CN104782500B - 野木瓜种苗的培养方法 - Google Patents
野木瓜种苗的培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104782500B CN104782500B CN201510238338.5A CN201510238338A CN104782500B CN 104782500 B CN104782500 B CN 104782500B CN 201510238338 A CN201510238338 A CN 201510238338A CN 104782500 B CN104782500 B CN 104782500B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture
- seedling
- explant
- callus
- stauntonvine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明属于植物细胞工程技术领域，野木瓜种苗的培养步骤依次包括预处理、无菌外植体获得、愈伤组织诱导培养、丛生芽及胚状体增殖和生根培养及移栽；采用本发明生产野木瓜种苗的技术方案，其产生的有益效果是：（1）增殖率高，生物产量大，培养周期短；（2）组培苗质量好，种苗健壮，栽培成活率高；本发明利用通过预处理、无菌外植体获得、愈伤组织诱导培养、丛生芽及胚状体增殖和生根培养及移栽的方法对野木瓜种苗进行培育相对于其它培养方式具有扩繁效率高、培养时间短、转接方便；种苗健壮、栽培成活率高及成本低，适合野木瓜种苗规模化培育生产。
Description
技术领域
本发明属于植物细胞工程技术领域，具体涉及一种利用植物组织培养方式综合处理进行野木瓜培养快繁以获得大量种苗的方法。
背景技术
野木瓜（Stauntonia chinensis DC.）为木通科（Lardizabalaceae）野木瓜属（Stauntonia）木质藤本植物。野生分布于广东、广西、香港、湖南、贵州、云南、安徽、浙江、江西、福建等地。生于海拔500-1300米的山地密林、山腰灌丛或山谷溪边疏林中。其具有掌状复叶5-7片，且叶色浓绿，有光泽，是一种具有很高观赏价值的藤本植物，可作为垂直绿化的良好材料。此外野木瓜花期3-4月，果期6-10月，果长圆形，长7-10厘米，直径3-5厘米，果肉可食用，可作为水果品种开发。此外野木瓜全株可药用，民间记载有舒筋活络、镇痛排脓、解热利尿、通经导湿的作用，可用于治腋部生痈、膀胱炎、风湿骨痛、跌打损伤、水肿脚气等。据研究，其对三叉神经痛、坐骨神经痛也有较好的疗效。因此野木瓜可作为一种具有综合开发价值的植物进行开发，具有很高的开发利用价值。
由于生态环境的破坏和掠夺式的采摘挖掘，野木瓜的资源日趋缩小，严重影响了其有序的开发利用，因此需要对其进行种苗繁殖技术的开发。
利用植物组织培养的方式进行野木瓜种苗的培养快繁是一种较好的规模化获得野木瓜种苗的方法，且该方法未见报道和公开应用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种生长周期短、移栽存活率高、成本低、操作简单的野木瓜种苗的培养方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：培养步骤依次包括预处理、无菌外植体获得、愈伤组织诱导培养、丛生芽及胚状体增殖和生根培养及移栽；具体包括以下步骤：
（1）预处理：不同的外植体的类型采用不同的浸泡预处理及冷藏预处理；
（2）无菌外植体获得：不同的外植体的类型采用不同消毒灭菌方式获得无菌外植体用于下一步培养；
（3）愈伤组织诱导培养：无菌外植体接种至液体浅层愈伤诱导培养基上进行愈伤组织的诱导培养得到状态良好的愈伤组织；
（4）丛生芽及胚状体增殖培养：将步骤（3）中获得的良好的愈伤组织接种到固液双层丛生芽培养基上进行丛生芽增殖培养；或将愈伤组织接种到固液双层胚状体培养基上进行胚状体增殖培养；
（5）生根培养及移栽：将步骤（4）中获得的丛生芽或胚状体浸泡处理后接种到固体生根培养基上进行生根培养，然后将得到的生根苗炼苗后栽培到基质中进行生长得到野木瓜种苗。
采用上述技术方案，通过大量实验证实，该野木瓜种苗的培养方法能够实现增殖率高，生物产量大，培养周期短；组培苗质量好，种苗健壮，栽培成活率高。
作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（1）中的所述外植体为叶片或叶柄或幼嫩枝条或种子。本发明使用的外植体是叶片或叶柄或幼嫩枝条或种子，可以通过多种外植体实现对野木瓜种苗的培养，既方便外植体的获得，又节省了材料避免了浪费。
作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（1）中，当所选外植体为叶片或叶柄或幼嫩枝条时，所述预处理的方法是：将所述外植体离体后立即置于添加1~5g/L PVP+1~3g/LVc的水溶液中进行浸泡处理3~5h，后置于2~8℃条件下保湿冷藏5~10 d；当所选外植体为种子或种荚时，所述预处理的方法是：将所述外植体清洗干净后浸泡到0.1~0.5%浓度的高锰酸钾水溶液中浸泡0.5~2h后，喷洒少量0.5~0.2%浓度的多菌灵后于2~8℃保湿冷藏处理30~60d。不同的外植体采用不同的方法进行预处理，所采用的预处理方法更适合各个外植体的后续培养；且该预处理过程有利于后续的培养，缩短培养周期。
作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（2）中，当所选外植体为叶片或叶柄或幼嫩枝条时，灭菌处理的方式为：将预处理完后的外植体采用75%酒精消毒20~40s后采用升汞灭菌5~10min，然后无菌水冲洗备用；当所选外植体为种子时，灭菌处理的方式为：将预处理完后的外植体采用75%酒精消毒1~2min后采用升汞灭菌10~20min，然后无菌水冲洗，剥离出胚备用。无菌的处理对后续的培养过程是非常关键的，直接影响后续培养的诱导率、增殖率以及生根率，通过大量实验验证，该灭菌方法对后续的培养最好。
作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（3）中所述愈伤组织的诱导培养基的配方为WPM或Ms+1.0~4.0mg/L 2,4-D+0.05~0.5mg/L NAA+0.1~1.5g/L PVP+30 g/L蔗糖，pH5.6~6.0；培养条件为：光照0 h/d，温度25±1℃；所述液体浅层厚度为0.5~3cm。愈伤组织的诱导培养基的组成直接关系到愈伤组织的诱导率以及愈伤组织的质量高低，为了提高野木瓜外植体的愈伤组织的诱导率，本发明对野木瓜外植体的愈伤组织的诱导培养基进行了优化，通过大量的筛选试验最终确定，采用上述的愈伤组织诱导培养基进行野木瓜外植体的愈伤组织诱导培养，愈伤组织的诱导效果最好。
作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（4）中所述固液双层丛生芽培养基中的液体培养基的配方为WPM或Ms+1.0~4.0 mg/L 6-BA+0.02~0.5mg/L NAA+2.0mg/L KT+0.1~1.5g/L PVP +30 g/L蔗糖，pH5.6~6.0，厚度为0.2~1cm；所述固液双层胚状体培养基中的液体培养基的配方为WPM或Ms+0.2~2.0 mg/L TDZ+0.02~0.5mg/L NAA+1.0mg/L KT+0.1~1.5g/L PVP +30 g/L蔗糖，pH5.6~6.0，厚度为0.2~1cm；所述固液双层丛生芽培养基和所述固液双层胚状体培养基的下层均添加6.5g/L琼脂的固体培养基，从而形成固液双层培养基；培养条件为：光照强度1500-2000 lux，光照10~15 h/d，温度25±1℃。通过大量的筛选试验证实，采用固液双层丛生芽培养基或固液双层胚状体培养基可以明显提高丛生芽的增殖率且减少其褐化率。
作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（5）中生根培养及移栽中，首先将丛生芽及胚状体放入到添加1~5g/L PVP+1~3g/L Vc的水溶液中浸泡1~2h，后接种到固体生根培养基中进行生根培养，所述生根培养基的配方为1/2Ms+1.0~2.0 mg/L IBA+0.01~0.1 mg/LNAA+40 g/L蔗糖，pH5.6~6.0；培养条件为：光照强度1500-2000 lux，光照10~15 h/d，温度25±1℃。
作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（5）中获得的生根苗炼苗后栽种到泥炭：珍珠岩=2~5:1的基质中，保持适度遮阴和70%~80%的湿度进行栽培即培养条件为：光照强度2000-3000 lux，光照10~15 h/d，温度20±5℃，从而得到野木瓜种苗。
采用本发明生产野木瓜种苗的技术方案，其产生的有益效果是：（1）增殖率高，生物产量大，培养周期短；（2）组培苗质量好，种苗健壮，栽培成活率高；本发明利用通过预处理、无菌外植体获得、愈伤组织诱导培养、丛生芽及胚状体增殖和生根培养及移栽的方法对野木瓜种苗进行培育相对于其它培养方式具有扩繁效率高、培养时间短、转接方便；种苗健壮、栽培成活率高及成本低，适合野木瓜种苗规模化培育生产。
具体实施方式
实施例1
一种以茎段为外植体利用植物组织培养方式综合处理进行野木瓜培养快繁以获得大量种苗的方法具体步骤如下：
（1）预处理：预处理方法为将茎段离体后立即置于添加4 g/L PVP+1.5g/L Vc的水溶液中进行浸泡处理4h，后置于4℃条件下保湿冷藏9 d；
（2）无菌外植体获得：预处理完毕的茎段利用75%酒精消毒30s后升汞灭菌10 min，然后无菌水冲洗备用；
（3）愈伤组织诱导培养：将得到的无菌茎段外植体接种至液体浅层愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养；处理方法为：将得到的茎段无菌外植体切割至长度为1cm后接种至液体浅层愈伤组织诱导培养培养基上，培养基配方为Ms+3.0 mg/L 2,4-D+0.4mg/L NAA+0.6g/L PVP+30 g/L蔗糖，pH5.8；培养条件为：光照0 h/d，温度25±1℃；液体浅层愈伤组织诱导培养培养基的厚度为2cm；此条件下愈伤组织诱导率为90%，褐化率为2%；愈伤为黄绿色；其中愈伤组织诱导率（%）＝产生愈伤组织的外植体数/接种外植体总数×100%；
（4）丛生芽增殖培养：将愈伤组织接种到固液双层丛生芽增殖培养基上进行丛生芽诱导增殖培养，固液双层丛生芽增殖培养基中的上层的液体培养基的配方为Ms+3.0 mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+2.0mg/L KT+0.6g/L PVP +30 g/L蔗糖，pH5.8，其厚度为0.2~1cm；下层的固定培养基为添加6.5g/L琼脂的固体培养基，上下层培养基组成一致；培养条件为：光照强度1500-2000 lux，光照12 h/d，温度25±1℃；此条件下丛生芽诱导率为95%，增殖率为1:6.5，褐化率为2%；其中丛生芽诱导率（%）＝产生的丛生芽数/接种总数×100%；
（5）生根培养及移栽：首先将丛生芽浸泡到添加3g/L PVP+1g/L Vc的水溶液中处理1h，后接种到固体生根培养基中进行生根培养，生根培养基为1/2Ms+1.5 mg/L IBA+0.1mg/L NAA+40 g/L蔗糖，pH5.8；培养条件为：光照强度1500-2000 lux，光照12 h/d，温度25±1℃；生根率为98%；得到的生根苗炼苗后栽种到泥：珍珠岩=3:1的基质中，保持适度遮阴（遮阴面积为10%）和温度20℃，75%湿度条件下进行栽培得到野木瓜种苗，成活率为90%。
实施例2
一种以叶柄为外植体利用植物组织培养方式综合处理进行野木瓜培养快繁以获得大量种苗的方法具体步骤如下：
（1）预处理：预处理方法为将叶柄离体后立即置于添加3 g/L PVP+1g/L Vc的水溶液中进行浸泡处理4h，后置于4℃条件下保湿冷藏7 d；
（2）无菌外植体获得：预处理完毕的叶柄利用75%酒精消毒30s后升汞灭菌5min，然后无菌水冲洗备用；
（3）愈伤组织诱导培养：将得到的无菌叶柄外植体接种至液体浅层愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养；处理方法为：将得到的叶柄无菌外植体切割至1cm长度后接种至液体浅层愈伤组织诱导培养培养基上，培养基配方为Ms+2.0 mg/L 2,4-D+0.2mg/LNAA+1.0g/L PVP+30 g/L蔗糖，pH5.8；培养条件为：光照0 h/d，温度25±1℃；液体浅层愈伤组织诱导培养培养基的厚度为1cm；此条件下愈伤组织诱导率为88%，褐化率为6%，愈伤为黄绿色；
（4）丛生芽增殖培养：将愈伤组织接种到固液双层丛生芽增殖培养基上进行丛生芽诱导增殖培养，固液双层丛生芽增殖培养基中的上层的液体培养基的配方为Ms+2.0 mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+2.0mg/L KT+0.6g/L PVP +30 g/L蔗糖，pH5.8，其厚度为0.2~1cm；下层固体培养基为添加6.5g/L琼脂的固体培养基，上下层培养基组成一致；培养条件为：光照强度1500-2000 lux，光照12 h/d，温度25±1℃；此条件下丛生芽诱导率为90%，增殖率为1:4.7褐化率为5%；
（5）生根培养及移栽：首先将丛生芽浸泡到添加3g/L PVP+1g/L Vc的水溶液中处理1.5 h，后接种到固体生根培养基中进行生根培养，生根培养基的配方为1/2Ms+1.0 mg/LIBA+0.1 mg/L NAA+40 g/L蔗糖，pH5.8；培养条件为：光照强度1500-2000 lux，光照12 h/d，温度25±1℃；此条件下的生根率为95%；得到的生根苗炼苗后栽种到泥：珍珠岩=3:1的基质中，保持适度遮阴（遮阴面积为10%）和温度20℃，75%湿度条件下进行栽培得到野木瓜种苗，成活率为85%。
实施例3
一种以叶片为外植体利用植物组织培养方式综合处理进行野木瓜培养快繁以获得大量种苗的方法具体步骤如下：
（1）预处理：预处理方法为将叶片离体后立即置于添加3 g/L PVP+1g/L Vc的水溶液中进行浸泡处理3h，后置于4℃条件下保湿冷藏5 d。
（2）无菌外植体获得：预处理完毕的叶片利用75%酒精消毒30s后升汞灭菌5min，然后无菌水冲洗备用。
（3）愈伤组织诱导培养：将得到的无菌叶片外植体接种至液体浅层愈伤组织诱导培养培养基上进行愈伤组织诱导培养；处理方法为：将得到的叶片无菌外植体切割至大小为1cm2后接种至液体浅层愈伤组织诱导培养基上，液体浅层愈伤组织诱导培养基的厚度为1cm；培养基配方为Ms+2.0 mg/L 2,4-D+0.2mg/L NAA+1.0g/L PVP+30 g/L蔗糖，pH5.8；培养条件为：光照0 h/d，温度25±1℃；此条件下愈伤组织诱导率为85%，褐化率为10%；愈伤为黄绿色；
（4）丛生芽增殖培养：将愈伤组织接种到固液双层丛生芽增殖培养基上进行丛生芽诱导增殖培养，固液双层丛生芽增殖培养基中的上层的液体培养基的配方为Ms+2.0 mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+2.0mg/L KT+0.6g/L PVP +30 g/L蔗糖，pH5.8，其厚度为0.2~1cm；下层固体培养基为添加6.5g/L琼脂的固体培养基，上层为液体培养基，上下层培养基组成一致；培养条件为：光照强度1500-2000 lux，光照12 h/d，温度25±1℃。此条件下丛生芽诱导率为95%，增殖率为1:4.7，褐化率为2%；
（5）生根培养及移栽：首先将丛生芽浸泡到添加3g/L PVP+1g/L Vc的水溶液中处理1h，后接种到固体生根培养基中进行生根诱导，生根培养基为1/2Ms+1.0 mg/L IBA+0.1mg/L NAA+40 g/L蔗糖，pH5.8；培养条件为：光照强度1500-2000 lux，光照12 h/d，温度25±1℃；生根率为97%；得到的生根苗炼苗后栽种到泥：珍珠岩=3:1的基质中，保持适度遮阴（遮阴面积为10%）和温度20℃，75%湿度条件下进行栽培得到野木瓜种苗，成活率为89%。
实施例4
一种以种子为外植体利用植物组织培养方式综合处理进行野木瓜培养快繁以获得大量种苗的方法具体步骤如下：
（1）预处理：将种子外植体清洗干净后浸泡到0.2%浓度的高锰酸钾水溶液中浸泡1h后，喷洒少量0.1%浓度的多菌灵后于4℃保湿冷藏处理45 d。
（2）无菌外植体获得：预处理完毕的种子无菌外植体获得方式为75%酒精消毒1min后升汞灭菌15min，然后无菌水冲洗，剥离出胚备用。
（3）愈伤组织诱导培养：将得到的无菌种子接种至液体浅层愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养，液体浅层愈伤组织诱导培养基的厚度为0.5cm，培养基的配方为Ms+3.0 mg/L 2,4-D+0.5mg/L NAA+1.5g/L PVP+30 g/L蔗糖，pH5.8；培养条件为：光照0 h/d，温度25±1℃；此条件下愈伤组织诱导率为93%，褐化率为2%，愈伤为黄绿色；
（4）丛生芽增殖培养：将愈伤组织接种到固液双层丛生芽增殖培养基上进行丛生芽诱导增殖培养；固液双层丛生芽增殖培养基中的上层的液体培养基的配方为Ms+3.0 mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+2.0mg/L KT+1.5g/L PVP +30 g/L蔗糖，pH5.8，其厚度为0.2~1cm；下层固体培养基为添加6.5g/L琼脂的固体培养基，上下层培养基组成一致；培养条件为：光照强度1500-2000 lux，光照12 h/d，温度25±1℃；此条件下丛生芽诱导率为90%，增殖率为1:5.5，褐化率为3%；
（5）生根培养及移栽：首先将丛生芽浸泡到添加3g/L PVP+1g/L Vc的水溶液中处理1h，后接种到固体生根培养基中进行生根培养，生根培养基为1/2Ms+1.5 mg/L IBA+0.1mg/L NAA+40 g/L蔗糖，pH5.8；培养条件为：光照强度1500-2000 lux，光照12 h/d，温度25±1℃；此条件下的生根率为96%。得到的生根苗炼苗后栽种到泥：珍珠岩=3:1的基质中，保持适度遮阴（遮阴面积为10%）和温度20℃，75%湿度条件下进行栽培得到野木瓜种苗，成活率为85%。
实施例5
一种以茎段为外植体利用植物组织培养方式综合处理进行野木瓜培养快繁以获得大量种苗的方法具体步骤如实施例1所示，所不同的是采用的增殖方式为胚状体诱导增殖培养：将愈伤组织接种到固液双层胚状体增殖培养基上进行胚状体增殖培养；固液双层胚状体增殖培养基中的上层液体培养基的配方为Ms+2.0 mg/L TDZ+0.5mg/L NAA+1.0mg/LKT+0.8 g/L PVP +30 g/L蔗糖，pH5.8，其厚度为0.2cm；下层固体培养基为添加6.5g/L琼脂的固体培养基，上下层培养基组成一致；培养条件为：光照强度1500-2000 lux，光照12 h/d，温度25±1℃；此条件下胚状体诱导率为80%，增殖率为1:20，褐化率为2%；胚状体培养生根率为100%，成活率为95%以上；其中胚状体诱导率（%）＝产生的胚状体数/接种总数×100%。
实施例6
一种以茎段为外植体利用植物组织培养方式综合处理进行野木瓜培养快繁以获得大量种苗的方法具体步骤如实施例1所示，所不同的是其中愈伤组织诱导培养、丛生芽增殖培养及生根培养基中基础培养基均由Ms及1/2Ms替换为WPM，此条件下丛生芽诱导率为92%，增殖率为1:6，褐化率为4%；丛生芽培养生根率为86%，成活率为88%以上。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种野木瓜Stauntonia chinensis DC.种苗的培养方法，培养步骤依次包括预处理、无菌外植体获得、愈伤组织诱导培养、丛生芽或胚状体增殖培养、生根培养及移栽；其特征在于，具体包括以下步骤：
（1）预处理：不同的外植体的类型采用不同的浸泡预处理及冷藏预处理；
（2）无菌外植体获得：不同的外植体的类型采用不同消毒灭菌方式获得无菌外植体用于下一步培养；
（3）愈伤组织诱导培养：将步骤（2）中获得的无菌外植体接种至液体浅层愈伤诱导培养基上进行愈伤组织的诱导培养得到状态良好的愈伤组织；
（4）丛生芽或胚状体增殖培养：将步骤（3）中获得的良好的愈伤组织接种到固液双层丛生芽培养基上进行丛生芽增殖培养；或将愈伤组织接种到固液双层胚状体培养基上进行胚状体增殖培养；
（5）生根培养及移栽：将步骤（4）中获得的丛生芽或胚状体浸泡处理后接种到固体生根培养基上进行生根培养，然后将得到的生根苗炼苗后栽培到基质中进行生长得到野木瓜种苗；所述的步骤（1）中的所述外植体为叶片或叶柄或幼嫩枝条或种子；所述的步骤（1）中，当所选外植体为叶片或叶柄或幼嫩枝条时，所述预处理的方法是：将所述外植体离体后立即置于添加1~5g/L PVP+1~3g/L Vc的水溶液中进行浸泡处理3~5h，后置于2~8℃条件下保湿冷藏5~10d；当所选外植体为种子时，所述预处理的方法是：将所述外植体清洗干净后浸泡到0.1~0.5%浓度的高锰酸钾水溶液中浸泡0.5~2h后，喷洒少量0.5~0.2%浓度的多菌灵后于2~8℃保湿冷藏处理30~60d；所述步骤（3）中所述培养基的配方为WPM或MS+1.0~4.0mg/L 2,4-D+0.05~0.5mg/L NAA+0.1~1.5g/L PVP+30 g/L蔗糖，pH5.6~6.0；培养条件为：光照0 h/d，温度25±1℃；所述液体浅层厚度为0.5~3cm；所述步骤（4）中所述固液双层丛生芽培养基中的液体培养基的配方为WPM或MS+1.0~4.0 mg/L 6-BA+0.02~0.5mg/L NAA+2.0mg/L KT+0.1~1.5g/L PVP +30 g/L蔗糖，pH5.6~6.0，厚度为0.2~1cm；所述固液双层胚状体培养基中的液体培养基的配方为WPM或MS+0.2~2.0 mg/L TDZ+0.02~0.5mg/L NAA+1.0mg/L KT+0.1~1.5g/L PVP +30 g/L蔗糖，pH5.6~6.0，厚度为0.2~1cm；所述固液双层丛生芽培养基和所述固液双层胚状体培养基的下层均为添加6.5g/L琼脂的固体培养基，上下层培养基组成一致，从而形成固液双层培养基；所述的步骤（5）中生根培养及移栽中，首先将丛生芽或胚状体放入到添加1~5g/L PVP+1~3g/L Vc的水溶液中浸泡1~2h，后接种到固体生根培养基中进行生根培养，所述生根培养基的配方为1/2MS+1.0~2.0 mg/L IBA+0.01~0.1 mg/L NAA+40g/L蔗糖，pH5.6~6.0；所述的步骤（5）中获得的生根苗炼苗后栽种到泥炭：珍珠岩=2~5:1的基质中，保持适度遮阴和70%~80%的湿度进行栽培。
2.根据权利要求1所述的野木瓜Stauntonia chinensis DC.种苗的培养方法，其特征在于，所述的步骤（2）中，当所选外植体为叶片或叶柄或幼嫩枝条时，灭菌处理的方式为：将预处理完后的外植体采用75%酒精消毒20~40s后采用升汞灭菌5~10min，然后无菌水冲洗备用；当所选外植体为种子时，消毒灭菌方式为：将预处理完后的外植体采用75%酒精消毒1~2min后采用升汞灭菌10~20min，然后无菌水冲洗，剥离出胚备用。
3.根据权利要求2所述的野木瓜Stauntonia chinensis DC.种苗的培养方法，其特征在于，所述的步骤（4）中培养条件为：光照强度1500-2000 lux，光照10~15 h/d，温度25±1℃。
4.根据权利要求3所述的野木瓜Stauntonia chinensis DC.种苗的培养方法，其特征在于，所述的步骤（5）中生根培养及移栽中，培养条件为：光照强度1500-2000 lux，光照10~15 h/d，温度25±1℃。
5.根据权利要求4所述的野木瓜Stauntonia chinensis DC.种苗的培养方法，其特征在于，所述的步骤（5）中移栽后的培养条件为：光照强度2000-3000 lux，光照10~15 h/d，温度20±5℃，从而得到野木瓜种苗。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510238338.5A CN104782500B (zh) | 2015-05-12 | 2015-05-12 | 野木瓜种苗的培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510238338.5A CN104782500B (zh) | 2015-05-12 | 2015-05-12 | 野木瓜种苗的培养方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104782500A CN104782500A (zh) | 2015-07-22 |
| CN104782500B true CN104782500B (zh) | 2017-09-12 |
Family
ID=53548060
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510238338.5A Expired - Fee Related CN104782500B (zh) | 2015-05-12 | 2015-05-12 | 野木瓜种苗的培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104782500B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106376418A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-02-08 | 青海圣航农牧科技开发有限公司 | 一种木瓜的育苗和栽培方法 |
| CN108184672B (zh) * | 2018-03-07 | 2021-06-15 | 贵州省山地资源研究所 | 一种八月瓜茎段愈伤组织诱导培养方法 |
| CN111202003B (zh) * | 2020-02-22 | 2021-09-21 | 长江大学 | 一种连香组培快繁用培养基及方法 |
| CN111202004B (zh) * | 2020-02-24 | 2021-06-01 | 长江大学 | 通过胚状体发生途径诱导三叶木通植株再生的培养基和方法 |
| CN114190279A (zh) * | 2021-12-14 | 2022-03-18 | 商丘师范学院 | 一种固液双层培养基及其制备方法和应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102090327A (zh) * | 2009-12-15 | 2011-06-15 | 湖南农业大学 | 三叶木通果种苗试管快速繁殖方法 |
-
2015
- 2015-05-12 CN CN201510238338.5A patent/CN104782500B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102090327A (zh) * | 2009-12-15 | 2011-06-15 | 湖南农业大学 | 三叶木通果种苗试管快速繁殖方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 八月瓜胚乳愈伤组织诱导研究初报;黎世龄等;《中国南方果树》;20081231;第37卷(第2期);第46-48页 * |
| 超声对三叶木通叶片愈伤组织生长及代谢影响的研究;刘香;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》;20100615(第6期);第D047-214页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104782500A (zh) | 2015-07-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101361458B (zh) | 一种甘蔗健康种苗高效繁育方法 | |
| CN103039361B (zh) | 一种牛大力种子直接诱导丛生芽并快速繁育种苗的方法 | |
| CN102405842B (zh) | 一种开放式培养甘蔗脱毒种苗的方法 | |
| CN104782500B (zh) | 野木瓜种苗的培养方法 | |
| CN103380730B (zh) | 一种杜梨组培快繁方法 | |
| CN103283599B (zh) | 一种鄂西红豆树离体胚培养及植株再生的方法 | |
| CN105815213A (zh) | 一种猕猴桃离体再生体系的建立方法 | |
| CN109258460A (zh) | 微茎尖培养结合热处理获得增城蜜菊脱毒苗的培育方法 | |
| CN101124891A (zh) | 一种组织培养繁殖牛大力种苗的方法 | |
| CN104322375A (zh) | 一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法 | |
| CN113475395B (zh) | 一种祁术下胚轴直接再生与体外生根的方法 | |
| CN104798688B (zh) | 木通种苗的培养方法 | |
| CN103460971B (zh) | 一种提高栝楼组培苗移栽成活率的方法 | |
| CN109220803A (zh) | 一种杂交构树组培不定芽瓶外生根及育苗方法 | |
| CN104304000B (zh) | 一种杉木无性系组培苗生根诱导方法及生根培养基 | |
| CN104488723A (zh) | 一种朝鲜淫羊藿组培快速繁殖方法 | |
| CN108901858A (zh) | 一种凤头姜富硒原原种快繁方法 | |
| CN105766636B (zh) | 一种牡丹组织培养再生的方法 | |
| CN107182735B (zh) | 一种直播式铁皮石斛的育苗方法及栽培方法 | |
| CN106561453B (zh) | 大花金钱豹的快速繁殖方法 | |
| CN109392717A (zh) | 一种肉桂组培快繁方法 | |
| CN104686358A (zh) | 一种水榆花楸组培快繁方法 | |
| CN104756870B (zh) | 擎天树发芽种子的组培繁殖方法 | |
| CN104381130B (zh) | 适用于多基因型的豇豆高效再生体系的建立方法 | |
| CN104782501B (zh) | 五月瓜藤种苗的培养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170912 Termination date: 20180512 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |