70％～80％。
在步骤4)中，炼苗采用植物繁殖领域常用条件，通过采取放风、降温、控水等措施对幼苗强行锻炼，所用具体操作是在室内环境将培养瓶瓶盖打开放置2～3天，再取出幼苗并清洗掉根部培养基，种植于栽培基质中放置2～3天。栽培环境要求通风良好，尽量少浇水。
在步骤4)中，优选所用土壤是森林土与园土的混合基质，二者的混合比例取决于后期的真实生长环境中土壤类型，以便其能更好的生长。培养15～20天，将其移出苗圃用于大田生产。
本发明公开的一种紫斑牡丹快速繁殖方法，采用胚培养技术在室内人工控制条件下获得紫斑牡丹再生完整植株，有效提高其种子萌发率至91.11％，生根率为78.48％。该方法成苗出圃周期短，仅需12～15周即可完成培养成苗出圃，且成苗生长健壮、无病虫害等优点，具有良好的市场应用前景。
具体实施方式
在下述实施例中，申请人提供了本发明的一种具体实现。如下所公开的培养条件是优选的，但并不对本发明构成特别限制。本发明的保护范围涵盖于其权利要求及其等同变换。
实施例1紫斑牡丹快速繁殖方法
紫斑牡丹快速繁殖方法，包括如下步骤：
1)取紫斑牡丹健康种子(新采摘及陈年种子均可)，清水浸泡2-3天使种皮吸水变软，剥除种皮，取完整胚乳放入超净工作台上用75％的酒精消毒30s,无菌水冲洗3次；再用升汞消毒10min,无菌水冲洗3次。
2)用解剖刀切开胚乳从中取出种胚,接种到1号培养基：B5+6-BA2.5mg/L+CH0.5g/L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，以诱导紫斑牡丹离体胚萌芽。放置于人工气候室内，培养条件：光照强度为2000～2500lx，光照时间15h/d，培养间(恒温箱)温度在20℃和25℃之间进行光暗变温调节(光照培养温度：25℃，黑暗培养温度：20℃)，空气相对湿度为70％～80％。接种后第二天即可观察到子叶展开生长，萌发率为91.11％，七天后子叶逐渐转为绿色，两周后真叶萌动。
3)2周后将长至3-4cm高的紫斑牡丹苗移入2号培养基：B5+IBA0.5mg/L+CH 0.5g/L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，以诱导生根，放置于人工气候室内，更改培养条件：温度在25℃和30℃之间进行光暗变温调节(光照培养温度：30℃，黑暗培养温度：25℃)。接种5～10天下胚轴伸长生根，种胚苗生根率为78.48％。
4)7周后将已经生根的完整的苗子接种于3号培养基：1/2WPM+IBA0.1mg/L+AC0.5g/L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，进入生根培养阶段，放置于室内环境培养即可，培养条件：室内环境培养,光照强度为2000～2500lx，温度为18～25℃，空气相对湿度为70％～80％。培养15～20天萌发的根即可伸长至5～6cm，其中20％分生侧根。
5)9～10周后将已经萌发生根完整的离体胚苗进行炼苗，并种植于森林土与园土的混合基质中，15～20天即可出圃用于大田生产。
Claims (1)
1.一种紫斑牡丹快速繁殖方法，其特征在于包括如下步骤：
1)将紫斑牡丹的胚接种于1号培养基，诱导紫斑牡丹离体胚萌芽；培养时间为15～20天；
2)将步骤1)培养所得牡丹苗移入2号培养基中，诱导紫斑牡丹苗生根；培养时间为30～40天；
3)将步骤2)培养所得牡丹苗接种到3号培养基中，进行生根培养；培养时间为10～25天；
4)将步骤3)培养所得生根完整的离体胚苗室内炼苗5～6d，移植于土壤中培养15～20天后，移出苗圃用于大田生产；
其中，步骤1)至步骤3)中空气相对湿度为70％～80％，光照培养时光强为2000～2500lx；
所述1号培养基为：B5+6-BA 2.5mg/L+CH 0.5g/L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L；培养条件：光照时间15h/d，光照培养温度：25℃，黑暗培养温度：20℃；
所述2号培养基为：B5+IBA 0.5mg/L+CH 0.5g/L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，培养条件：光照时间10h/d，光照培养温度：30℃，黑暗培养温度：25℃；
所述3号培养基为：1/2WPM+IBA 0.1mg/L+AC 0.5g/L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，培养条件：室内环境培养，光照时间15h/d，培养温度：18℃～25℃；
步骤4)所用的土壤为森林土与园土组成的混合土壤基质。
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