CN111202003B - 一种连香组培快繁用培养基及方法 - Google Patents

一种连香组培快繁用培养基及方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种连香组培快繁用培养基及方法，该培养基包括诱导培养基、增值培养基、生根培养基，所述诱导培养基、增值培养基、生根培养基均包括添加1.4～1.6mg/LKT+0.3～0.5mg/LNAA+0.01～0.03mg/L6BA的基本培养基。该包括将外植体接种于诱导培养基上进行丛生芽诱导培养；转移至增值培养基中进行芽继代培养至形成更多的丛生芽；转移至生根培养基上进行生根诱导得到带根小苗；将所得带根小苗移栽至栽培基质中培养；本发明的愈伤组织诱导率达到100％,增殖系数最多可达7.1，增殖效果好，连香组培苗生根率高达90％以上，将连香的萌发时间由常规育种的2‑3年缩短为15‑17周。

Description

一种连香组培快繁用培养基及方法
技术领域
本发明涉及组培技术领域，特别涉及一种连香组培快繁用培养基及方法。
背景技术
连香为我国二级保护树种，具有观赏、药用、材用等价值，但存在自然繁殖系数低的问题，导致分布分布呈现片段化。为了克服远缘杂交不亲和性，获得远缘杂交品种，打破种子休眠，缩短其育种周期，缩短连香的应用年限，节省劳力和财力，组织培养法是快速获得大量繁殖苗的最佳方法。但由于目前组织培养法的组培过程中存在增值系数比较低的缺点，限制了其大规模的推广和繁殖。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种连香组培快繁用培养基及方法，愈伤组织诱导率达到100％,增殖系数最多可达7.1，增殖效果好，连香组培苗生根率高达90％以上，将连香的萌发时间由常规育种的2-3年缩短为15-17周。
本发明是这样实现的：
本发明的目的之一在于提供一种连香组培快繁用培养基，该培养基包括诱导培养基、增值培养基、生根培养基，所述诱导培养基、增值培养基、生根培养基均包括添加1.4～1.6mg/LKT+0.3～0.5mg/LNAA+0.01～0.03mg/L6BA的基本培养基。
其中，所述基本培养基为1/2WPM或者1/2MS培养基。
本发明的目的之二在于提供一种连香组培快繁方法，所述方法包括：
步骤1、采集连香枝条，清洗消毒后，截成带芽茎段作为外植体；
步骤2、将所得外植体接种于诱导培养基上进行丛生芽诱导培养；
步骤3、转移至增值培养基中进行芽继代培养至形成更多的丛生芽；
步骤4、转移至生根培养基上进行生根诱导得到带根小苗；
步骤5、将所得带根小苗移栽至栽培基质中培养；
所述诱导培养基、增值培养基、生根培养基采用所述的培养基。
其中，所述步骤1中清洗消毒的具体步骤为：选择连香枝条用洗衣粉清洗10～30min，再用流水冲洗10～30min，转移至超净工作台上用无菌水润洗；用75％酒精浸泡5～20min，再用8％次氯酸钠浸泡15～30min，最后用无菌水冲洗5～6次，待用。
所述步骤1中的带芽茎段的长度为0.5～1.5cm；所述步骤2中诱导培养的时间为25～35天；所述步骤3中继代培养的时间为40～50天；所述步骤4中生根诱导培养的时间为20～30天。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供的一种连香组培快繁方法，以连香幼苗茎段为外植体，通过植物生长调节剂对幼苗茎段的增殖培养和对不定根的诱导研究，成功获得无菌苗微繁成苗快繁体系，将连香的萌发时间由常规育种的2-3年缩短为15-17周，且增殖系数最多可达7.1，增殖效果较好。
附图说明
图1为实施例1、对比例1-5的连香茎段诱导培养30天后的图片；
图2为实施例1继代培养45天后的增殖效果图。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供的一种连香组培快繁方法，包括：
(1)选择连香枝条用洗衣粉清洗20min，再用流水冲洗10min，去除表面污垢。转移至超净工作台上，用无菌水润洗1次。再用75％酒精浸泡5min，再用8％次氯酸钠浸泡15min，最后用无菌水冲洗5-6次，待用。
(2)将枝条截成1cm左右的带芽茎段，接种于诱导培养基：1.5mg/LKT+0.4mg/LNAA+0.03mg/L6BA+1/2WPM上进行8周的诱导培养；结果如图1表明，缺少生长素2,4-D，在NAA和其他分裂素(6BA和KT)作用下，茎段腋芽发育，切口段有愈伤组织形成。
(3)转移至增值培养基：1.5mg/LKT+0.4mg/LNAA+0.01mg/L6BA+1/2WPM中进行芽继代培养；
(4)在生根培养基：1.5mg/LKT+0.4mg/LNAA+0.01mg/L6BA+1/2WPM上进行8周的再生根的诱导；
(5)移栽至栽培基质中置于温室苗床上喷雾系统下生长。
实施例2
本实施例提供的一种连香组培快繁方法，包括：
(1)选择连香枝条用洗衣粉清洗20min，再用流水冲洗10min，去除表面污垢。转移至超净工作台上，用无菌水润洗1次。再用75％酒精浸泡5min，再用8％次氯酸钠浸泡15min，最后用无菌水冲洗5-6次，待用。
(2)将枝条截成1cm左右的带芽茎段，接种于诱导培养基：1.4mg/LKT+0.3mg/LNAA+0.01mg/L6BA+1/2WPM上进行8周的诱导培养；
(3)转移至增值培养基：1.4mg/LKT+0.3mg/LNAA+0.02mg/L6BA+1/2WPM中进行芽继代培养；
(4)在生根培养基：1.4mg/LKT+0.3mg/LNAA+0.01mg/L6BA+1/2WPM上进行8周的再生根的诱导；
(5)移栽至栽培基质中置于温室苗床上喷雾系统下生长。
实施例3
本实施例提供的一种连香组培快繁方法，包括：
(1)选择连香枝条用洗衣粉清洗20min，再用流水冲洗10min，去除表面污垢。转移至超净工作台上，用无菌水润洗1次。再用75％酒精浸泡5min，再用8％次氯酸钠浸泡15min，最后用无菌水冲洗5-6次，待用。
(2)将枝条截成1cm左右的带芽茎段，接种于诱导培养基：1.6mg/LKT+0.5mg/LNAA+0.02mg/L6BA+1/2WPM+蔗糖10g/L+琼脂8g/L上进行8周的诱导培养；
(3)转移至增值培养基：
1.6mg/LKT+0.5mg/LNAA+0.03mg/L6BA+1/2WPM+蔗糖10g/L+琼脂8g/L中进行芽继代培养；
(4)在生根培养基：1.6mg/LKT+0.5mg/LNAA+0.03mg/L6BA+1/2WPM+蔗糖10g/L+琼脂8g/L上进行8周的再生根的诱导；
(5)移栽至栽培基质中置于温室苗床上喷雾系统下生长。
实施例4
该实施例中将步骤3中的增值培养基替换为1/2WPM+KT(1.5mg/L)+NAA(0.4mg/L)+6BA(0.01mg/L)+蔗糖10g/L+琼脂8g/L；其余步骤均同实施例1。
实施例5
该实施例中将步骤3中的增值培养基替换为1/2WPM+KT(1.5mg/L)+NAA(0.4mg/L)+6BA(0.02mg/L)+蔗糖10g/L+琼脂8g/L；其余步骤均同实施例1。
实施例6
该实施例中将步骤3中的生根培养基替换为1/2WPM+KT(1.5mg/L)+NAA(0.4mg/L)+6BA(0.02mg/L)+蔗糖10g/L+琼脂8g/L；其余步骤均同实施例1。
实施例7
该实施例中将步骤3中的生根培养基替换为1/2WPM+KT(1.5mg/L)+NAA(0.4mg/L)+6BA(0.03mg/L)+蔗糖10g/L+琼脂8g/L；其余步骤均同实施例1。
对比例1
该对比例除步骤2中诱导培养基更改外，其余步骤均同实施例1，该对比例的诱导培养基为：0.5mg/L2,4-D+0.2mg/LNAA+0.15mg/L6BA+1/2WPM+蔗糖10g/L+琼脂8g/L。
对比例2
该对比例除步骤2中诱导培养基更改为如下的培养基外，其余步骤均同实施例1。0.5mg/LKT+1.5mg/L2,4-D+0.5mg/LNAA+0.1mg/L6BA+1/2WPM+蔗糖10g/L+琼脂8g/L。
对比例3
该对比例除步骤2中诱导培养基更改为如下的培养基外，其余步骤均同实施例1。1mg/LKT+2.5mg/L2,4-D+0.1mg/LNAA+0.05mg/L6BA+1/2WPM+蔗糖10g/L+琼脂8g/L。
对比例4
该对比例除步骤2中诱导培养基更改为如下的培养基外，其余步骤均同实施例1。2mg/LKT+1mg/L2,4-D+0.01mg/L6-BA+1/2WPM+蔗糖10g/L+琼脂8g/L。
对比例5
该对比例除步骤2中诱导培养基更改为如下的培养基外，其余步骤均同实施例1。2.5mg/LKT+2mg/L2,4-D+0.3mg/LNAA+1/2WPM+蔗糖10g/L+琼脂8g/L。
对比例6
将步骤3中的增值培养基替换为1/2WPM+KT(1.5mg/L)+NAA(0.4mg/L)+6BA(0.05mg/L)+蔗糖10g/L+琼脂8g/L；其余步骤均同实施例1。
对比例7
该对比例中将步骤3中的生根培养基替换为1/2WPM+KT(1.5mg/L)+NAA(0.4mg/L)+6BA(0.05mg/L)+蔗糖10g/L+琼脂8g/L；其余步骤均同实施例1。
实验例1
统计实施例1-3、以及对比例1-5中步骤2诱导培养30天后统计愈伤组织诱导率，结果如表1所示。
表1
Figure GDA0003208115700000061
由表1可知，与对比例1-5相比，本发明的实施例1-3的诱导率有了极大的提高。
由图1可知，实施例1的茎段腋芽发育，切口段有愈伤组织形成，诱导效果最好。对比例1的茎段有少部分膨大，愈伤增殖效果介于对比例1和对比例2之间。对比例2形成的愈伤组织较少，上切口端也有愈伤组织形成。对比例3的茎段上下切口端形成愈伤组织的块茎较多。对比例4愈伤组织增殖较缓慢。对比例5愈伤组织诱导效果较好。
实验例2
统计实施例1、实施例4-5、以及对比例1-6中步骤3开始培养的45天后统计增殖效果，结果如表2-3所示。
表2
Figure GDA0003208115700000071
表3
处理 增殖系数 长势 褐化
对比例6 1.8 弱 强
实施例4 3.5 强 弱
实施例5 3.8 强 弱
实施例1 7.1 强 弱
由表2-表3可知，与对比例1-6相比，本发明实施例的增值培养基(1.4～1.6mg/LKT+0.3～0.5mg/LNAA+0.01～0.03mg/L6BA)增值效果得到明显的提高，其中实施例1的效果比实施例5(1.5mg/LKT+0.4mg/LNAA+0.01mg/L6BA)比实施例5(1.5mg/LKT+0.4mg/LNAA+0.03mg/L6BA)的效果要好。图2为实施例1。
试验例3
统计实施例1、实施例6-7、以及对比例7中步骤3开始培养的45天后统计生根效果，结果如表4所示。
表4
Figure GDA0003208115700000081
由表4可知，在实施例1、实施例6-7处理下的生根效果均较好，其中在实施例1处理下的生根效果最佳。
所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种连香组培快繁用培养基，其特征在于，该培养基包括诱导培养基、增值培养基、生根培养基，所述诱导培养基、增值培养基、生根培养基均包括添加1.4～1.6mg/LKT+0.3～0.5mg/LNAA+0.01～0.03mg/L6BA的基本培养基。
2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述诱导培养基为添加1.5mg/LKT+0.4mg/LNAA+0.03mg/L6BA的基本培养基。
3.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述增值培养基为添加1.5mg/LKT+0.4mg/LNAA+0.01mg/L6BA的基本培养基。
4.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述生根培养基为添加1.5mg/LKT+0.4mg/LNAA+0.01mg/L6BA的基本培养基。
5.如权利要求1-4所述的培养基，其特征在于，所述基本培养基为1/2WPM或者1/2MS培养基。
6.一种连香组培快繁方法，其特征在于，所述方法包括：
步骤1、采集连香枝条，清洗消毒后，截成带芽茎段作为外植体；
步骤2、将所得外植体接种于诱导培养基上进行丛生芽诱导培养；
步骤3、转移至增值培养基中进行芽继代培养至形成更多的丛生芽；
步骤4、转移至生根培养基上进行生根诱导得到带根小苗；
步骤5、将所得带根小苗移栽至栽培基质中培养；
所述诱导培养基、增值培养基、生根培养基采用权利要求1所述的培养基。
7.如权利要求6所述的连香组培快繁方法，其特征在于，所述步骤1中清洗消毒的具体步骤为：选择连香枝条用洗衣粉清洗10～30min，再用流水冲洗10～30min，转移至超净工作台上用无菌水润洗；用75％酒精浸泡5～20min，再用8％次氯酸钠浸泡15～30min，最后用无菌水冲洗5～6次，待用。
8.如权利要求6所述的连香组培快繁方法，其特征在于，所述步骤1中的带芽茎段的长度为0.5～1.5cm。
9.如权利要求6所述的连香组培快繁方法，其特征在于，所述步骤2中诱导培养的时间为25～35天；所述步骤3中继代培养的时间为40～50天；所述步骤4中生根诱导培养的时间为20～30天。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104186312A (zh) * 2014-08-04 2014-12-10 江苏农林职业技术学院 一种矮生沿阶草的组培快繁方法
CN104488722A (zh) * 2014-12-24 2015-04-08 广西大学 一种南美叉柱花的组织培养快速繁殖方法
CN104686351A (zh) * 2015-03-02 2015-06-10 刘祖英 一种连香树离体快速繁殖方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104782500B (zh) * 2015-05-12 2017-09-12 九江学院 野木瓜种苗的培养方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104186312A (zh) * 2014-08-04 2014-12-10 江苏农林职业技术学院 一种矮生沿阶草的组培快繁方法
CN104488722A (zh) * 2014-12-24 2015-04-08 广西大学 一种南美叉柱花的组织培养快速繁殖方法
CN104686351A (zh) * 2015-03-02 2015-06-10 刘祖英 一种连香树离体快速繁殖方法

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