CN102090327A

CN102090327A - 三叶木通果种苗试管快速繁殖方法

Info

Publication number: CN102090327A
Application number: CN2009102266333A
Authority: CN
Inventors: 艾辛; 范立华
Original assignee: Hunan Agricultural University
Current assignee: Hunan Agricultural University
Priority date: 2009-12-15
Filing date: 2009-12-15
Publication date: 2011-06-15

Abstract

三叶木通果种苗试管快速繁殖方法，将三叶木通诱导产生丛生芽成培养基进行生根培养，尔后在25±2℃光照培养植株高7cm左右，丛生根培养基中取出，用解剖刀将试管苗切割成1cm左右的带腋芽的茎段生根培养，再光照植株高7cm左右，既再次光照移栽至栽培基质中进行生长。这种方法是用植物细胞遗传工程技术可极大缩短育种年限，加快育种进程，且更有目的地获得具有更理想性状的新品种。

Description

三叶木通果种苗试管快速繁殖方法

技术领域

本发明涉及提高三叶木通果种苗快速繁殖技术领域的新方法，特别是涉及外植体的处理方法。

背景技术

三叶木通果[Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz]是木通科木通属的一种营养价值较高的落叶或半落叶藤本野生水果，多分布在长江以南，在中国南部、长江流域和西北地区均有分布与猕猴桃并称野生水果大王，俗称八月炸、八月瓜。长期以来，人们一直把木通家族的根、茎、叶、种子视为中草药，具有通筋活络、解毒、生津止渴、消炎、除湿、泻火以及通乳等功效。其果实较大、果重150-250g，果肾型，果面紫红色或明黄色，非常美观。果肉乳白透明，肉质细嫩，浓甜可口，香气迷人，富含蛋白质、氨基酸、淀粉、可溶性糖及矿质元素均高于苹果、桔子、梨子等栽培品种的1～4倍，维生素C、B₁、B₂、B₆等，与苹果、桔子、梨子等含量水平不相上下。其营养成分大体上与国内外专家高度重视的沙棘等野生水果相当，是颇受人们喜爱的野生水果，是一种很有经济价值的植物。三叶木通果实可鲜食或酿酒、制饮料。此外，三叶木通种子中含有36.84％的油脂，亚油酸含量高，富含有维生素，色清味香，是值得开发的一种保健食用油脂。但野生果实皮厚，种子多，可食率较低，需要不断改良才能栽培利用。传统的遗传改良方法比较费时、费力，困难大，已经不能满足三叶木通果产业发展的需要。而运用植物细胞遗传工程技术可极大缩短育种年限，加快育种进程，且更有目的地获得具有更理想性状的新品种。

三叶木通果优良种苗的生产一般采用扦插法，但存在生根困难，成活率低，繁殖速度慢等问题，利用细胞工程技术可以在短时间内大量繁殖优良三叶木通果种苗，不仅可以很好的解决三叶木通果种苗繁育的难题，而且也是利用细胞遗传工程技术改良三叶木通果性状的前提和基础。植物细胞在物理或化学方法的诱导下产生体细胞的变异，通过分化再生得到变异改良的植株，其获得的优良植株的繁殖是新品种应用和推广的基础。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种为三叶木通果高效种苗繁殖技术体系的建立提供基础的，可提高三叶木通果种苗试管快速繁殖方法。

本发明的目的是通过下述方式实现的：

1)将生长健壮的木质化程度较低的带腋芽的三叶木通果茎段切割成1.5cm左右大小的茎段，消毒处理带腋芽的茎段为外植体，接种于丛生芽诱导培养基诱导腋芽产生丛生芽；

2)将材料放置于25±2℃，黑暗培养；每隔25天左右更换一次新鲜诱导培养基；

3)待丛生芽开始产生时放置在光照下培养，丛生芽长到3cm左右时及时将植株切从基部切割，将植株转移到生根培养基上进行生根培养，25±2℃，光照培养至植株高7cm左右；

4)将生根培养基上长7cm左右的三叶木通果苗从生根培养基中取出，用解剖刀将试管苗切割成1cm左右的带腋芽的茎段，将带腋芽的茎段接种于生根培养基上进行生根培养，25±2℃，光照培养至植株高7cm左右；

5)将所得的植株再按照上述4中方法进行再次切割，带腋芽茎段接种于生根培养基上进行生根培养基上进行生根培养，25±2℃，照光，所得植株洗尽培养基后移栽至栽培基质中进行生长即成。

自从运用植物细胞工程技术对优良植物种苗进行试管快繁以来，有关其植物种苗试管快繁技术体系的建立、工厂化生产都有了十分广泛的研究。但三叶木通果的试管快繁技术，尤其是带腋芽茎段直接生根成苗的快繁技术还未见报道。

本发明具体实施过程为：

1.将生长健壮的木质化程度较低的带腋芽的三叶木通果茎段切割成1.5cm左右大小的茎段，消毒处理为外植体，接种于丛芽诱导腋芽产生丛生芽，经75％酒精消毒30S后，再用0.1％升汞消毒8min，然后用无菌水冲洗4至5次，晾干后接种在丛生芽诱导培养基上；诱导培养基是在MS基本培养基基础上添加水解酪蛋白、椰子汁、TDZ，IBA和活性炭，每隔25天更换一次新鲜诱导培养基；25±2℃黑暗培养。

2.待丛生芽开始产生时放置在光照下培养，丛生芽长到3cm左右时及时将植株从基部切割，将植株转移到生根培养基上进行生根培养，25±2℃光照培养至植株高7cm左右，其生根培养基是在1/2MS基本培养基的基础上添加了IBA和活性炭。

3.当三叶木通果苗长7cm左右时从生根培养基中取出，用解剖刀将试管苗切割成1cm左右的带腋芽的茎段，将带腋芽的茎段接种于生根培养基上进行生根培养，25±2℃，光照培养植株高7cm左右。其生根培养基又是在1/2MS基本培养基的基础上添加IBA和活性炭。

4.所得的植株再按照3)的方法进行切割，带腋芽茎段接种于生根培养基上进行生根培养基上进行生根培养，25±2℃，照光；所得植株洗尽培养基后移栽至栽培基质中进行生长。

5.自接种后，每天观察材料，每三天作一次纪录，纪录内容包括丛生芽萌动时间、萌动数目数目、茎段萌芽时间、茎段发根时间、茎段萌芽率、茎段生根数、苗高5-7cm的时间和质量；25±2℃，光照培养至苗高5-7cm，最后记录每三角瓶中成苗数。

丛生芽诱导率＝(诱导丛生芽的外植体数/接种的外植体总数)×100％

茎段成苗率＝(诱导茎段成苗的外植体数/接种的外植体总数)×100％

在上述过程中丛生芽诱导培养基中的TDZ浓度为0.5-1.0mg/l，IBA浓度为1-4mg/l；生根培养基中IBA浓度为2-6mg/l；

上述过程中的培养基用到的水解酪蛋白的浓度为300mg/l；椰子汁的浓度为100g/l；活性炭的浓度为0.3g/l。

具体实施方式

提高三叶木通果种苗试管快速繁殖的新方法

(1)从湖南张家界、湖南怀化、河南洛阳三地采集的三叶木通果优良种苗种植在温室中，待三叶木通果苗长出30-40cm长的枝条时，挑选健壮的枝条，将带腋芽的部分茎段切割下来后用自来水冲洗干净。以带腋芽的茎段为外植体，经75％酒精消毒30S后，再用0.1％升汞消毒8min，然后用无菌水冲洗4至5次，晾干后用解剖刀进行切割，使带腋芽部分的长度大约为1cm左右，按照茎的自然生长方向分别插接在丛生芽诱导培养基上，每三角瓶中接种5个外植体，每种外植体接种20瓶左右，25±2℃黑暗培养。丛生芽诱导培养基是在MS基本培养基基础上添加了TDZ，IBA、水解酪蛋白、椰子汁，活性炭，每隔25天左右更换一次新鲜培养基。

(2)待丛生芽开始产生时放置在光照下培养，丛生芽长到3cm左右时及时将植株切从基部切割，将植株转移到生根培养基上进行生根培养，每三角瓶中接种5个外植体。培养过程的温度都控制在25±2℃。

(3)将生根培养基上长7cm左右的三叶木通果苗从生根培养基中取出，用解剖刀将试管苗切割成1cm左右的带腋芽的茎段，将带腋芽的茎段接种于生根培养基上进行生根培养，每三角瓶接种15个茎段左右。当植株高长到7cm左右，又从生根培养基中取出进行再次切割，将带腋芽茎段又接种于生根培养基上进行生根，这样可多次重复，扩大繁殖系数。25±2℃，照光培养。当植株数达到一定的基数后可将生根培养基上长根的试管苗植株洗尽培养基后移栽至栽培基质中进行生长。

(4)自接种后，每天观察材料，每三天作一次纪录，纪录内容包括丛生芽萌动时间、萌动数目数目、茎段萌芽时间、茎段发根时间、茎段萌芽率、茎段生根数、苗高5-7cm的时间和质量；25±2℃，光照培养至苗高5-7cm，最后记录每三角瓶中成苗数。

实验结果表明：从表1可以看出，三叶木通果带腋芽茎段都能在丛生芽诱导培养基上诱导出丛生芽，但诱导率在不同产地的材料中有差异，其中以河南洛阳三叶木通果的诱导率最高，达到65.38％，丛生芽诱导萌动时间为20-30天。利用试管苗切茎快速繁殖的有生产价值，其带腋芽茎段生根成苗70-90％，每植株平均生根数2-3之间(表2)。

表1不同产地三叶木通果腋芽茎段丛生芽的诱导

品种	处理方式	接种数	丛生芽诱导数	丛生芽诱导率(％)	丛生芽萌动时间(天)
						湖南张家界三叶木通	带腋芽茎段	210	75	35.71	25
湖南怀化三叶木通	带腋芽茎段	230	65	28.26	29
						河南洛阳三叶木通	带腋芽茎段	260	170	65.38	22

表2三叶木通果试管苗带腋芽茎段生根成苗的效果

品种	处理方式	接种数	成苗数	成苗率(％)	生根率(％)	每苗平均根数(根)
							湖南张家界三叶木通	带腋芽茎段	300	255	85.00	81.00	2.5
湖南怀化三叶木通	带腋芽茎段	320	241	75.31	73.75	1.9
							河南洛阳三叶木通	带腋芽茎段	298	273	91.61	87.58	3.2

Claims

1.三叶木通果种苗试管快速繁殖方法，其特征在于：

A)将生长健壮的木质化程度较低的带腋芽的三叶木通果茎段切割成1.5cm左右大小的茎段，消毒处理带腋芽的茎段为外植体，接种于丛生芽诱导培养基诱导腋芽产生丛生芽；

B)将材料放置于25±2℃，黑暗培养；每隔25天左右更换一次新鲜诱导培养基；

C)待丛生芽开始产生时放置在光照下培养，丛生芽长到3cm左右时及时将植株切从基部切割，将植株转移到生根培养基上进行生根培养，25±2℃，光照培养至植株高7cm左右；

D)将生根培养基上长7cm左右的三叶木通果苗从生根培养基中取出，用解剖刀将试管苗切割成1cm左右的带腋芽的茎段，将带腋芽的茎段接种于生根培养基上进行生根培养，25±2℃，光照培养至植株高7cm左右；

E)将所得的植株再按照上述4中方法进行再次切割，带腋芽茎段接种于生根培养基上进行生根培养基上进行生根培养，25±2℃，照光，所得植株洗尽培养基后移栽至栽培基质中进行生长即成。

2.据权利要求1所述的三叶木通果种苗试管快速繁殖方法，其特征在于所述方法A中消毒处理是经75％酒精消毒30s后，再用0.1％升汞消8min，然后用菌水冲洗4至5次，晾干后接种在生芽诱导培养基上，所述方法A中丛生芽诱导培养基是在MS基本培养基基础上添加水解酷蛋白、椰子汁、TDZ、IBA和活性炭，每隔25天更换一次新鲜诱导培养基，25±2℃黑暗培养，在其上述水解酷蛋白的浓度为300mg/1、椰子汁的浓度为100g/1、活性炭的浓度为0.3g/1。

3.据权利要求1所述的三叶木通果种苗试管快速繁殖方法，其特征在于所述方法C中生根培养基是在1/2MS基本培养基的基础上添加TBA和活性炭。

4.据权利要求1所述的三叶木通果种苗试管快速繁殖方法，其特征在于所述方法D中生根培养基是在1/2MS基本培养基的基础上添加IBA和活性炭。

5.据权利要求1(A中)或2所述的三叶木通果种苗试管快速繁殖方法，其特征在于丛生芽诱导培养基中的TDZ浓度为0.5-1.0mg/1，IBA浓度为1-4mg/1。

6.据权利要求1C中或3所述的三叶木通果种苗试管快速繁殖方法，其特征在于生根培养基中IBA浓度为2-6mg/1。