CN109392712A - 一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法，涉及猕猴桃的组培快繁方法。本方法是：①获得无菌苗；②一步成苗诱导；③生根培养；④移栽；其特征在于：包括萌发培养基、一步成苗培养基和生根培养基及相应的培养条件。本发明采用三种针对性培养基对软枣猕猴桃品种进行组织培养，能在短期内快速繁育大量软枣猕猴桃种苗，增值系数可达9.0，并且通过组织培养能最大限度地保证种苗质量，提高种苗繁育速度，实现种苗工业化生产，满足生产上对软枣品种种苗的需求；直接组培品种种苗，建立品种采穗圃，打破传统嫁接繁殖中嫁接接穗的量的瓶颈，充分满足生产的需要。

Description

一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法

技术领域

本发明涉及猕猴桃组培快繁方法，尤其涉及一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法。

背景技术

软枣猕猴桃果型漂亮，平均单果重4-20克，果面光滑，软熟果实无需剥皮，直接食用，深受广大消费者的喜爱。软枣猕猴桃果实耐储藏性一般。植株树势强健，以中、长果枝结果为主，实生苗第六年株产约6-8千克。虽然软枣猕猴桃能适应辽宁5-8.2℃的年均温，也能适应福建16.9-17.9℃的年均温，但在华中武汉地区，不同倍性的软枣猕猴桃会出现适应性分化，2倍体软枣猕猴桃能开花结果，但夏季生长缓慢，果实风味差，四倍体软枣猕猴桃花量少，部分年份出现只开花不结果的现象。猕枣1号和猕枣2号为中国科学院武汉植物园自主研发选育的软枣猕猴桃新品种，能很好地适应华中地区的生态环境，快速达到丰产。随着中国猕猴桃新品种选育速度的的加快，为了快速的推广新品种和保留新品种优良品质，采用猕猴桃的组织培养技术进行繁殖是最快速和有效的方法之一，目前猕枣1号、猕枣2号种苗来源主要是扦插苗和嫁接苗，组培育苗技术方法还未见报道，然而扦插成活率不高以及接穗质量及数量的限制都成为猕枣1号、猕枣2号大面积推广及产业化生产的一个瓶颈。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的就在于提供一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法，即直接通过组织培养方法获得品质均一、优良的离体猕枣1号、猕枣2号组培种苗，并通过优化离体快繁体系，实现快速繁育猕枣1号、猕枣2号软枣猕猴桃优质种苗的目的，以供生产中不断增长的种苗需求。

本发明采取的技术方案如下：

以猕枣1号、猕枣2号一年生枝条水培萌芽为外植体，消毒后进行组织培养，获得无菌苗，以无菌苗茎段为再生组织来源，进行一步成苗的诱导分化、生根培养。茎段直接成苗率高达100%，且后期的增殖培养不需要更换培养基，增值系数可达9.0。短期内可快速获得大量优质品种种苗，实现猕枣1号、猕枣2号种苗工厂化快速育苗。

具体地说，本发明包括以下步骤：

①无菌苗的获得

1）于11月底从母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条，将枝条剪成30cm长枝段，每段5-10芽；

2）将所述枝段形态学上端用封口膜封好，形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养，保持环境温度25±2℃，保证室内清洁，2-3天更换一次水溶液，两周后，腋芽萌出；

3）待腋芽芽体长至1-2cm时，取幼嫩芽体于超净工作台上，置于灭过菌的空瓶内，75%酒精表面消毒1min，倒出酒精，加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒2-5min，升汞溶液与外植体充分接触震荡，保证消毒彻底，倒出消毒液，外植体更换入新的灭菌瓶内，无菌水震荡冲洗4-5次，再于灭菌滤纸上晾干；

4）去掉腋芽芽体基部的伤口及损伤的叶片，接种于外植体萌发培养基上；

5）18-25天后，芽体展叶，生长健壮，获得无菌苗；

②一步成苗诱导

1）于超净工作台上切取无菌苗茎段，带2-3个腋芽，置于再生培养基上，pH调至5.8，进行不定芽的再生诱导；

2）接种材料置于光照条件下培养；

3）25-30天后，不定芽一步成苗，并萌发3-6新枝，增殖系数可达6-9；

③生根培养

将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段，接种于生根培养基上进行生根培养，5-8天即现肉眼可见不定根，短粗、健壮，10-15天后根长1.5-3cm，10-15条根，即可移栽；

④移栽

1）生根培养20-25天后，直接取出生根瓶苗，用自来水洗净根基上的培养基；

2）种苗栽至装有营养土的小营养钵，营养钵上方加盖塑料薄膜，保证新移栽种苗所处的环境湿度为85%-95%，温度控制在25-30℃，15-20天后去掉塑料薄膜，环境湿度适当降低至60%-80%；

3）25-35天后常规水肥管理，环境温度控制在35℃以下，高温夏季需遮阴及湿帘降温；

所述软枣猕猴桃品种为：猕枣1号、猕枣2号；

其特征在于：

所述萌发培养基为：MS+6-BA1.0-3.0 mg/L+IBA0.1-2.0mg/L+1%-2%蔗糖+0.8%琼脂；

所述无菌苗获得方法中，接种材料培养条件为：光照强度2000-2500Lx，光照12h/d，培养室内温度25±2℃；

所述一步成苗再生培养基为：MS+6-BA 0.1-2.0 mg/L+IBA 0.1-0.5 mg/L+3 % 蔗糖+0.8%琼脂；

所述一步成苗再生培养过程中，接种材料培养条件为：光照强度1500-2000Lx，光照12h/d，培养室内温度25±2℃；

所述生根培养基为：MS+IBA 0.01-0.5 mg/L+3%蔗糖+0.6-1.2%琼脂；

所述生根培养过程中，接种材料培养条件为：光照强度2500-3000Lx，光照12h/d，培养室内温度25±2℃；

所述营养土成分为：珍珠岩。

本发明的创新点：本发明初期采用室内蔗糖水溶液培养的方法，来促发腋芽萌发做为外植体来源，规避了直接室外采样的污染源，极大降低了细菌、真菌类及病毒携带的风险，同时降低升汞处理时间，减少对外植体组织细胞生理上的伤害。本方法直接通过一步成苗发获得高增殖系数的组培种苗，很大程度上降低时间及人工成本。组织培养过程中对材料接受的光照强度作出先降低后升高的调整，增殖过程中适当降低光照强度，能提高其扩繁增殖系数，后期生根逐渐增大光照强度，提高种苗的抗逆性，有利于提高移栽成活率。培养后期生根阶段增加琼脂粉的使用量，更有利于发根，也更利于移栽时对植株根基部位培养基的清洗，从而减少对根部的损伤，极大提高移栽成活率。种苗不经驯化直接移栽，节约时间及人力相关资源，从很大程度上降低了生产成本。移栽初期一定时间内的温湿度的控制，有利于种苗在短期快速适应移栽后环境，既缩短了育种时间，也极大地提高了种苗移栽成活率。

本发明具有下列优点和积极效果：

①本发明采用三种针对性培养基对猕枣1号、猕枣2号进行组织培养，能在短期内快速繁育大量软枣猕猴桃种苗，并且通过组织培养能最大限度的保证种苗质量，提高种苗繁育速度，实现种苗工厂化生产，满足生厂上对猕枣1号、猕枣2号种苗的需求。

②外植体提供过程中采用水培出芽方式，能够最大程度的控制无菌苗建立过程中的污染，很大程度上提高的种苗繁育速度，缩短种苗繁育周期，降低组培成本。

③在种苗培育过程中，培养条件的变更，尤其是光照强度在扩繁时降低，后期生根增强，有利于加快种苗繁育速度，蓄积营养生长能力，增强种苗抗逆性，大大提高后期组培种苗移栽成活率。

④种苗移栽前期，对移栽环境的温湿度的严格控制，能最大程度的保证种苗移栽成活率，从而减少损失、降低生产成本。

⑤相对于以往的扦插、嫁接获得猕枣1号、猕枣2号种苗，组培快繁育苗更能保证种苗质量，种苗生长一致、整齐，且能在更短的时间内满足生产对种苗数量上的需求。

⑥直接组培品种种苗，建立品种采穗圃，打破传统嫁接繁殖中嫁接接穗的量的瓶颈，充分满足生产的需要。

具体实施方式

以下结合实施例详细说明。

一、实施例1

一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法，按下述步骤完成：

1、无菌苗的获得

于11月底从猕枣1号母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条，剪成30cm长枝段，每段5-10芽，形态学上端用封口膜封好，形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养，保持环境温度25±2℃，保证室内清洁，2-3天更换一次水溶液，两周后，腋芽萌出，待芽体长至1-2cm时，取幼嫩芽体于超净工作台上，置于灭过菌的空瓶内，75%酒精表面消毒1min，倒出酒精，加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒3min，升汞溶液与外置体充分震荡，保证消毒彻底，倒出消毒液，外植体更换入新的灭菌瓶内，无菌水震荡冲洗4-5次，再于灭菌滤纸上晾干，去掉芽体基部的伤口及损伤的叶片，接种于外植体萌发培养基MS+6-BA1.0 mg/L+IBA1.0 mg/L+2%蔗糖+0.8%琼脂上，20天后，芽体展叶，生长健壮，获得无菌苗。接种材料于光照条件下培养，光照强度2500Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d。

2、一步成苗再生诱导

于超净工作台上切取无菌苗茎段，含2-3个腋芽，置于一步成苗诱导培养基MS+6-BA0.8 mg/L+IBA 0.2mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂上，pH调至5.8，进行不定芽的再生诱导。接种材料置于光照条件下培养。光照强度1500Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d。30天后，茎段直接一步成苗，且萌发3-4新枝，颜色亮绿色，茎段一步成苗率可达100%，且周期内增值系数可达9。

3、生根培养

将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段，接种于MS+IBA0.1mg/L+3%蔗糖+1.0%琼脂的生根培养基上进行生根培养，不需要调节pH。光照强度2500Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d，7天即现肉眼可见不定根，短粗、健壮，15天后根长1.5-2.5cm，12条根，即可移栽。

4、移栽

生根培养25天后，直接取出生根瓶苗，用自来水洗净根基上的培养基，种苗栽至装有营养土的小营养钵，营养土成分为：珍珠岩。营养钵上方加塑料薄膜，保证新移栽种苗所处的环境湿度为90%，温度控制在25-30℃，20天后去掉塑料薄膜，环境湿度适当降低至75%。30天后常规水肥管理，环境温度控制在35℃以下，高温夏季需遮阴及湿帘降温。

两个月后统计成活率高达100%。

二、实施例2

一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法，按下述步骤完成：

1、无菌苗的获得

于11月底从猕枣1号母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条，剪成30cm长枝段，每段5-10芽，形态学上端用封口膜封好，形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养，保持环境温度25±2℃，保证室内清洁，2-3天更换一次水溶液，两周后，腋芽萌出，待芽体长至1-2cm时，取幼嫩芽体于超净工作台上，置于灭过菌的空瓶内，75%酒精表面消毒1min，倒出酒精，加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒4min，升汞溶液与外置体充分震荡，保证消毒彻底，倒出消毒液，外植体更换入新的灭菌瓶内，无菌水震荡冲洗4-5次，再于灭菌滤纸上晾干，去掉芽体基部的伤口及损伤的叶片，接种于外植体萌发培养基MS+6-BA2.0 mg/L+IBA2.0 mg/L+2%蔗糖+0.8%琼脂上，24天后，芽体展叶，生长健壮，获得无菌苗。接种材料于光照条件下培养，光照强度2200Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d。

2、一步成苗再生诱导

于超净工作台上切取无菌苗茎段，含2-3个腋芽，置于一步成苗诱导培养基MS+6-BA0.1mg/L+IBA 0.1mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂上，pH调至5.8，进行不定芽的再生诱导。接种材料置于光照条件下培养。光照强度1500Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d。30天后，茎段直接一步成苗，且每茎段萌发3新枝，颜色亮绿色，茎段一步成苗率可达100%，且周期内增值系数可达7-8。

3、生根培养

将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段，接种于MS+IBA0.01mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂的生根培养基上进行生根培养，pH5.8。光照强度2600Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d，8天即现肉眼可见不定根，短粗、健壮，18天后根长1.5-2.5cm，10条根，即可移栽。

4、移栽

生根培养25天后，直接取出生根瓶苗，用自来水洗净根基上的培养基，种苗栽至装有营养土的小营养钵，营养土成分为：珍珠岩。营养钵上方加塑料薄膜，保证新移栽种苗所处的环境湿度为85%，温度控制在25-30℃，20天后去掉塑料薄膜，环境湿度适当降低至80%。25天后常规水肥管理，环境温度控制在35℃以下，高温夏季需遮阴及湿帘降温。

两个月后统计成活率高达100%。

三、实施例3

一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法，按下述步骤完成：

1、无菌苗的获得

于11月底从猕枣1号母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条，剪成30cm长枝段，每段5-10芽，形态学上端用封口膜封好，形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养，保持环境温度25±2℃，保证室内清洁，2-3天更换一次水溶液，两周后，腋芽萌出，待芽体长至1-2cm时，取幼嫩芽体于超净工作台上，置于灭过菌的空瓶内，75%酒精表面消毒1min，倒出酒精，加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒5min，升汞溶液与外置体充分震荡，保证消毒彻底，倒出消毒液，外植体更换入新的灭菌瓶内，无菌水震荡冲洗4-5次，再于灭菌滤纸上晾干，去掉芽体基部的伤口及损伤的叶片，接种于外植体萌发培养基MS+6-BA1.5 mg/L+IBA1.5 mg/L+1%蔗糖+0.8%琼脂上，20天后，芽体展叶，生长健壮，获得无菌苗。接种材料于光照条件下培养，光照强度2400Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d。

2、一步成苗再生诱导

于超净工作台上切取无菌苗茎段，含2-3个腋芽，置于一步成苗诱导培养基MS+6-BA1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂上，pH调至5.8，进行不定芽的再生诱导。接种材料置于光照条件下培养。光照强度2000Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d。28天后，茎段直接一步成苗，且萌发4-5新枝，颜色亮绿色，茎段一步成苗率可达100%，且周期内增值系数可达8-9。

3、生根培养

将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段，接种于MS+IBA0.2mg/L+3%蔗糖+1.2%琼脂的生根培养基上进行生根培养，不需要调节pH。光照强度2500Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d，6天即现肉眼可见不定根，短粗、健壮，20天后根长1.5-2.5cm，12条根，即可移栽。

4、移栽

生根培养25天后，直接取出生根瓶苗，用自来水洗净根基上的培养基，种苗栽至装有营养土的小营养钵，营养土成分为：珍珠岩。营养钵上方加塑料薄膜，保证新移栽种苗所处的环境湿度为95%，温度控制在25-30℃，15天后去掉塑料薄膜，环境湿度适当降低至80%。30天后常规水肥管理，环境温度控制在35℃以下，高温夏季需遮阴及湿帘降温。

两个月后统计成活率高达100%。

四、实施例4

一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法，按下述步骤完成：

1、无菌苗的获得

于11月底从猕枣2号母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条，剪成30cm长枝段，每段5-10芽，形态学上端用封口膜封好，形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养，保持环境温度25±2℃，保证室内清洁，2-3天更换一次水溶液，两周后，腋芽萌出，待芽体长至1-2cm时，取幼嫩芽体于超净工作台上，置于灭过菌的空瓶内，75%酒精表面消毒1min，倒出酒精，加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒5min，升汞溶液与外置体充分震荡，保证消毒彻底，倒出消毒液，外植体更换入新的灭菌瓶内，无菌水震荡冲洗4-5次，再于灭菌滤纸上晾干，去掉芽体基部的伤口及损伤的叶片，接种于外植体萌发培养基MS+6-BA2.0 mg/L+IBA1.0 mg/L+2%蔗糖+0.8%琼脂上，22天后，芽体展叶，生长健壮，获得无菌苗。接种材料于光照条件下培养，光照强度2500Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d。

2、一步成苗再生诱导

于超净工作台上切取无菌苗茎段，含2-3个腋芽，置于一步成苗诱导培养基MS+6-BA1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂上，pH调至5.8，进行不定芽的再生诱导。接种材料置于光照条件下培养。光照强度2000Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d。28天后，茎段直接一步成苗，且萌发5-6新枝，，颜色亮绿色，茎段一步成苗率可达100%，且周期内增值系数可达9。

3、生根培养

将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段，接种于MS+IBA 0.2 mg/L+3%蔗糖+1.0%琼脂的生根培养基上进行生根培养，不需调节pH。光照强度2800Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d，6天即现肉眼可见不定根，短粗、健壮，15天后根长1.5-3cm，12条根，即可移栽。

4、移栽

生根培养25天后，直接取出生根瓶苗，用自来水洗净根基上的培养基，种苗栽至装有营养土的小营养钵，营养土成分为：珍珠岩。营养钵上方加塑料薄膜，保证新移栽种苗所处的环境湿度为90%，温度控制在25-30℃，20天后去掉塑料薄膜，环境湿度适当降低至75%。28天后常规水肥管理，环境温度控制在35℃以下，高温夏季需遮阴及湿帘降温。两个月后统计成活率高达100%。

五、实施例5

一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法，按下述步骤完成：

1、无菌苗的获得

于11月底从猕枣2号母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条，剪成30cm长枝段，每段5-10芽，形态学上端用封口膜封好，形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养，保持环境温度25±2℃，保证室内清洁，2-3天更换一次水溶液，两周后，腋芽萌出，待芽体长至1-2cm时，取幼嫩芽体于超净工作台上，置于灭过菌的空瓶内，75%酒精表面消毒1min，倒出酒精，加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒3min，升汞溶液与外置体充分震荡，保证消毒彻底，倒出消毒液，外植体更换入新的灭菌瓶内，无菌水震荡冲洗4-5次，再于灭菌滤纸上晾干，去掉芽体基部的伤口及损伤的叶片，接种于外植体萌发培养基MS+6-BA1.0 mg/L+IBA0.1 mg/L+2%蔗糖+0.8%琼脂上，22天后，芽体展叶，生长健壮，获得无菌苗。接种材料于光照条件下培养，光照强度2000Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d。

2、一步成苗再生诱导

于超净工作台上切取无菌苗茎段，含2-3个腋芽，置于一步成苗诱导培养基MS+6-BA0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂上，pH调至5.8，进行不定芽的再生诱导。接种材料置于光照条件下培养。光照强度1800Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d。30天后，茎段直接一步成苗，且萌发3-4新枝，，颜色亮绿色，茎段一步成苗率可达100%，且周期内增值系数可达8。

3、生根培养

将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段，接种于MS+IBA 0.1 mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂的生根培养基上进行生根培养，pH值5.8。光照强度2500Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d，8天即现肉眼可见不定根，短粗、健壮，15天后根长1.5-3cm，12条根，即可移栽。

4、移栽

生根培养25天后，直接取出生根瓶苗，用自来水洗净根基上的培养基，种苗栽至装有营养土的小营养钵，营养土成分为：珍珠岩。营养钵上方加塑料薄膜，保证新移栽种苗所处的环境湿度为95%，温度控制在25-30℃，15天后去掉塑料薄膜，环境湿度适当降低至80%。30天后常规水肥管理，环境温度控制在35℃以下，高温夏季需遮阴及湿帘降温。

两个月后统计成活率高达100%。

六、实施例6

一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法，按下述步骤完成：

1、无菌苗的获得

于11月底从猕枣2号母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条，剪成30cm长枝段，每段5-10芽，形态学上端用封口膜封好，形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养，保持环境温度25±2℃，保证室内清洁，2-3天更换一次水溶液，两周后，腋芽萌出，待芽体长至1-2cm时，取幼嫩芽体于超净工作台上，置于灭过菌的空瓶内，75%酒精表面消毒1min，倒出酒精，加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒4min，升汞溶液与外置体充分震荡，保证消毒彻底，倒出消毒液，外植体更换入新的灭菌瓶内，无菌水震荡冲洗4-5次，再于灭菌滤纸上晾干，去掉芽体基部的伤口及损伤的叶片，接种于外植体萌发培养基MS+6-BA3.0 mg/L+IBA0.5 mg/L+1.5%蔗糖+0.8%琼脂上，18天后，芽体展叶，生长健壮，获得无菌苗。接种材料于光照条件下培养，光照强度2200Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d。

2、一步成苗再生诱导

于超净工作台上切取无菌苗茎段，含2-3个腋芽，置于一步成苗诱导培养基MS+6-BA2.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂上，pH调至5.8，进行不定芽的再生诱导。接种材料置于光照条件下培养。光照强度1500Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d。25天后，茎段直接一步成苗，且萌发4-5新枝，，颜色亮绿色，茎段一步成苗率可达100%，且周期内增值系数可达9。

3、生根培养

将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段，接种于MS+IBA 0.5 mg/L+3%蔗糖+1.2%琼脂的生根培养基上进行生根培养，不需调节pH。光照强度3000Lx，培养室内温度25±2℃，光照12h/d，5天即现肉眼可见不定根，短粗、健壮，10天后根长1.5-3cm，12条根，即可移栽。

4、移栽

生根培养25天后，直接取出生根瓶苗，用自来水洗净根基上的培养基，种苗栽至装有营养土的小营养钵，营养土成分为：珍珠岩。营养钵上方加塑料薄膜，保证新移栽种苗所处的环境湿度为85%，温度控制在25-30℃，16天后去掉塑料薄膜，环境湿度适当降低至70%。35天后常规水肥管理，环境温度控制在35℃以下，高温夏季需遮阴及湿帘降温。

两个月后统计成活率高达100%。

Claims (1)

1.一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法，包括以下步骤：

①无菌苗的获得

1）于11月底从母树上剪取生长健壮腋芽饱满的一年生枝条，将枝条剪成30cm长枝段，每段5-10芽；

2）将所述枝段形态学上端用封口膜封好，形态学下端浸泡2‰蔗糖水溶液中室内培养，保持环境温度25±2℃，保证室内清洁，2-3天更换一次水溶液，两周后，腋芽萌出；

3）待腋芽芽体长至1-2cm时，取幼嫩芽体于超净工作台上，置于灭过菌的空瓶内，75%酒精表面消毒1min，倒出酒精，加入质量体积比为0.1%升汞深入消毒2-5min，升汞溶液与外植体充分接触震荡，保证消毒彻底，倒出消毒液，外植体更换入新的灭菌瓶内，无菌水震荡冲洗4-5次，再于灭菌滤纸上晾干；

4）去掉腋芽芽体基部的伤口及损伤的叶片，接种于外植体萌发培养基上；

5）18-25天后，芽体展叶，生长健壮，获得无菌苗；

②一步成苗诱导

1）于超净工作台上切取无菌苗茎段，带2-3个腋芽，置于再生培养基上，pH调至5.8，进行不定芽的再生诱导；

2）接种材料置于光照条件下培养；

3）25-30天后，不定芽一步成苗，并萌发3-6新枝，增殖系数可达6-9；

③生根培养

将幼苗切成含3-4个腋芽的茎段，接种于生根培养基上进行生根培养，5-8天即现肉眼可见不定根，短粗、健壮，10-15天后根长1.5-3cm，10-15条根，即可移栽；

④移栽

1）生根培养20-25天后，直接取出生根瓶苗，用自来水洗净根基上的培养基；

2）种苗栽至装有营养土的小营养钵，营养钵上方加盖塑料薄膜，保证新移栽种苗所处的环境湿度为85%-95%，温度控制在25-30℃，15-20天后去掉塑料薄膜，环境湿度适当降低至60%-80%；

3）25-35天后常规水肥管理，环境温度控制在35℃以下，高温夏季需遮阴及湿帘降温；

所述软枣猕猴桃品种为：猕枣1号、猕枣2号；

其特征在于：

所述萌发培养基为：MS+6-BA1.0-3.0 mg/L+IBA0.1-2.0mg/L+1%-2%蔗糖+0.8%琼脂；

所述无菌苗获得方法中，接种材料培养条件为：光照强度2000-2500Lx，光照12h/d，培养室内温度25±2℃；

所述一步成苗再生培养基为：MS+6-BA 0.1-2.0 mg/L+IBA 0.1-0.5 mg/L+3 % 蔗糖+0.8%琼脂；

所述一步成苗再生培养过程中，接种材料培养条件为：光照强度1500-2000Lx，光照12h/d，培养室内温度25±2℃；

所述生根培养基为：MS+IBA 0.01-0.5 mg/L+3%蔗糖+0.6-1.2%琼脂；

所述生根培养过程中，接种材料培养条件为：光照强度2500-3000Lx，光照12h/d，培养室内温度25±2℃；

所述营养土成分为：珍珠岩。