CN106106181A

CN106106181A - 一种白鹤芋的组培快繁方法

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Publication number: CN106106181A
Application number: CN201610639594.XA
Authority: CN
Inventors: 吴子平; 纪超群
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2016-08-08
Filing date: 2016-08-08
Publication date: 2016-11-16

Abstract

本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种白鹤芋的组培快繁方法,包括如下步骤：取2~3年白鹤芋生苗的顶芽及茎段为外植体，分别进行①外植体用0.1%升汞消毒，②茎段切成1～2mm厚的切片，与顶芽一起接入添加了6‑BA、VC的诱导与分化培养基中培养，③愈伤或不定芽团块接入到添加了6‑BA与IAA的培养基，其中用于诱导生根苗的不定芽团块直接接入添加了6‑BA、IAA及TIBA的培养基中，④株高≥30mm的单芽或3个主芽株高≥25mm的团块接入添加了活性炭的生根培养基中。本发明提供的一种白鹤芋组培快繁方法，可以在短时间内获得大量无性繁殖的白鹤芋组培苗。

Description

一种白鹤芋的组培快繁方法

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，涉及一种白鹤芋的组培快繁方法。

背景技术

白鹤芋为天南星科白鹤芋属多年生常绿草本植物。白鹤芋翠绿叶片，洁白佛焰苞，非常清新幽雅，是当今世界最受欢迎的观赏花卉之一，具有很高的观赏价值和经济价值。

目前，白鹤芋的繁殖的方法主要有分株、播种和组培。

分株繁殖，一般在5～6月份进行，生长健壮的植株两年可以分株1次，繁殖系数极低，难以规模化扩增。

播种繁殖，白鹤芋在自然状态下很难结果，需经人工授粉才能得到种子，种子采收后，应立即播种，发芽温度为30℃，播后10～15d发芽，如发芽时遇温度过低，种子易腐烂。

组培繁殖，始于20世纪70年代末和80年代初的美国、德国，以幼嫩花序和侧芽为外植体，经消毒后接种在添加10mg/L 6-苄基氨基嘌呤和2mg/L吲哚乙酸的MS培养基上，40～45d后长出愈伤组织和不定芽。把不定芽转移到添加2 mg/L吲哚乙酸的MS培养基上，30～40d诱导生根，成为完整植株。

目前，国内外对白鹤芋组培快繁的研究报道不多，主要是以侧芽、茎段、叶、叶柄、花丝体细胞、花序体细胞等器官进行愈伤组织诱导，然后再诱导愈伤组织分化不定芽，再由不定芽形成完整植株。目前适用于规模化生产的依然是以侧芽、茎段为外植体的快繁模式，如专利CN201110244807，以侧芽为外植体，经消毒、愈伤与不定芽分化诱导、增殖、生根，形成完整植株，目前已规模化生产。以叶、叶柄、花丝体细胞、花序体细胞为外植体的快繁模式依然处于实验室阶段，且对叶与叶柄的诱导效果并不理想，形成愈伤的时间长，且愈伤化程度低，不适合于规模化生产。花丝体细胞与花序体细胞诱导技术难度大，需进行显微操作，一旦显微操作不慎，极易诱导产生不同基因型的植株，亦不适合于规模化生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种白鹤芋的组培快繁方法，通过对白鹤芋顶芽特别是茎段切片的诱导，获得大量的白鹤芋再生植株。本发明方法特别适用于2～3年生白鹤芋植株的茎段切片进行诱导丛生芽。

本发明提供一种白鹤芋组培快繁的方法，包括如下步骤：

采集2～3年生白鹤芋顶芽与茎段为外植体，依次进行①外植体消毒,②愈伤组织诱导与不定芽分化,③继代增殖,④不定芽生根，获得白鹤芋再生植株。

所述采集2～3年生白鹤芋植株顶芽与茎段，是在3～4月份，植株生长旺盛的季节采集，要求2～3年生、茎段直径≥1cm。

所述①外植体消毒，是以顶芽及茎段为外植体，以0.1%升汞为消毒剂，顶芽消毒40～50min，茎段消毒60～70min，之后分别用无菌水漂洗2～3次。

所述②愈伤组织诱导与不定芽分化，是将消毒后的顶芽接入诱导与分化化培养基中；将消毒后的茎段切成1～2mm厚的切片，接入诱导与分化培养基中，1个顶芽或1片切片/杯，26±2℃，300~1500lux培养，光照12h/d，1个月转代1次。顶芽培养20d后开始萌动，培养40d后，顶芽下部切口膨大为黄绿色愈伤组织，培养60d后，黄绿色愈伤组织抽出不定芽；切片培养15d后开始膨大为绿色愈伤组织，培养30d后，绿色愈伤组织抽出不定芽。

所述诱导与分化培养基是以MS培养基为基础，含有1～3mg/L 6-BA(6-苄基氨基嘌呤，Benzylaminmopurine)、1~2mg/L VC（抗坏血酸，Ascorbic acid）, 30g/L蔗糖, 5.5g /L琼酯，pH6.0。

所述③继代增殖，是将愈伤或不定芽团块接入纯增殖培养中，不定芽团接入边增殖边生根培养基中，3～4芽/团，10团/杯，23±2℃,1500~3500lux培养，光照12h/d。纯增殖培养30～35d后，愈伤或不定芽团块增殖率≥3；边增殖边生根培养30～35d后，愈伤或不定芽团块增殖率≥3,生根系数≥0.3。

所述纯增殖培养基是以MS培养基为基础，含有1~3mg/L的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，Benzylaminmopurine)、0.3~0.5mg/L IAA(吲哚乙酸，Indoleacetic acid)，30g/L蔗糖,5.5g /L琼酯,pH6.0；所述边增殖边生根培养基是以MS培养基为基础，含有1~3mg/L的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，Benzylaminmopurine)、0.3~0.5mg/LIAA(吲哚乙酸，Indoleaceticacid)、0.2～1Tmg/L TIBA(三碘苯甲酸，2,3,5-Triiodobenzoic acid), 30g/L蔗糖, 5.5g/L琼酯，pH6.0。

所述④不定芽生根，单芽株高≥30mm，茎粗≥2mm，展开叶≥2，根≥1条时，切下接入生根培养基中，60株/杯；团块中3个主芽株高≥25mm，根≥1条时，切下接入生根培养基中，30团/杯。21±2℃，1500~3500lux培养，光照12h/d。

所述生根培养基是以MS培养基为基础，含有0.1g/L AC(活性炭，Acticarbon) ,30g/L蔗糖, 5.5g /L琼酯，pH6.0。培养10～15d后，即可炼苗移栽。

本发明的创新之处是公开了白鹤芋顶芽及茎段切片愈伤诱导、不定芽分化、增殖、生根的培养基配方及其规模化组培快繁的一种方法，其中茎段切片快繁方法，目前国内外未见同类报道。

本发明有利于规模化繁殖优良观赏植物白鹤芋种苗，满足人们提高生活质量对白鹤芋盆花的要求，满足城镇化园林景观建设对白鹤芋植株的需求。

具体实施方式

一种白鹤芋组培快繁方法，该方法包括以下步骤。

实施例1：

①取外植体：选取2年生生长健壮无病虫害的绿巨人白鹤芋为母株，取顶芽与茎段为外植体，去除叶、苞叶、根，用手术刀削除茎段外周表皮，备用。

②外植体消毒：在超净工作台上，将顶芽与茎段分别装到不同的无菌空瓶中，以0.1%升汞为消毒剂，顶芽消毒45min，茎段消毒60min，之后分别用无菌水漂洗3次。顶芽无菌率83.6%，切片无菌率91.3%。

③愈伤组织诱导与不定芽分化：消毒后的顶芽接入诱导与分化培养基中；消毒后的茎段切成1～2mm厚的切片，接入诱导与分化培养基中，1个顶芽或1片切片/杯，26±2℃，1000lux培养，光照12h/d，1个月转代1次。诱导分化培养基：MS+3mg/L 6-BA+2mg/L VC+30g/L蔗糖+5.5g /L琼酯，pH6.0。顶芽培养20d后开始萌动，培养40d后，顶芽下部切口膨大为黄绿色愈伤组织，培养60d后，黄绿色愈伤组织抽出不定芽；切片培养15d后开始膨大为绿色愈伤组织，培养30d后，绿色愈伤组织抽出不定芽。

④继代增殖：愈伤或不定芽团块接入纯增殖培养中，不定芽团接入边增殖边生根培养基中，3～4芽/团，23±2℃，3000lux培养，光照12h/d。纯增殖培养30d后，愈伤或不定芽团块增殖率≥3；边增殖边生根培养30d后，愈伤或不定芽团块增殖率≥3,生根系数≥0.3。纯增殖培养基：MS+3mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA+30g/L蔗糖+5.5g /L琼酯，pH6.0；边增殖边生根培养基：MS+2mg/L的6-BA+0.4mg/LIAA+0.4mg/L TIBA+30g/L蔗糖+5.5g /L琼酯，pH6.0。

⑤不定芽生根：单芽株高≥30mm，茎粗≥2mm，展开叶≥2，根≥1条时，切下接入生根培养基中；团块中3个主芽株高≥25mm，根≥1条时，切下接入生根培养基中。21±2℃，3500lux培养，光照12h/d。生根培养基：MS+0.1g/L AC+30g/L蔗糖+ 5.5g /L琼酯，pH6.0。培养10d后，即可炼苗移栽。

实施例2：

①选取外植体：选取2年生生长健壮无病虫害的小巨人白鹤芋为母株，取顶芽与茎段为外植体，去除叶、苞叶、根，用手术刀削除茎段外周表皮，备用。

②外植体消毒：在超净工作台上，将顶芽与茎段分别装到不同的无菌空瓶中，以0.1%升汞为消毒剂，顶芽消毒50min，茎段消毒65min，之后分别用无菌水漂洗3次。顶芽无菌率85%，切片无菌率95%。

③愈伤组织诱导与不定芽分化：消毒后的顶芽接入诱导与分化培养基中；消毒后的茎段切成1～2mm厚的切片，接入诱导与分化培养基中，1个顶芽或1片切片/杯，26±2℃，800lux培养，光照12h/d，1个月转代1次。诱导分化培养基：MS+2mg/L 6-BA+2mg/L VC+30g/L蔗糖+5.5g /L琼酯，pH6.0。顶芽培养20d后开始萌动，培养40d后，顶芽下部切口膨大为黄绿色愈伤组织，培养65d后，黄绿色愈伤组织抽出不定芽；切片培养18d后开始膨大为绿色愈伤组织，培养32d后，绿色愈伤组织抽出不定芽。

④继代增殖：愈伤或不定芽团块接入纯增殖培养中，不定芽团接入边增殖边生根培养基中，3～4芽/团，23±2℃，2000lux培养，光照12h/d。纯增殖培养30d后，愈伤或不定芽团块增殖率≥3；边增殖边生根培养30d后，愈伤或不定芽团块增殖率≥3,生根系数≥0.3。纯增殖培养基：MS+2mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA+30g/L蔗糖+5.5g /L琼酯，pH6.0；边增殖边生根培养基：MS+2mg/L的6-BA+0.3mg/LIAA+0.5mg/L TIBA+30g/L蔗糖+5.5g /L琼酯，pH6.0。

⑤不定芽生根：单芽株高≥30mm，茎粗≥2mm，展开叶≥2，根≥1条时，切下接入生根培养基中；团块中3个主芽株高≥25mm，根≥1条时，切下接入生根培养基中。21±2℃，3500lux培养，光照12h/d。生根培养基：MS+0.1g/L AC+30g/L蔗糖+ 5.5g /L琼酯，pH6.0。培养15d后，即可炼苗移栽。

上述实施例用来进一步解释说明本发明，而不是对本发明进行限制。本发明的保护范围由所附的权利要求来限定。

Claims

1.一种白鹤芋的组培快繁方法，包括如下步骤：

在3～4月份，取2~3年生白鹤芋顶芽与茎段为外植体，依次进行①外植体消毒②愈伤组织诱导与不定芽分化③继代增殖④不定芽生根。

2.根据权利要求1，所述白鹤芋的组培快繁方法，其特征在于：所述①外植体消毒，以顶芽及切片为外植体，以0.1%升汞为消毒剂，消毒时间40～70min,之后无菌水漂洗2～3次。

3.根据权利要求1，所述白鹤芋的组培快繁方法，其特征在于：所述②愈伤组织诱导与不定芽分化，将消毒后的顶芽接入诱导分化培养基中；将消毒后的茎段切成1～2mm厚的切片，接入诱导与分化培养基中，26±2℃,300~1500lux培养，光照12h/d；顶芽培养20d后开始萌动，培养40d后，顶芽下部切口膨大为黄绿色愈伤组织，培养60d后，黄绿色愈伤组织抽出不定芽；切片培养15d后开始膨大为绿色愈伤组织，培养30d后，绿色愈伤组织抽出不定芽。

4.根据权利要求3，所述白鹤芋的组培快繁方法，其特征在于，所述诱导与分化培养基是以MS培养基为基础，含有1～3mg/L 6-BA(6-苄基氨基嘌呤，Benzylaminmopurine)、1~2mg/L VC（抗坏血酸，Ascorbic acid）, 30g/L蔗糖, 5.5g /L琼酯，pH6.0。

5.根据权利要求1，所述白鹤芋的组培快繁方法，其特征在于：所述③继代增殖，愈伤或不定芽团块接入纯增殖培养中，不定芽团接入边增殖边生根培养基中，3～4芽/团，23±2℃,1500~3500lux培养，光照12h/d；纯增殖培养30～35d后，愈伤或不定芽团块增殖率≥3；边增殖边生根培养30～35d后，愈伤或不定芽团块增殖率≥3,生根系数≥0.3。

6.根据权利要求5, 所述白鹤芋的组培快繁方法，其特征在于：所述纯增殖培养基是以MS培养基为基础，含有1~3mg/L的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，Benzylaminmopurine)、0.3~0.5mg/L IAA(吲哚乙酸，Indoleacetic acid)，30g/L蔗糖, 5.5g /L琼酯,pH6.0；所述边增殖边生根培养基是以MS培养基为基础，含有1~3mg/L的6-BA(6-苄基氨基嘌呤，Benzylaminmopurine)、0.3~0.5mg/LIAA(吲哚乙酸，Indoleacetic acid)、0.2～1Tmg/LTIBA(三碘苯甲酸，2,3,5-Triiodobenzoic acid), 30g/L蔗糖, 5.5g /L琼酯，pH6.0。

7.根据权利要求1，所述白鹤芋的组培快繁方法，其特征在于：所述④不定芽生根,单芽株高≥30mm，茎粗≥2mm，展开叶≥2，根≥1条时，切下接入生根培养基中；团块中3个主芽株高≥25mm，根≥1条时，切下接入生根培养基中；21±2℃，1500~3500lux培养，光照12h/d。

8.根据权利要求7,所述白鹤芋的组培快繁方法，其特征在于：所述生根培养基是以MS培养基为基础，含有0.1g/L AC(活性炭，Acticarbon), 30g/L蔗糖, 5.5g /L琼酯，pH6.0；培养10～15d后，即可炼苗移栽。