CN106613982A

CN106613982A - 一种牡丹组织培养生根新方法

Info

Publication number: CN106613982A
Application number: CN201611214417.3A
Authority: CN
Inventors: 邢晓丹; 李冰
Original assignee: Xinchang County Jun Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Xinchang County Jun Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2016-12-26
Filing date: 2016-12-26
Publication date: 2017-05-10

Abstract

本发明提供一种牡丹组织培养生根新方法，包括下列步骤：（1）外植体的灭菌处理；（2）灭菌处理后的外置体接种子基本培养基PM；（3）外植体转接到再生嫩茎增殖培养基中继续培养；（4）嫩茎切下转入生根培养基中培养；（5）将其带瓶移入大棚。由于在本发明的基本培养基1/2MS上添加水解乳蛋白，而且改变了大量元素的组成和含量，使得基本培养基中盐分的总摩尔数减少，大大降低了牡丹培养物的褐变；同时水解乳蛋白培养基上的诱导效果较好，增殖倍数最高，生根良好。

Description

一种牡丹组织培养生根新方法

技术领域

本发明涉及水产品加工技术领域，尤其是涉及一种鱿鱼鱼肠及生产工艺。

背景技术

牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.）以其花硕大（直径10～25 cm），多姿（单瓣、半重瓣、重瓣），多彩（白、粉、红、黄、蓝、绿、紫、复色等）而显雍容华贵、富丽端庄，被誉为“国色天香”、“花中之王”，明清时已是国花.牡丹自16～18世纪引种到国外，在许多国家也极受欢迎。

中国作为牡丹唯一的原产地，栽培历史悠久，从南北朝至今已有1500多年，其品种类型已达800余种，分布于我国大江南北。它作为我国原生的、古老的特有植物是研究栽培植物起源、人工选择理论和进行科学试验的良好材料。牡丹作为我国重要的出口花卉，在长期的牡丹栽培历史过程中，我国人民对它的认识逐步深入，产生了深厚的感情，也历史地形成和发展出了我国特有的牡丹文化。

牡丹传统的繁殖方法多采用播种、嫁接和分株方式，不仅成苗周期长，而且出苗量少，质量参差不齐，难以满足生产的需求。观赏牡丹的快繁技术研究多以生成愈伤组织为主，但这些方法存在操作复杂、繁殖系数较低、诱导芽生长较弱等缺陷。

本申请的发明人通过多年潜心研究，改进了牡丹培养生根的方法，以牡丹当年的生嫩枝茎尖为外植体，对牡丹的快繁培养基成分进行了优化，通过在培养基中加入附加物水解乳蛋白，并且发现了一种更适于牡丹组织培养的培养基，克服以上缺陷，以期为牡丹种苗的工厂化生产提供科。

发明内容

因此，本发明的一个目的是提供一种用于牡丹组织培养生根新方法的基本培养基，其配方的组成为，1/2MS、PH 5.0～6.3、蔗糖25～45 g/L、山嵛醇0.5～1.5 g/L、琼脂5～15 g/L、水解乳蛋白100～300 mg。

本发明另一个目的是提供一种用于牡丹组织培养的生根培养基，其配方为：在基本培养基1/2MS的基础上添加0.05～0.20 mg/LNAA、0.05～0.20mgIBA。

本发明的另一个目的是提供一种牡丹组织培养生根新方法，其特征在于包括下列步骤:（1）外植体的灭菌处理；（2）将步骤（1）处理后的外置体接种于基本培养基1/2MS；（3）将经过步骤（2）培养的外植体组织转接于增殖培养基中继续进行培养；（4）将经过步骤（3）继代培养所得的嫩茎切下转入生根培养基中培养；（5）将经过步骤（4）生根培养的小苗带瓶移入大棚。

其中，外植体灭菌的步骤包括：洗衣粉液浸泡10~30 min→流水冲洗至清-剥去鳞片→体积分数70%酒精浸泡10~50s→无菌水冲洗1~3 min→50 g/L次氯酸钠液浸泡10~30min或25 g/L次氯酸钠溶液浸泡20~40 min无菌水漂洗3次，每次1 min。

优选的，上述基本培养基的配方的组成为，1/2MS PH 5.5～6.0、蔗糖30~40 g/L、山嵛醇0.5～1.5 g/L、琼脂8~12 g/L、水解乳蛋白150~250 mg。

优选的，步骤（3）中在基本培养基1/2MS的基础上添加0.5~2.0 mg/L 6-BA、0.5~2.0 mg/ LKT作为再生嫩茎增殖培养基

优选的，上述生根培养基的配方为，在基本培养基1/2MS的基础上添加0.1-0.15 mg/LNAA、0.1-0.15 mg IBA。

优选的，外植体灭菌的步骤包括：洗衣粉液浸泡15~25 min→流水冲洗至清→剥去鳞片→体积分数70%酒精浸泡15~30s→无菌水冲洗1~2 min→50 g/L次氯酸钠液浸泡15~25min或25 g/L次氯酸钠溶液浸泡25~35 min→无菌水漂洗3次，每次1 min。

优选的，步骤（4）中的生根培养基在121℃条件下灭菌20 min。培养温度为（20±2）℃，每日光照14h，光照强度2000lx。

优选的，步骤（5）中，生根培养的小苗根长为1.5～2.0 cm时，将其带瓶移入大棚炼苗7d，移栽前3d用50%可湿性多菌灵800倍液喷浇灭菌，幼苗种植基质有蛭石、草炭土。

由于在本发明的基本培养基1/2MS上添加水解乳蛋白，而且改变了大量元素的组成和含量，使得基本培养基中盐分的总摩尔数减少，大大降低了牡丹培养物的褐变；也避免了高盐培养基对植株生长的抑制，使得在继代增殖阶段的植株生长健壮，叶片浓绿，叶柄呈粉红、红紫色，茎段木质化程度增加，增殖率显著高于平均水平；同时水解乳蛋白培养基上的诱导效果较好，增殖倍数最高，生根良好。

具体实施方式以下实施例仅用于说明本发明，但不用于来限制本发明的范围。

实施例1：牡丹外植体的灭菌处理

在12月-次年1月间在晴朗的午后，从生长健壮品种为“大胡红”的牡丹植株上采集无病虫害、饱满的茎尖作为外植体，放入4℃冰箱中保存备用。

将上述采集茎尖的分别按下述方法进行灭菌处理：

洗衣粉液浸泡15~25 min→流水冲洗至清→剥去鳞片→体积分数70%酒精浸泡15~30s→无菌水冲洗1~2 min→50 g/L次氯酸钠液浸泡15~25 min或25 g/L次氯酸钠溶液浸泡25~35 min→无菌水漂洗3次，每次1 min。

经过上述灭菌方法处理后，将茎尖接种在预先制备的基本培养基1/2MS上，每瓶放一个外植体，在121℃条件下灭菌20 min。培养温度为（20±2）℃，每日光照14h，光照强度2000lx。

实施例2：不同激素配比对牡丹再生嫩茎增殖的影响：

在12月-次年1月间在晴朗的午后，从生长健壮的“紫兰魁”品种的牡丹植株上采集无病虫害、饱满的茎尖作为外植体，按上述实施例1所述方法对外植体进行消毒灭菌。将无菌消毒后的外植体接种到在基本培养基1/2MS的基础上添加0.5~2.0 mg/L 6-BA、0.5~2.0 mg/LKT和0.05~0.2 mg/L NAA的再生嫩茎增殖培养基。

实施例3：不同生长素组合对牡丹生根的影响

在12月-次年1月间在晴朗的午后，从生长健壮的“紫兰魁”品种的牡丹植株上采集无病虫害、饱满的茎尖作为外植体，按上述实施例1所述方法对外植体进行消毒灭菌。将无菌消毒后的外植体接种到在基本培养基1/2MS的基础上添加0.1-0.15 mg/L NAA、0.1-0.15 mgIBA的生根培养基。

实施例4

在12月-次年1月间在晴朗的午后，从生长健壮的“紫兰魁”品种的牡丹植株上采集无病虫害、饱满的茎尖作为外植体，按上述实施例1所述方法对外植体进行消毒灭菌。将无菌消毒后的外植体接种到在基本培养基1/2MS的基础上添加0.0~2.0 mg/L 6-BA、1.0 mg/L KT和0.1 mg/L NAA的再生嫩茎增殖培养基。培养温度为（20±2）℃，每日光照14h，光照强度2000lx，4周后观察，并统计结果。结果见下表

不同激素配比对牡丹再生嫩茎增殖的影响

由上表可知，嫩茎增殖倍数随6-BA的增加而增大，在2.0 mg/L时达到最大，为8.40。

实施例5

在12月-次年1月间在晴朗的午后，从生长健壮的“紫兰魁”品种的牡丹植株上采集无病虫害、饱满的茎尖作为外植体，按上述实施例1所述方法对外植体进行消毒灭菌。将无菌消毒后的外植体接种到在基本培养基1/2MS的基础上添加0.0-0.15 mg/L NAA、0.1 mg IBA的生根培养基，培养温度为（20±2）℃，每日光照14h，光照强度2000lx，20d后观察。结果见下表

不同生长素组合对牡丹生根的影响

由上表可知，在IBA浓度为1.0 mg/L，NAA浓度为0.0~1.0 mg/L时，生根率为30.8%~73.6%。

Claims

1.一种用于牡丹组织培养生根基本培养基，其特征在于，其组成为：1/2MS、PH 5.0～6.3、蔗糖25～45 g/L、山嵛醇0.5～1.5 g/L、琼脂5～15 g/L、水解乳蛋白100～300 mg。

2.根据权利要求1所述的一种牡丹组织培养生根的方法，其特征在于，包括下列步骤：

1）外植体的灭菌处理；洗衣粉液浸泡10~30 min→流水冲洗至清-剥去鳞片→体积分数70%酒精浸泡10~50s→无菌水冲洗1~3 min→50 g/L次氯酸钠液浸泡10~30 min或25 g/L次氯酸钠溶液浸泡20~40 min无菌水漂洗3次，每次1 min；

2）将步骤（1）处理后的外置体接种于基本培养基1/2MS；3）将经过步骤2）培养的外植体组织转接于增殖培养基中继续进行培养；

4）将经过步骤3）继代培养所得的嫩茎切下转入生根培养基中培养；

5）将经过步骤4）生根培养的小苗带瓶移入大棚。

3.根据权利要求2所述的一种牡丹组织培养生根的方法，其特征在于，外植体灭菌的步骤中，洗衣粉液浸泡15~25 min。

4.根据权利要求2所述的一种牡丹组织培养生根的方法，其特征在于，外植体灭菌的步骤中，体积分数70%酒精浸泡15~30s。

5.根据权利要求2所述的一种牡丹组织培养生根的方法，其特征在于，外植体灭菌的步骤中，无菌水冲洗1~2 min。

6.根据权利要求2所述的一种牡丹组织培养生根的方法，其特征在于，外植体灭菌的步骤中，50 g/L次氯酸钠液浸泡15~25 min或25 g/L次氯酸钠溶液浸泡25~35 min，无菌水漂洗3次，每次1 min。

7.根据权利要求2所述的一种牡丹组织培养生根的方法，其特征在于，步骤3）中在基本培养基1/2MS的基础上添加0.5~2.0 mg/L 6-BA、0.5~2.0 mg/L KT作为再生嫩茎增殖培养基。

8.根据权利要求2所述的一种牡丹组织培养生根的方法，其特征在于，优选的，生根培养基的配方为，在基本培养基1/2MS的基础上添加0.1-0.15 mg/L NAA、0.1-0.15 mg IBA。

9.根据权利要求2所述的一种牡丹组织培养生根的方法，其特征在于，步骤4）中的生根培养基在121℃条件下灭菌20 min。培养温度为20±2℃，每日光照14h，光照强度2000lx。

10.根据权利要求2所述的一种牡丹组织培养生根的方法，其特征在于，步骤5）中，生根培养的小苗根长为1.5～2.0 cm时，将其带瓶移入大棚炼苗7d，移栽前3d用50%可湿性多菌灵800倍液喷浇灭菌，幼苗种植基质有蛭石、草炭土。