CN104186312A

CN104186312A - 一种矮生沿阶草的组培快繁方法

Info

Publication number: CN104186312A
Application number: CN201410380222.0A
Authority: CN
Inventors: 丁久玲; 郑凯; 王海珍; 俞禄生
Original assignee: Jiangsu Polytechnic College of Agriculture and Forestry
Current assignee: Jiangsu Polytechnic College of Agriculture and Forestry
Priority date: 2014-08-04
Filing date: 2014-08-04
Publication date: 2014-12-10

Abstract

本发明公开了一种矮生沿阶草的组培快繁方法，包括以下步骤：（1）外植体的选取；（2）外植体消毒处理；（3）愈伤组织诱导；（4）分化培养；（5）壮苗培养；（6）生根培养。本发明所述的方法具有繁殖系数、成活率高、繁殖速度快、生长旺盛等优势，且能够有效保证矮生沿阶草种苗的优良性能，具有重要的实践和推广意义，可有效满足市场对矮生沿阶草的日益需求。

Description

一种矮生沿阶草的组培快繁方法

技术领域

本发明涉及一种组培快繁方法，尤其是涉及一种矮生沿阶草的组培快繁方法，属于苗木的繁育技术领域。

背景技术

矮生沿阶草(Dwarf Ophiopogon japonicus)是近年来从日本引进的草坪草新品种，为百合科(Liliaceae)沿阶草属(Ophiopogon)多年生常绿草本植物，具耐荫、耐热、耐寒、常绿等特点，并具有较强的观赏性，可作为四季常绿的草坪地被植物进行开发利用。近年来矮生沿阶草在国内外绿化产业中需求旺盛，其种苗工厂化繁殖日益受到重视。矮生沿阶草繁殖方法有种子繁殖、分株繁殖、组织培养等，种子繁殖速度较慢，分株繁殖易造成繁殖的种苗质量不高，而组织培养可以加快矮生沿阶草的繁殖速度，种苗质量较高。我国对矮生沿阶草的组培快繁研究的较少。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明的发明目的在于提供一种可以加快矮生沿阶草的繁殖速度、同时种苗质量较高的矮生沿阶草的组培快繁方法。

本发明采取的技术方案为：

一种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体的选取：选取1年生矮生沿阶草的健壮植株，从植株的基部将萌发的高度为5cm的子株剥落，然后将子株上的叶片全部剥离、根部剪掉，留取子株高度为2-3mm的茎基部作为外植体；

(2)外植体消毒处理：首先将外植体用流水反复冲洗1h，再放入洗涤剂中浸泡0.5h，浸泡的同时震荡，然后将外植体移至超净工作台上进行消毒处理，消毒处理完成后用灭菌水水反复冲洗振荡外植体至少5次，每次冲洗时间大于5min，最后将外植体用灭菌纸将表面的水分吸干；

(3)愈伤组织诱导：将步骤(2)消毒后的外植体接种到愈伤组织诱导培养基中，在温度为25±2℃的无菌室中黑暗培养1个月，得到愈伤组织；

(4)分化培养：将步骤(3)所述的愈伤组织切成2-3mm的小块，然后将所述的小块接种到分化培养基中进行分化培养形成小芽，且分化培养的倍数为6-7倍，而培养条件则为：温度25±2℃、光照强度位1500～2000lx、光照时间为10～12h/d、培养地点为无菌培养室；

(5)壮苗培养：将步骤(4)分化培养后形成的小芽切下后接种到壮苗培养基中进行壮苗培养至幼苗高度为2-3cm，且培养条件为：温度25±2℃、光照强度位1500～2000lx、光照时间为12～15h/d、培养地点为无菌培养室；

(6)生根培养：将步骤(5)壮苗培养后得到的幼苗接种到生根培养基中进行生根培养，且培养条件为：温度25±2℃、光照强度位1500～2000lx、光照时间为10～12h/d、培养地点为无菌培养室。

进一步，步骤(2)所述的消毒处理的具体步骤为：首先用体积浓度为75％的酒精消毒15s，然后再用质量浓度为0.1％的HgCl2溶液消毒5～8min。

且所述的愈伤组织诱导培养基包括MS+0.1mg/L BA+0.1mg/L KT+1.0mg/LNAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.7-6.0。

所述的分化培养基的包括MS+2.5mg/L BA+0.5mg/L KT+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.7-6.0。

所述的壮苗培养基包括MS+2.5mg/L BA+(0.1～0.2)mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.7-6.0。

所述的生根培养基包括1/4MS+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.7-6.0。

本发明的有益效果为：通过本发明所述的矮生沿阶草的组培快繁方法，具有繁殖系数、成活率高、繁殖速度快、生长旺盛等优势，且能够有效保证矮生沿阶草种苗的优良性能，具有重要的实践和推广意义，可有效满足市场对矮生沿阶草的日益需求。

具体实施方式

现在参考具体实施例对本发明进行详细的说明。

供试材料：供试的矮生沿阶草材料由江苏绿苑园林建设有限公司苗木基地提供。

矮生沿阶草的组培快繁具体步骤如下：

(2)外植体消毒处理：首先将外植体用流水反复冲洗1h，再放入洗涤剂中浸泡0.5h，浸泡的同时震荡，冲洗干净后将外植体移至超净工作台上进行消毒处理，消毒处理用的具体药液和处理时间如表1所示，其中，举例说明表1中每个实施例的消毒处理的具体步骤的文字含义，如：75％酒精10s+0.1％HgCl25min，表示先用体积浓度75％的酒精消毒10秒钟，之后用质量浓度0.1％的升汞(HgCl2)消毒5分钟，同理，其他消毒处理具有类似的处理过程。每种消毒液使用完毕后均用灭菌水水反复冲洗振荡外植体至少5次，每次冲洗时间大于5min，最后完全消毒好用无菌水冲洗干净后将外植体用灭菌纸将表面的水分吸干，接种到MS培养基上，每个消毒处理接种10瓶，每瓶接种3个外植体，7d后观察外植体外观，记录污染率。

表1：不同的消毒处理结果

由表1可知：最佳的外植体消毒处理方法即具体消毒步骤为：首先用体积浓度为75％的酒精消毒15s，然后再用质量浓度为0.1％的HgCl2溶液消毒5～8min，此时，外植体污染率低，且色泽为绿色或黄绿色。

(3)愈伤组织诱导：将步骤(2)消毒后的外植体接种到愈伤组织诱导培养基中，其中，愈伤组织诱导培养基的配方如表2所示，每个配方接种10瓶，每瓶接种5个外植体，在温度为25±2℃的无菌室中黑暗培养1个月后观察愈伤组织诱导情况，记录愈伤诱导率(诱导出愈伤组织的外植体数/接种的外植体数)。

表2 不同的培养基诱导矮生沿阶草愈伤组织的结果

由表2所示：几种愈伤组织诱导培养基配方中，配方5的愈伤组织诱导率(100％)最高，愈伤组织表现为致密、淡黄色；其次为配方2，愈伤组织诱导率为95％，外观表现为致密、淡黄色趋于白色。其余配方的愈伤组织诱导率较低，为60％-82％，且诱导出的愈伤组织外观表现不良，黄色或褐色，严重影响芽的分化。综上所述，通过适宜的培养基配方可以使矮生沿阶草茎基部诱导出较多的愈伤组织，且愈伤组织外观表现良好，对于本发明所述的诱导矮生沿阶草愈伤组织诱导培养基配方包括MS+0.1mg/L BA+0.1mg/L KT+1.0mg/LNAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.7-6.0，愈伤组织诱导率达100％，愈伤组织致密、淡黄色。

(4)分化培养：将步骤(3)所述的愈伤组织切成2-3mm的小块，然后将所述的小块接种到分化培养基中进行分化培养形成小芽，且分化培养的倍数为6-7倍，而培养条件则为：温度25±2℃、光照强度为1500～2000lx、光照时间为10～12h/d、培养地点为无菌培养室，且所述的分化培养基配方如表3所示，且每个分化培养基配方接种10瓶，每瓶接种5个愈伤组织小块，经过分化培养后在愈伤组织上萌发出一定数量的小芽，一个月后对分化的小芽进行观察和统计，计算出分化率(分化出芽的材料数/接种的材料数)。经过几次分化培养后，达到6-7倍左右时，进行壮苗培养。

表3 不同的培养基对芽分化的培养结果

如表3所示：通过不同的分化培养基配方对愈伤组织进行培养，分化出的芽有所不同。几种分化培养基的配方中，配方3的分化率最高，达到92％；其次是配方6和配方5，分化率分别为88％和84％；其余配方的分化率较低。因此，通过适宜的培养基配方可以使愈伤组织分化出较多的小芽，由本发明可知，矮生沿阶草愈伤组织分化出较多芽的培养基配方为MS+2.5mg/L BA+0.5mg/LKT+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.7-6.0。

(5)壮苗培养：将步骤(4)分化培养后形成的小芽切下后接种到壮苗培养基中进行壮苗培养至幼苗高度为2-3cm，所述的壮苗培养基的配方如表4所示，每个壮苗培养基配方接种10瓶，每瓶接种5个小苗(生长一致，高度约为5-6mm)，且培养条件为：温度25±2℃、光照强度为1500～2000lx、光照时间为12～15h/d、培养地点为无菌培养室，一个月后观察幼苗生长情况。

表4 不同的壮苗培养基对矮生沿阶草小芽的影响

注：幼苗生长状况用高度、健壮度、色泽来表示；健壮度：++++健壮，+++较健壮，++生长一般，+细弱、幼嫩；色泽：***深绿色，**淡绿色，*黄绿色。

由表4可知，配方3和配方4中，幼苗生长最好，生长高度分别为2.8cm和2.6cm，均表现为健壮和深绿色；其次是配方7和配方8，幼苗高度分别为2.0cm和1.9cm，但幼苗表现为生长一般和淡绿色；配方5和配方6的幼苗生长最差，高度分别为1.6cm和1.4cm，外观表现为细弱、幼嫩，色泽为黄绿色或淡绿色。综上所述，适宜的壮苗培养基可以使矮生沿阶草的小芽变成健壮、且色泽好的幼苗，因此，矮生沿阶草适宜的壮苗培养基配方为MS+2.5mg/L BA+(0.1～0.2)mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.7-6.0。

(6)生根培养：将步骤(5)壮苗培养后得到的幼苗接种到生根培养基中进行生根培养，生根培养基的配方如表5所示，每个生根培养基配方接种10瓶，每瓶接种5个幼苗(生长一致，高度约为2-3cm)，且培养条件为：温度25±2℃、光照强度位1500～2000lx、光照时间为10～12h/d、培养地点为无菌培养室，2周后观察幼苗根系生长情况。

表5 不同的培养基对生根培养的影响

注：根系生长状况用长度、健壮度、色泽来表示；健壮度：++++健壮，+++较健壮，++生长一般，+细弱、；色泽：***白色，**淡黄色，*黄褐色。

由表5可知：运用配方5对幼苗进行生根培养时，根系生长最好，根系长度为1.8cm，外观表现为健壮、白色；其次是配方4，根系长度为1.5cm，外观表现为较健壮、淡黄色；其他配方根系较短，外观表现为生长一般、色泽为淡黄色或黄褐色。矮生沿阶草的根系生长状况的好坏影响组培苗移栽成活率的高低，应选择具有长度较长、生长健壮、白色根系的组培苗进行栽培。综上所述，适宜的生根培养基利于矮生沿阶草的幼苗根系的萌发和生长，因此，矮生沿阶草适宜的生根培养基为1/4MS+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.7-6.0。

本发明按照上述实施例进行了说明应当理解，上述实施例不以任何形式限定本发明，凡采用等同替换或等效变换方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）外植体的选取：选取1年生矮生沿阶草的健壮植株，从植株的基部将萌发的高度为5cm的子株剥落，然后将子株上的叶片全部剥离、根部剪掉，留取子株高度为2-3mm的茎基部作为外植体；

（2）外植体消毒处理：首先将外植体用流水反复冲洗1h，再放入洗涤剂中浸泡0.5h，浸泡的同时震荡，然后将外植体移至超净工作台上进行消毒处理，消毒处理完成后用灭菌水水反复冲洗振荡外植体至少5次，每次冲洗时间大于5min，最后将外植体用灭菌纸将表面的水分吸干；

（3）愈伤组织诱导：将步骤（2）消毒后的外植体接种到愈伤组织诱导培养基中，在温度为25±2℃的无菌室中黑暗培养1个月，得到愈伤组织；

（4）分化培养：将步骤（3）所述的愈伤组织切成2-3mm的小块，然后将所述的小块接种到分化培养基中进行分化培养形成小芽，且分化培养的倍数为6-7倍，培养条件则为：温度25±2℃、光照强度为1500~2000lx、光照时间为10~12h/d、培养地点为无菌培养室；

（5）壮苗培养：将步骤（4）分化培养后形成的小芽切下后接种到壮苗培养基中进行壮苗培养至幼苗高度为2-3cm，且培养条件为：温度25±2℃、光照强度为1500~2000lx、光照时间为12~15h/d、培养地点为无菌培养室；

（6）生根培养：将步骤（5）壮苗培养后得到的幼苗接种到生根培养基中进行生根培养，且培养条件为：温度25±2℃、光照强度为1500~2000lx、光照时间为10~12h/d、培养地点为无菌培养室。

2.根据权利要求1所述的一种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，步骤（2）所述的消毒处理的具体步骤为：首先用体积浓度为75%的酒精消毒15s，然后再用质量浓度为 0.1% 的HgCl₂溶液消毒5~8min。

3.根据权利要求1所述的一种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，所述的愈伤组织诱导培养基包括MS+0.1mg/L BA+0.1mg/L KT+1.0mg/L NAA+30g/L 蔗糖+7g/L 琼脂，pH值为5.7-6.0。

4.根据权利要求1所述的一种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，所述的分化培养基的包括MS+2.5mg/L BA+0.5mg/L KT+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L 琼脂，pH值为5.7-6.0。

5.根据权利要求1所述的一种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，所述的壮苗培养基包括MS+2.5mg/L BA +（0.1~0.2）mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L 琼脂，pH值为5.7-6.0。

6.根据权利要求1所述的一种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，所述的生根培养基包括1/4MS+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L 琼脂，pH值为5.7-6.0。