CN109392712A - 一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法 - Google Patents

一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法 Download PDF

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CN109392712A CN201811399250.1A CN201811399250A CN109392712A CN 109392712 A CN109392712 A CN 109392712A CN 201811399250 A CN201811399250 A CN 201811399250A CN 109392712 A CN109392712 A CN 109392712A
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吕海燕
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刘小莉
李大卫
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Wuhan Botanical Garden of CAS
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    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01HNEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001Culture apparatus for tissue culture
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01HNEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008Methods for regeneration to complete plants

Abstract

本发明公开了一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法,涉及猕猴桃的组培快繁方法。本方法是:①获得无菌苗;②一步成苗诱导;③生根培养;④移栽;其特征在于:包括萌发培养基、一步成苗培养基和生根培养基及相应的培养条件。本发明采用三种针对性培养基对软枣猕猴桃品种进行组织培养,能在短期内快速繁育大量软枣猕猴桃种苗,增值系数可达9.0,并且通过组织培养能最大限度地保证种苗质量,提高种苗繁育速度,实现种苗工业化生产,满足生产上对软枣品种种苗的需求;直接组培品种种苗,建立品种采穗圃,打破传统嫁接繁殖中嫁接接穗的量的瓶颈,充分满足生产的需要。

Description

一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法
技术领域
本发明涉及猕猴桃组培快繁方法,尤其涉及一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法。
背景技术
软枣猕猴桃果型漂亮,平均单果重4-20克,果面光滑,软熟果实无需剥皮,直接食用,深受广大消费者的喜爱。软枣猕猴桃果实耐储藏性一般。植株树势强健,以中、长果枝结果为主,实生苗第六年株产约6-8千克。虽然软枣猕猴桃能适应辽宁5-8.2℃的年均温,也能适应福建16.9-17.9℃的年均温,但在华中武汉地区,不同倍性的软枣猕猴桃会出现适应性分化,2倍体软枣猕猴桃能开花结果,但夏季生长缓慢,果实风味差,四倍体软枣猕猴桃花量少,部分年份出现只开花不结果的现象。猕枣1号和猕枣2号为中国科学院武汉植物园自主研发选育的软枣猕猴桃新品种,能很好地适应华中地区的生态环境,快速达到丰产。随着中国猕猴桃新品种选育速度的的加快,为了快速的推广新品种和保留新品种优良品质,采用猕猴桃的组织培养技术进行繁殖是最快速和有效的方法之一,目前猕枣1号、猕枣2号种苗来源主要是扦插苗和嫁接苗,组培育苗技术方法还未见报道,然而扦插成活率不高以及接穗质量及数量的限制都成为猕枣1号、猕枣2号大面积推广及产业化生产的一个瓶颈。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷,本发明的目的就在于提供一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法,即直接通过组织培养方法获得品质均一、优良的离体猕枣1号、猕枣2号组培种苗,并通过优化离体快繁体系,实现快速繁育猕枣1号、猕枣2号软枣猕猴桃优质种苗的目的,以供生产中不断增长的种苗需求。
本发明采取的技术方案如下:
以猕枣1号、猕枣2号一年生枝条水培萌芽为外植体,消毒后进行组织培养,获得无菌苗,以无菌苗茎段为再生组织来源,进行一步成苗的诱导分化、生根培养。茎段直接成苗率高达100%,且后期的增殖培养不需要更换培养基,增值系数可达9.0。短期内可快速获得大量优质品种种苗,实现猕枣1号、猕枣2号种苗工厂化快速育苗。
具体地说,本发明包括以下步骤:
①无菌苗的获得
1)于11月底从母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条,将枝条剪成30cm长枝段,每段5-10芽;
2)将所述枝段形态学上端用封口膜封好,形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养,保持环境温度25±2℃,保证室内清洁,2-3天更换一次水溶液,两周后,腋芽萌出;
3)待腋芽芽体长至1-2cm时,取幼嫩芽体于超净工作台上,置于灭过菌的空瓶内,75%酒精表面消毒1min,倒出酒精,加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒2-5min,升汞溶液与外植体充分接触震荡,保证消毒彻底,倒出消毒液,外植体更换入新的灭菌瓶内,无菌水震荡冲洗4-5次,再于灭菌滤纸上晾干;
4)去掉腋芽芽体基部的伤口及损伤的叶片,接种于外植体萌发培养基上;
5)18-25天后,芽体展叶,生长健壮,获得无菌苗;
②一步成苗诱导
1)于超净工作台上切取无菌苗茎段,带2-3个腋芽,置于再生培养基上,pH调至5.8,进行不定芽的再生诱导;
2)接种材料置于光照条件下培养;
3)25-30天后,不定芽一步成苗,并萌发3-6新枝,增殖系数可达6-9;
③生根培养
将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段,接种于生根培养基上进行生根培养,5-8天即现肉眼可见不定根,短粗、健壮,10-15天后根长1.5-3cm,10-15条根,即可移栽;
④移栽
1)生根培养20-25天后,直接取出生根瓶苗,用自来水洗净根基上的培养基;
2)种苗栽至装有营养土的小营养钵,营养钵上方加盖塑料薄膜,保证新移栽种苗所处的环境湿度为85%-95%,温度控制在25-30℃,15-20天后去掉塑料薄膜,环境湿度适当降低至60%-80%;
3)25-35天后常规水肥管理,环境温度控制在35℃以下,高温夏季需遮阴及湿帘降温;
所述软枣猕猴桃品种为:猕枣1号、猕枣2号;
其特征在于:
所述萌发培养基为:MS+6-BA1.0-3.0 mg/L+IBA0.1-2.0mg/L+1%-2%蔗糖+0.8%琼脂;
所述无菌苗获得方法中,接种材料培养条件为:光照强度2000-2500Lx,光照12h/d,培养室内温度25±2℃;
所述一步成苗再生培养基为:MS+6-BA 0.1-2.0 mg/L+IBA 0.1-0.5 mg/L+3 % 蔗糖+0.8%琼脂;
所述一步成苗再生培养过程中,接种材料培养条件为:光照强度1500-2000Lx,光照12h/d,培养室内温度25±2℃;
所述生根培养基为:MS+IBA 0.01-0.5 mg/L+3%蔗糖+0.6-1.2%琼脂;
所述生根培养过程中,接种材料培养条件为:光照强度2500-3000Lx,光照12h/d,培养室内温度25±2℃;
所述营养土成分为:珍珠岩。
本发明的创新点:本发明初期采用室内蔗糖水溶液培养的方法,来促发腋芽萌发做为外植体来源,规避了直接室外采样的污染源,极大降低了细菌、真菌类及病毒携带的风险,同时降低升汞处理时间,减少对外植体组织细胞生理上的伤害。本方法直接通过一步成苗发获得高增殖系数的组培种苗,很大程度上降低时间及人工成本。组织培养过程中对材料接受的光照强度作出先降低后升高的调整,增殖过程中适当降低光照强度,能提高其扩繁增殖系数,后期生根逐渐增大光照强度,提高种苗的抗逆性,有利于提高移栽成活率。培养后期生根阶段增加琼脂粉的使用量,更有利于发根,也更利于移栽时对植株根基部位培养基的清洗,从而减少对根部的损伤,极大提高移栽成活率。种苗不经驯化直接移栽,节约时间及人力相关资源,从很大程度上降低了生产成本。移栽初期一定时间内的温湿度的控制,有利于种苗在短期快速适应移栽后环境,既缩短了育种时间,也极大地提高了种苗移栽成活率。
本发明具有下列优点和积极效果:
①本发明采用三种针对性培养基对猕枣1号、猕枣2号进行组织培养,能在短期内快速繁育大量软枣猕猴桃种苗,并且通过组织培养能最大限度的保证种苗质量,提高种苗繁育速度,实现种苗工厂化生产,满足生厂上对猕枣1号、猕枣2号种苗的需求。
②外植体提供过程中采用水培出芽方式,能够最大程度的控制无菌苗建立过程中的污染,很大程度上提高的种苗繁育速度,缩短种苗繁育周期,降低组培成本。
③在种苗培育过程中,培养条件的变更,尤其是光照强度在扩繁时降低,后期生根增强,有利于加快种苗繁育速度,蓄积营养生长能力,增强种苗抗逆性,大大提高后期组培种苗移栽成活率。
④种苗移栽前期,对移栽环境的温湿度的严格控制,能最大程度的保证种苗移栽成活率,从而减少损失、降低生产成本。
⑤相对于以往的扦插、嫁接获得猕枣1号、猕枣2号种苗,组培快繁育苗更能保证种苗质量,种苗生长一致、整齐,且能在更短的时间内满足生产对种苗数量上的需求。
⑥直接组培品种种苗,建立品种采穗圃,打破传统嫁接繁殖中嫁接接穗的量的瓶颈,充分满足生产的需要。
具体实施方式
以下结合实施例详细说明。
一、实施例1
一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法,按下述步骤完成:
1、无菌苗的获得
于11月底从猕枣1号母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条,剪成30cm长枝段,每段5-10芽,形态学上端用封口膜封好,形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养,保持环境温度25±2℃,保证室内清洁,2-3天更换一次水溶液,两周后,腋芽萌出,待芽体长至1-2cm时,取幼嫩芽体于超净工作台上,置于灭过菌的空瓶内,75%酒精表面消毒1min,倒出酒精,加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒3min,升汞溶液与外置体充分震荡,保证消毒彻底,倒出消毒液,外植体更换入新的灭菌瓶内,无菌水震荡冲洗4-5次,再于灭菌滤纸上晾干,去掉芽体基部的伤口及损伤的叶片,接种于外植体萌发培养基MS+6-BA1.0 mg/L+IBA1.0 mg/L+2%蔗糖+0.8%琼脂上,20天后,芽体展叶,生长健壮,获得无菌苗。接种材料于光照条件下培养,光照强度2500Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d。
2、一步成苗再生诱导
于超净工作台上切取无菌苗茎段,含2-3个腋芽,置于一步成苗诱导培养基MS+6-BA0.8 mg/L+IBA 0.2mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂上,pH调至5.8,进行不定芽的再生诱导。接种材料置于光照条件下培养。光照强度1500Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d。30天后,茎段直接一步成苗,且萌发3-4新枝,颜色亮绿色,茎段一步成苗率可达100%,且周期内增值系数可达9。
3、生根培养
将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段,接种于MS+IBA0.1mg/L+3%蔗糖+1.0%琼脂的生根培养基上进行生根培养,不需要调节pH。光照强度2500Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d,7天即现肉眼可见不定根,短粗、健壮,15天后根长1.5-2.5cm,12条根,即可移栽。
4、移栽
生根培养25天后,直接取出生根瓶苗,用自来水洗净根基上的培养基,种苗栽至装有营养土的小营养钵,营养土成分为:珍珠岩。营养钵上方加塑料薄膜,保证新移栽种苗所处的环境湿度为90%,温度控制在25-30℃,20天后去掉塑料薄膜,环境湿度适当降低至75%。30天后常规水肥管理,环境温度控制在35℃以下,高温夏季需遮阴及湿帘降温。
两个月后统计成活率高达100%。
二、实施例2
一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法,按下述步骤完成:
1、无菌苗的获得
于11月底从猕枣1号母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条,剪成30cm长枝段,每段5-10芽,形态学上端用封口膜封好,形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养,保持环境温度25±2℃,保证室内清洁,2-3天更换一次水溶液,两周后,腋芽萌出,待芽体长至1-2cm时,取幼嫩芽体于超净工作台上,置于灭过菌的空瓶内,75%酒精表面消毒1min,倒出酒精,加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒4min,升汞溶液与外置体充分震荡,保证消毒彻底,倒出消毒液,外植体更换入新的灭菌瓶内,无菌水震荡冲洗4-5次,再于灭菌滤纸上晾干,去掉芽体基部的伤口及损伤的叶片,接种于外植体萌发培养基MS+6-BA2.0 mg/L+IBA2.0 mg/L+2%蔗糖+0.8%琼脂上,24天后,芽体展叶,生长健壮,获得无菌苗。接种材料于光照条件下培养,光照强度2200Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d。
2、一步成苗再生诱导
于超净工作台上切取无菌苗茎段,含2-3个腋芽,置于一步成苗诱导培养基MS+6-BA0.1mg/L+IBA 0.1mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂上,pH调至5.8,进行不定芽的再生诱导。接种材料置于光照条件下培养。光照强度1500Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d。30天后,茎段直接一步成苗,且每茎段萌发3新枝,颜色亮绿色,茎段一步成苗率可达100%,且周期内增值系数可达7-8。
3、生根培养
将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段,接种于MS+IBA0.01mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂的生根培养基上进行生根培养,pH5.8。光照强度2600Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d,8天即现肉眼可见不定根,短粗、健壮,18天后根长1.5-2.5cm,10条根,即可移栽。
4、移栽
生根培养25天后,直接取出生根瓶苗,用自来水洗净根基上的培养基,种苗栽至装有营养土的小营养钵,营养土成分为:珍珠岩。营养钵上方加塑料薄膜,保证新移栽种苗所处的环境湿度为85%,温度控制在25-30℃,20天后去掉塑料薄膜,环境湿度适当降低至80%。25天后常规水肥管理,环境温度控制在35℃以下,高温夏季需遮阴及湿帘降温。
两个月后统计成活率高达100%。
三、实施例3
一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法,按下述步骤完成:
1、无菌苗的获得
于11月底从猕枣1号母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条,剪成30cm长枝段,每段5-10芽,形态学上端用封口膜封好,形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养,保持环境温度25±2℃,保证室内清洁,2-3天更换一次水溶液,两周后,腋芽萌出,待芽体长至1-2cm时,取幼嫩芽体于超净工作台上,置于灭过菌的空瓶内,75%酒精表面消毒1min,倒出酒精,加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒5min,升汞溶液与外置体充分震荡,保证消毒彻底,倒出消毒液,外植体更换入新的灭菌瓶内,无菌水震荡冲洗4-5次,再于灭菌滤纸上晾干,去掉芽体基部的伤口及损伤的叶片,接种于外植体萌发培养基MS+6-BA1.5 mg/L+IBA1.5 mg/L+1%蔗糖+0.8%琼脂上,20天后,芽体展叶,生长健壮,获得无菌苗。接种材料于光照条件下培养,光照强度2400Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d。
2、一步成苗再生诱导
于超净工作台上切取无菌苗茎段,含2-3个腋芽,置于一步成苗诱导培养基MS+6-BA1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂上,pH调至5.8,进行不定芽的再生诱导。接种材料置于光照条件下培养。光照强度2000Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d。28天后,茎段直接一步成苗,且萌发4-5新枝,颜色亮绿色,茎段一步成苗率可达100%,且周期内增值系数可达8-9。
3、生根培养
将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段,接种于MS+IBA0.2mg/L+3%蔗糖+1.2%琼脂的生根培养基上进行生根培养,不需要调节pH。光照强度2500Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d,6天即现肉眼可见不定根,短粗、健壮,20天后根长1.5-2.5cm,12条根,即可移栽。
4、移栽
生根培养25天后,直接取出生根瓶苗,用自来水洗净根基上的培养基,种苗栽至装有营养土的小营养钵,营养土成分为:珍珠岩。营养钵上方加塑料薄膜,保证新移栽种苗所处的环境湿度为95%,温度控制在25-30℃,15天后去掉塑料薄膜,环境湿度适当降低至80%。30天后常规水肥管理,环境温度控制在35℃以下,高温夏季需遮阴及湿帘降温。
两个月后统计成活率高达100%。
四、实施例4
一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法,按下述步骤完成:
1、无菌苗的获得
于11月底从猕枣2号母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条,剪成30cm长枝段,每段5-10芽,形态学上端用封口膜封好,形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养,保持环境温度25±2℃,保证室内清洁,2-3天更换一次水溶液,两周后,腋芽萌出,待芽体长至1-2cm时,取幼嫩芽体于超净工作台上,置于灭过菌的空瓶内,75%酒精表面消毒1min,倒出酒精,加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒5min,升汞溶液与外置体充分震荡,保证消毒彻底,倒出消毒液,外植体更换入新的灭菌瓶内,无菌水震荡冲洗4-5次,再于灭菌滤纸上晾干,去掉芽体基部的伤口及损伤的叶片,接种于外植体萌发培养基MS+6-BA2.0 mg/L+IBA1.0 mg/L+2%蔗糖+0.8%琼脂上,22天后,芽体展叶,生长健壮,获得无菌苗。接种材料于光照条件下培养,光照强度2500Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d。
2、一步成苗再生诱导
于超净工作台上切取无菌苗茎段,含2-3个腋芽,置于一步成苗诱导培养基MS+6-BA1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂上,pH调至5.8,进行不定芽的再生诱导。接种材料置于光照条件下培养。光照强度2000Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d。28天后,茎段直接一步成苗,且萌发5-6新枝,,颜色亮绿色,茎段一步成苗率可达100%,且周期内增值系数可达9。
3、生根培养
将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段,接种于MS+IBA 0.2 mg/L+3%蔗糖+1.0%琼脂的生根培养基上进行生根培养,不需调节pH。光照强度2800Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d,6天即现肉眼可见不定根,短粗、健壮,15天后根长1.5-3cm,12条根,即可移栽。
4、移栽
生根培养25天后,直接取出生根瓶苗,用自来水洗净根基上的培养基,种苗栽至装有营养土的小营养钵,营养土成分为:珍珠岩。营养钵上方加塑料薄膜,保证新移栽种苗所处的环境湿度为90%,温度控制在25-30℃,20天后去掉塑料薄膜,环境湿度适当降低至75%。28天后常规水肥管理,环境温度控制在35℃以下,高温夏季需遮阴及湿帘降温。两个月后统计成活率高达100%。
五、实施例5
一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法,按下述步骤完成:
1、无菌苗的获得
于11月底从猕枣2号母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条,剪成30cm长枝段,每段5-10芽,形态学上端用封口膜封好,形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养,保持环境温度25±2℃,保证室内清洁,2-3天更换一次水溶液,两周后,腋芽萌出,待芽体长至1-2cm时,取幼嫩芽体于超净工作台上,置于灭过菌的空瓶内,75%酒精表面消毒1min,倒出酒精,加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒3min,升汞溶液与外置体充分震荡,保证消毒彻底,倒出消毒液,外植体更换入新的灭菌瓶内,无菌水震荡冲洗4-5次,再于灭菌滤纸上晾干,去掉芽体基部的伤口及损伤的叶片,接种于外植体萌发培养基MS+6-BA1.0 mg/L+IBA0.1 mg/L+2%蔗糖+0.8%琼脂上,22天后,芽体展叶,生长健壮,获得无菌苗。接种材料于光照条件下培养,光照强度2000Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d。
2、一步成苗再生诱导
于超净工作台上切取无菌苗茎段,含2-3个腋芽,置于一步成苗诱导培养基MS+6-BA0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂上,pH调至5.8,进行不定芽的再生诱导。接种材料置于光照条件下培养。光照强度1800Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d。30天后,茎段直接一步成苗,且萌发3-4新枝,,颜色亮绿色,茎段一步成苗率可达100%,且周期内增值系数可达8。
3、生根培养
将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段,接种于MS+IBA 0.1 mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂的生根培养基上进行生根培养,pH值5.8。光照强度2500Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d,8天即现肉眼可见不定根,短粗、健壮,15天后根长1.5-3cm,12条根,即可移栽。
4、移栽
生根培养25天后,直接取出生根瓶苗,用自来水洗净根基上的培养基,种苗栽至装有营养土的小营养钵,营养土成分为:珍珠岩。营养钵上方加塑料薄膜,保证新移栽种苗所处的环境湿度为95%,温度控制在25-30℃,15天后去掉塑料薄膜,环境湿度适当降低至80%。30天后常规水肥管理,环境温度控制在35℃以下,高温夏季需遮阴及湿帘降温。
两个月后统计成活率高达100%。
六、实施例6
一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法,按下述步骤完成:
1、无菌苗的获得
于11月底从猕枣2号母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条,剪成30cm长枝段,每段5-10芽,形态学上端用封口膜封好,形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养,保持环境温度25±2℃,保证室内清洁,2-3天更换一次水溶液,两周后,腋芽萌出,待芽体长至1-2cm时,取幼嫩芽体于超净工作台上,置于灭过菌的空瓶内,75%酒精表面消毒1min,倒出酒精,加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒4min,升汞溶液与外置体充分震荡,保证消毒彻底,倒出消毒液,外植体更换入新的灭菌瓶内,无菌水震荡冲洗4-5次,再于灭菌滤纸上晾干,去掉芽体基部的伤口及损伤的叶片,接种于外植体萌发培养基MS+6-BA3.0 mg/L+IBA0.5 mg/L+1.5%蔗糖+0.8%琼脂上,18天后,芽体展叶,生长健壮,获得无菌苗。接种材料于光照条件下培养,光照强度2200Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d。
2、一步成苗再生诱导
于超净工作台上切取无菌苗茎段,含2-3个腋芽,置于一步成苗诱导培养基MS+6-BA2.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂上,pH调至5.8,进行不定芽的再生诱导。接种材料置于光照条件下培养。光照强度1500Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d。25天后,茎段直接一步成苗,且萌发4-5新枝,,颜色亮绿色,茎段一步成苗率可达100%,且周期内增值系数可达9。
3、生根培养
将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段,接种于MS+IBA 0.5 mg/L+3%蔗糖+1.2%琼脂的生根培养基上进行生根培养,不需调节pH。光照强度3000Lx,培养室内温度25±2℃,光照12h/d,5天即现肉眼可见不定根,短粗、健壮,10天后根长1.5-3cm,12条根,即可移栽。
4、移栽
生根培养25天后,直接取出生根瓶苗,用自来水洗净根基上的培养基,种苗栽至装有营养土的小营养钵,营养土成分为:珍珠岩。营养钵上方加塑料薄膜,保证新移栽种苗所处的环境湿度为85%,温度控制在25-30℃,16天后去掉塑料薄膜,环境湿度适当降低至70%。35天后常规水肥管理,环境温度控制在35℃以下,高温夏季需遮阴及湿帘降温。
两个月后统计成活率高达100%。

Claims (1)

1.一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法,包括以下步骤:
①无菌苗的获得
1)于11月底从母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条,将枝条剪成30cm长枝段,每段5-10芽;
2)将所述枝段形态学上端用封口膜封好,形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养,保持环境温度25±2℃,保证室内清洁,2-3天更换一次水溶液,两周后,腋芽萌出;
3)待腋芽芽体长至1-2cm时,取幼嫩芽体于超净工作台上,置于灭过菌的空瓶内,75%酒精表面消毒1min,倒出酒精,加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒2-5min,升汞溶液与外植体充分接触震荡,保证消毒彻底,倒出消毒液,外植体更换入新的灭菌瓶内,无菌水震荡冲洗4-5次,再于灭菌滤纸上晾干;
4)去掉腋芽芽体基部的伤口及损伤的叶片,接种于外植体萌发培养基上;
5)18-25天后,芽体展叶,生长健壮,获得无菌苗;
②一步成苗诱导
1)于超净工作台上切取无菌苗茎段,带2-3个腋芽,置于再生培养基上,pH调至5.8,进行不定芽的再生诱导;
2)接种材料置于光照条件下培养;
3)25-30天后,不定芽一步成苗,并萌发3-6新枝,增殖系数可达6-9;
③生根培养
将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段,接种于生根培养基上进行生根培养,5-8天即现肉眼可见不定根,短粗、健壮,10-15天后根长1.5-3cm,10-15条根,即可移栽;
④移栽
1)生根培养20-25天后,直接取出生根瓶苗,用自来水洗净根基上的培养基;
2)种苗栽至装有营养土的小营养钵,营养钵上方加盖塑料薄膜,保证新移栽种苗所处的环境湿度为85%-95%,温度控制在25-30℃,15-20天后去掉塑料薄膜,环境湿度适当降低至60%-80%;
3)25-35天后常规水肥管理,环境温度控制在35℃以下,高温夏季需遮阴及湿帘降温;
所述软枣猕猴桃品种为:猕枣1号、猕枣2号;
其特征在于:
所述萌发培养基为:MS+6-BA1.0-3.0 mg/L+IBA0.1-2.0mg/L+1%-2%蔗糖+0.8%琼脂;
所述无菌苗获得方法中,接种材料培养条件为:光照强度2000-2500Lx,光照12h/d,培养室内温度25±2℃;
所述一步成苗再生培养基为:MS+6-BA 0.1-2.0 mg/L+IBA 0.1-0.5 mg/L+3 % 蔗糖+0.8%琼脂;
所述一步成苗再生培养过程中,接种材料培养条件为:光照强度1500-2000Lx,光照12h/d,培养室内温度25±2℃;
所述生根培养基为:MS+IBA 0.01-0.5 mg/L+3%蔗糖+0.6-1.2%琼脂;
所述生根培养过程中,接种材料培养条件为:光照强度2500-3000Lx,光照12h/d,培养室内温度25±2℃;
所述营养土成分为:珍珠岩。
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