CN110199872A - 一种短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法 - Google Patents
一种短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法。所述的方法包括以下步骤:1)外植体选择及消毒;2)茎尖培养;3)丛生芽诱导;4)丛生芽增殖5)生根及移栽。本发明以带有1~2个叶原基、直径1~2mm的茎尖为外植体,能大幅度缩短0.1%升汞消毒时间,最大程度减少重金属对植株的伤害,消毒后茎尖全部成活,生长恢复快,降低由于重金属毒害所造成的变异风险。使用相对较低浓度的细胞分裂素(0.6~1mg/L 6‑BA)进行培养及增殖,获得较高的增殖倍数,并降低增殖过程中的变异概率,提高种苗质量。将生根植株进行移栽,成活率达99%以上。
Description
技术领域
本发明属于植物种苗生产领域,具体涉及一种短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法。
背景技术
白掌是天南星科白鹤芋属(Spathiphyllum)的一个种,其花、叶具有较高观赏价值,且株型美观、大小适中,耐荫,又具有净化室内空气的功效,适合家庭及办公场所摆放,深受广大消费者的喜爱,市场前景广阔。
白掌通常采用分株方式进行繁育,繁殖系数低、周期长,易携带病毒,大大限制了白掌的规模化和商品化生产。而通过植物组织培养可以在短期内生产出大量优质组培种苗,满足市场需求。
国内关于白掌组培快繁有不少报道,但通常以叶片、叶柄、顶芽、茎段、花梗、花序等组织、器官为外植体,其表面消毒难度均较高,污染率介于10%~87%,且经过多代培养后,易产生内生细菌,影响后续增殖及成苗质量。以叶片、叶柄、茎段、花梗、花序诱导愈伤再分化成苗的途径,容易产生变异。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的不足,提供一种短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法。
本发明的短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法,包括以下步骤:(1)外植体选择及消毒、(2)茎尖培养、(3)丛生芽诱导、(4)丛生芽增殖、(5)生根及移栽。
具体的步骤为:
(1)外植体选择及消毒:于8~10月切取二年生白掌植株,取带4~5片叶柄的茎段,将茎段冲洗、晾干,以含氯消毒溶液进行清洁,用去离子水冲洗干净,无菌条件下剥去部分叶柄,加入HgCl2溶液进行消毒,再用灭菌去离子水冲洗干净,吸干水分,剥取带有1~2个叶原基、直径为1~2mm的茎尖作为外植体;
(2)茎尖培养:将茎尖置于1/2MS+0.2~0.6mg/L KT+0.1~0.5mg/L IBA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉,pH 5.8~6.0的培养基中培养,获得无菌单芽;培养基配制方法为:将各成分按其含量加入1/2MS培养基中,调pH值,混合均匀,灭菌即得。
(3)丛生芽诱导:将无菌单芽转接到1/2MS+0.6mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉,pH 5.8~6.0的培养基中培养,获得丛生芽;培养基配制方法为:将各成分按其含量加入1/2MS培养基中,调pH值,混合均匀,灭菌即得。
(4)丛生芽增殖:将丛生芽以双芽形式接种于3/4MS+0.6~1mg/L 6-BA+0.05~0.1mg/L IBA+30g/L蔗糖+6.5g/L卡拉粉,pH 5.8~6.0的培养基中进行增殖培养;培养基配制方法为:将各成分按其含量加入3/4MS培养基中,调pH值,混合均匀,灭菌即得。
(5)生根及移栽:从增殖获得的丛生芽中切下带根单株,将带根单株置于1/2MS+0.5~1.0mg/L IBA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉+0.2g/L活性炭,pH 5.8~6.0的培养基中进行生根培养,经炼苗后,移栽于填满泥炭基质的穴盘中进行栽培。培养基配制方法为:将各成分按其含量加入1/2MS培养基中,调pH值,混合均匀,灭菌即得。
所述的1/2MS培养基是将MS培养基中的大量元素减半而得到的培养基,3/4MS是将MS培养基中的大量元素减去1/4,留下3/4,而得到的培养基。
所述步骤(1)的HgCl2溶液为0.1%(即1mg/mL)的HgCl2溶液,消毒时间为4~8min。
所述步骤(1)的以含氯消毒溶液进行清洁具体为:用0.6%含氯消毒溶液(以君鸿牌消毒粉配制,其有效氯成分18~21%,w/w)振荡清洁40min,期间换一次清洁液。
所述步骤(2)茎尖培养条件为:先在6μmol·m-2·s-1弱光下培养1周,再转入光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养33天。
所述步骤(3)的丛生芽诱导培养条件为:在光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养80天。
所述步骤(4)的丛生芽增殖培养条件为:在光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养40天。
所述步骤(5)的生根培养条件为:在光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养30天。
所述步骤(5)的炼苗是在温度为24~28℃的温室中炼苗1周。
所述步骤(5)的栽培是在温度为24~28℃,空气相对湿度为80%的温室中栽培。
本发明的有益效果是:
本发明以带有1~2个叶原基、直径1~2mm的茎尖为外植体,由于白掌茎尖部的特殊结构,使得茎尖部未受环境污染,只需做好表面的简单消毒,便可获得无菌外植体,茎尖消毒成功率达到96.7%以上,能大幅度缩短0.1%升汞消毒时间,最大程度减少重金属对植株的伤害,消毒后茎尖全部成活,生长恢复快,降低由于重金属毒害所造成的变异风险。使用相对较低浓度的细胞分裂素(0.6~1mg/L 6-BA)进行培养及增殖,获得较高的增殖倍数,增殖率为2.5~3.1,并降低增殖过程中的变异概率,提高种苗质量,生根率达100%。将生根植株进行移栽,成活率达99%以上。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明,而不是对本发明的限制。
实施例1
1、外植体选择和消毒
选取栽培于温室中生长健壮、无病虫害的二年生美酒白掌,于8月切取植株,将植株整株切下,取带4~5片叶柄的茎段约5cm,将茎段冲洗、晾干,用0.6%(即6mg/mL)含氯消毒溶液(以君鸿牌消毒粉配制,其有效氯成分18~21%,w/w)振荡清洁40min,期间换一次清洁液,用去离子水冲洗干净,无菌条件下剥去2片叶柄,加入0.1%(即1mg/mL)HgCl2溶液浸泡消毒4min,用灭菌去离子水冲洗6次,吸干水分,剥取带有1~2个叶原基、直径1~2mm茎尖作为外植体。茎尖消毒成功率达到96.7%。
2、茎尖培养
将茎尖置于1/2MS+0.2mg/L KT+0.1mg/L IBA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉,pH 5.8~6.0的培养基中,在弱光下(6μmol·m-2·s-1)培养1周,然后转入光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养33天。茎尖均转绿成活,形成无菌单芽。经过40天的培养,茎基部直径平均增长3.01±0.18mm。
3、丛生芽诱导
将无菌单芽转接到1/2MS+0.6mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉,pH 5.8~6.0的培养基中,在光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养80天(2个周期)。各茎尖均能诱导出2个以上的丛生芽。
4、丛生芽增殖
将丛生芽以双芽形式接种于3/4MS+0.6mg/L 6-BA+0.05mg/L IBA+30g/L蔗糖+6.5g/L卡拉粉,pH 5.8~6.0的培养基上,每瓶4个芽团,在光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养40天,其增殖率为2.69。
5、生根及移栽
从增殖获得的丛生芽中将株高3cm以上、具有3片叶的带根单株切下,将带根单株置于1/2MS+0.5mg/L IBA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉+0.2g/L活性炭,pH 5.8~6.0的培养基中,在光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养30天,生根率达到100%,置于温度为26±2℃的温室中炼苗1周后,移栽于填满泥炭基质(0~20mm)的穴盘中,在温室温度为26±2℃,空气相对湿度约为80%条件下栽培,成活率达99%。
实施例2
1、外植体选择和消毒
选取栽培于温室中生长健壮、无病虫害的二年生美酒白掌,于10月切取植株,将植株整株切下,取带4~5片叶柄的茎段约5cm,将茎段冲洗、晾干,用0.6%(即6mg/mL)含氯消毒溶液(以君鸿牌消毒粉配制,其有效氯成分18~21%,w/w)振荡清洁40min。期间换一次清洁液,用去离子水冲洗干净,无菌条件下剥去2片叶柄,加入0.1%(即1mg/mL)HgCl2溶液浸泡消毒8min,用灭菌去离子水冲洗6次,约35min,吸干水分,剥取带有1~2个叶原基、直径1~2mm茎尖作为外植体。茎尖消毒成功率达到100%。
2、茎尖培养
将茎尖置于1/2MS+0.6mg/L KT+0.5mg/L IBA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉,pH 5.8~6.0的培养基中,在弱光下(6μmol·m-2·s-1)培养1周,然后转入光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养33天。茎尖均转绿成活,形成无菌单芽。经过40天的培养,茎基部直径平均增长2.63±0.13mm。
3、丛生芽诱导
将无菌单芽转接到1/2MS+0.6mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉,pH 5.8~6.0的培养基中,在光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养80天(2个周期)。各茎尖均能诱导出2个以上的丛生芽。
4、丛生芽增殖
将丛生芽以双芽形式接种于3/4MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA+30g/L蔗糖+6.5g/L卡拉粉,pH 5.8~6.0的培养基上,每瓶4个芽团,在光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养40天,其增殖率为3.03。
5、生根及移栽
从增殖获得的丛生芽中将株高3cm以上、具有3片叶的带根单株切下,将带根单株置于1/2MS+1.0mg/L IBA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉+0.2g/L活性炭,pH 5.8~6.0的培养基中,在光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养30天,生根率达到100%,置于温度为26±2℃的温室中炼苗1周后,移栽于填满泥炭基质(0~20mm)的穴盘中,在温室温度为26±2℃,空气相对湿度约为80%条件下栽培,成活率达100%。
以上仅是本发明的优选实施方式,应当指出的是,上述优选实施方式不应视为对本发明的限制,本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明的精神和范围内,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)外植体选择及消毒:于8~10月切取二年生白掌植株,取带4~5片叶柄的茎段,将茎段冲洗、晾干,以含氯消毒溶液进行清洁,用去离子水冲洗干净,无菌条件下剥去部分叶柄,加入HgCl2溶液进行消毒,再用灭菌去离子水冲洗干净,吸干水分,剥取带有1~2个叶原基、直径为1~2mm的茎尖作为外植体;
(2)茎尖培养:将茎尖置于1/2MS+0.2~0.6mg/L KT+0.1~0.5mg/L IBA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉,pH 5.8~6.0的培养基中培养,获得无菌单芽;
(3)丛生芽诱导:将无菌单芽转接到1/2MS+0.6mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉,pH 5.8~6.0的培养基中培养,获得丛生芽;
(4)丛生芽增殖:将丛生芽以双芽形式接种于3/4MS+0.6~1mg/L 6-BA+0.05~0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+6.5g/L卡拉粉,pH 5.8~6.0的培养基中进行增殖培养;
(5)生根及移栽:从增殖获得的丛生芽中切下带根单株,将带根单株置于1/2MS+0.5~1.0mg/L IBA+30g/L蔗糖+7.2g/L卡拉粉+0.2g/L活性炭,pH 5.8~6.0的培养基中进行生根培养,经炼苗后,移栽于填满泥炭基质的穴盘中进行栽培。
2.根据权利要求1所述的短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法,其特征在于,所述步骤(1)的HgCl2溶液为0.1%的HgCl2溶液,消毒时间为4~8min。
3.根据权利要求1所述的短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法,其特征在于,所述步骤(1)的以含氯消毒溶液进行清洁具体为:用0.6%含氯消毒溶液(以君鸿牌消毒粉配制,其有效氯成分18~21%,w/w)振荡清洁40min,期间换一次清洁液。
4.根据权利要求1所述的短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法,其特征在于,所述步骤(2)茎尖培养条件为:先在6μmol·m-2·s-1弱光下培养1周,再转入光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养33天。
5.根据权利要求1所述的短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法,其特征在于,所述步骤(3)的丛生芽诱导培养条件为:在光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养80天。
6.根据权利要求1所述的短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法,其特征在于,所述步骤(4)的丛生芽增殖培养条件为:在光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养40天。
7.根据权利要求1所述的短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法,其特征在于,所述步骤(5)的生根培养条件为:在光照强度为25~30μmol·m-2·s-1,光照时间为10h/d,温度为24±2℃,空气相对湿度为60%的条件下培养30天。
8.根据权利要求1所述的短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法,其特征在于,所述步骤(5)的炼苗是在温度为24~28℃的温室中炼苗1周。
9.根据权利要求1所述的短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法,其特征在于,所述步骤(5)的栽培是在温度为24~28℃,空气相对湿度为80%的温室中栽培。
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GR01 | Patent grant | ||
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