CN107646694A - 一种南沙参离体再生组织培养工艺技术 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种南沙参离体再生组织培养工艺技术，南沙参为桔梗科植物，轮叶沙参或杏叶沙参的干燥根。春秋两季采挖，除去茎叶及须根，洗净泥土，刮去栓皮，晒干。南沙参根呈长圆锥形或长圆柱形，有的略弯曲或扭曲，四周有多数半月形茎痕，呈盘节状。表面黄白色或浅棕黄色，凹陷处常有残留棕褐色栓皮，上部多有深陷横纹，呈断续的环纹，下部有纵皱纹及纵沟。体轻质泡，易折，断面黄白色，不平坦，多裂隙。气微，味甘淡。以条粗长，干燥、饱满、色黄白、外皮去净者为佳。本发明以南沙参带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了南沙参离体再生，为其大量选育、快速繁殖、新品种推广提供技术支撑。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养类，具体地说，涉及一种南沙参离体再生组织培养工艺技术。
背景技术
南沙参为桔梗科植物，轮叶沙参或杏叶沙参的干燥根。春秋两季采挖，除去茎叶及须根，洗净泥土，刮去栓皮，晒干。药材性状：根呈长圆锥形或长圆柱形，有的略弯曲或扭曲，四周有多数半月形茎痕，呈盘节状。表面黄白色或浅棕黄色，凹陷处常有残留棕褐色栓皮，上部多有深陷横纹，呈断续的环纹，下部有纵皱纹及纵沟。体轻质泡，易折，断面黄白色，不平坦，多裂隙。气微，味甘淡。以条粗长，干燥、饱满、色黄白、外皮去净者为佳。主要成分以轮叶沙参含沙参苷，为三萜皂类成分。杏叶沙参含皂苷，香豆素及植物甾醇。具有养阴润肺、化痰止咳的功用。用于肺热燥咳，阴虚痨嗽，干咳痰粘，气阴不足，烦热口干。南沙参种苗主要是采用种子播种法进行繁育，由于种子发芽率低下，远远不能满足大规模生产对南沙参种苗的需要。并且，种子繁殖后代之间在药效成分，不利于优良品种的推广。利用植物组织培养技术能有效解决濒危珍稀物种拯救和野生植物资源匮乏的问题。因此很有必要建立南沙参组织培养技术，为其大规模工厂化生产奠定基础，保证生产种植用种量。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种南沙参离体再生组织培养工艺技术，本发明以南沙参带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了南沙参的离体再生，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种南沙参离体再生组织培养工艺技术，其特征在于包括以下步骤：
（1）芽诱导培养：以南沙参带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成6.0长的带有4个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡11min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗4h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消31s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒26min，用无菌水冲洗7次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在29℃条件下全暗培养4天，然后每天光照13小时，光照强度为2100lx条件下培养31天，统计其芽诱导率及生长情况；
（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在29℃条件下全暗培养4天，然后每天光照13小时，光照强度为2100lx，培养温度为29℃的条件下培养31天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，得到丛生芽；
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为3.6cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照13小时，光照强度为3100lx，培养温度为29℃的条件下培养32后统计生根情况；
（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约9cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝4:1混合成的基质,光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽大田。
步骤（1）所述的芽诱导培养基为：MS+6mg/L6-BA+3mg/L NAA+31g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+1.2mg/LNAA+7mg/L 6-BA+31g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（3）所述的生根培养基为：1/4MS+2mg/L NAA+2mg/L IBA+31g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9。
与现有技术相比本发明的优点是：本发明通过植物组织培养技术短时间内快速获得大量南沙参优良品种苗木的方法。以南沙参带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了南沙参的离体再生，为其大量选育、快速繁殖、新品种推广提供技术支持，满足生产用种量需求。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
（1）芽诱导培养：以南沙参离体再生带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成4.8长的带有4个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡4min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗2h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒4s后用无菌水洗2次，再用0.2%升汞溶液消毒9min，用无菌水冲洗3次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在27℃条件下全暗培养2天，然后每天光照9小时，光照强度为1400lx条件下培养29天，统计其芽诱导率及生长情况，芽诱导率为86%。所述的芽诱导培养基为：MS+2mg/L6-BA+0.4mg/L NAA+24g/L蔗糖+3.7g/L琼脂，pH为5.7。
（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在27℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照9小时，光照强度为900lx，培养温度为27℃的条件下培养29天后观察生长情况和芽增殖情况。多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽，新生芽体生长健壮，增殖系数为4.8。所述的增殖培养基为MS+0.4mg/LNAA+4mg/L 6-BA+29g/L蔗糖+4.0g/L琼脂，pH为5.7。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为3.3cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在30℃条件下全暗培养2天，然后每天光照10小时，光照强度为1900lx，培养温度为27℃的条件下培养28天后统计生根情况，生根率为91%。所述的生根培养基为：1/4MS+0.4mg/L NAA+0.1mg/L IBA+14g/L蔗糖+3.4g/L琼脂，pH为5.7。
（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约9cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖自然光照下炼苗4天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝4:1混合成的基质光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率为87%。
实施例2：
（1）芽诱导培养：以南沙参带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成8.0长的带有6个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡13min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗2h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒18s后用无菌水洗8次，再用0.1%升汞溶液消毒18min，用无菌水冲洗7次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在29℃条件下全暗培养6天，然后每天光照13小时，光照强度为1800lx条件下培养33天，统计其芽诱导率及生长情况，芽诱导率为84%。所述的芽诱导培养基为：MS+8mg/L6-BA+0.4mg/L NAA+33g/L蔗糖+4.0g/L琼脂，pH为5.9。
（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在29℃条件下全暗培养1天，然后每天光照15小时，光照强度为1800lx，培养温度为29℃的条件下培养33天后观察生长情况和芽增殖情况。多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽，新生芽体生长健壮，增殖系数为6.0。所述的增殖培养基为MS+0.4mg/LNAA+7mg/L 6-BA+33g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.9。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为3.8cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养4天，然后每天光照14小时，光照强度为2500lx，培养温度为28℃的条件下培养28天后统计生根情况，生根率为95%。所述的生根培养基为：1/4MS+1.0mg/L NAA+0.7mg/L IBA+18g/L蔗糖+3.3g/L琼脂，pH为5.9。
（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约10cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝2:1混合成的基质,光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率为93%。
Claims (4)
1.一种南沙参离体再生组织培养工艺技术，其特征在于包括以下步骤：
（1）芽诱导培养：以南沙参带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成6.0长的带有4个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡11min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗4h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消31s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒26min，用无菌水冲洗7次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在29℃条件下全暗培养4天，然后每天光照13小时，光照强度为2100lx条件下培养31天，统计其芽诱导率及生长情况；
（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在29℃条件下全暗培养4天，然后每天光照13小时，光照强度为2100lx，培养温度为29℃的条件下培养31天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，得到丛生芽；
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为3.6cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照13小时，光照强度为3100lx，培养温度为29℃的条件下培养32后统计生根情况；
（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约9cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝4:1混合成的基质,光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽大田。
2. 根据权利要求1所述的一种南沙参离体再生组织培养工艺技术，其特征在于步骤（1）所述的芽诱导培养基为：MS+6mg/L6-BA+3mg/L NAA+31g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9。
3. 根据权利要求1所述的一种南沙参离体再生组织培养工艺技术，其特征在于步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+1.2mg/LNAA+7mg/L 6-BA+31g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9。
4. 根据权利要求1所述的一种南沙参离体再生组织培养工艺技术，其特征在于步骤（3）所述的生根培养基为：1/4MS+2mg/L NAA+2mg/L IBA+31g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9。
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| CN109329055A (zh) * | 2018-10-18 | 2019-02-15 | 广东海洋大学 | 一种提高白鹤芋不定芽增殖率又降低白化比例的培养基 |
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