CN104054578B - 滇丁香的组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种滇丁香的组培快繁方法，于当年生枝条带芽茎段为外植体，接入初代培养基中诱导出不定芽，之后将诱导出的不定芽切成带腋芽的茎段接种于增殖培养基中培养出丛生芽，将丛生芽剪下，接种于生根培养基中，培养成生根苗，经炼苗得滇丁香移栽苗。本发明以当年生枝条带芽茎段为外植体，不仅取材容易、方便，在短期内能用较少的材料繁殖大量优质种苗，而且材料来源单一，遗传背景均一，不受季节和地区等的限制，重复性好，移栽后成活率达90%以上，能够满足市场对滇丁香的需求量。

Description

滇丁香的组培快繁方法
技术领域
本发明涉及滇丁香的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域。
背景技术
滇丁香（Luculia pinceana）为茜草科（Rubiaceae）滇丁香属（Luculia）植物，主要分布于云南西部和东南部，西藏东部以及缅甸北部等地。滇丁香色彩鲜艳，姿态秀丽，花期长，是园林中宝贵的花木；同时还是很好的中药材，滇丁香的根有活血调经、消炎止痛和降压的功能，花果有止咳化痰的功效，叶有消肿的功能。滇丁香的繁殖多以种子进行，但由于种子细小较难收集，利用常规扦插方法成活率又不高，极大地影响了滇丁香植株的产量，难于满足市场对滇丁香植株的需求量，阻碍了这一具有较高开发价值的园林观赏树种的推广应用。
发明内容
为解决现有滇丁香繁育方法存在成活率不高、产量小等问题，本发明提供一种滇丁香的组培快繁方法，以获得数量多、繁殖系数高、健壮的滇丁香移栽植株。
本发明通过以下技术方案实现：一种滇丁香的组培快繁方法，其特征在于经过下列各步骤：
A、将消毒灭菌的外植体接入下列初代培养基中：MS+6-BA 0.1～1.0mg/L+NAA0.01～0.10mg/L+蔗糖 20.0～40.0g/L，在温度为20～30℃、光照时间为8～12h/d、光照强度为30～50μmol/m2·s的条件下进行培养30～40天，诱导出不定芽；
B、将步骤A诱导出的不定芽剪下，切成带腋芽的长0.5～1.0cm的茎段，再接种于下列增殖培养基中：MS+6-BA 0.2～1.0 mg/L+NAA 0.02～0.10mg/L+蔗糖 20.0～40.0g/L，在温度为20～30℃、光照时间为8～12h/d、光照强度为30～50μmol/m2·s的条件下进行增殖培养20～40天，再转入上述新的增殖培养基中，并在相同条件下继续培养一次，得到丛生芽；
C、将步骤B所得丛生芽剪下，接种于下列生根培养基中：1/4 MS+IBA 0.2～1.0mg/L+蔗糖 15.0～30.0g/L，在温度为20～30℃、光照时间为8～12h/d、光照强度为30～50μmo/m2·s的条件下培养15～25天，得到生根苗；
D、将步骤C所得生根苗移至湿度为70～85%的炼苗棚中，揭盖炼苗3～5天，取出生根苗，洗去根部培养基，移栽到消毒营养袋中，于湿度为70～85%的条件下培养1周后，得滇丁香的移栽苗。
所述步骤A中消毒灭菌的外植体是：将采回来的当年生滇丁香枝条剪去叶片，切成0.5～1.5㎝的带芽茎段，经自来水冲洗干净后，先用质量浓度为0.2～2%的次氯酸钠溶液浸泡5～15分钟，以无菌水冲洗3～5次，再用质量浓度为0.1～1%的升汞溶液浸泡5～20分钟，以无菌水冲洗4～8次，然后用无菌滤纸吸干表面水分，即得消毒灭菌的外植体。
所述步骤D的消毒营养袋是经800～1000倍甲基托布津消毒的消毒营养袋。
本发明与常规方法相比具有下列优点和效果：本发明以当年生枝条带芽茎段为外植体，取材容易、数量多，不仅在短期内能用较少的材料繁殖大量优质种苗，而且材料来源单一、遗传背景均一，不受季节和地区等的限制，重复性好。移栽后成活率达90%以上，具有用材少、周期短、速度快、繁殖系数高等特点，通过本方法容易获得大量健壮无病的滇丁香植株，完全能够满足市场对滇丁香的需求量。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步描述。
实施例1
A、将采回来的当年生滇丁香枝条剪去叶片，切成0.5～1.5㎝的带芽茎段，经自来水冲洗干净后，先用质量浓度为2%的次氯酸钠溶液浸泡5分钟，以无菌水冲洗3次，再用质量浓度为0.1%的升汞溶液浸泡20分钟，以无菌水冲洗4次，然后用无菌滤纸吸干表面水分，即得消毒灭菌的外植体，再将消毒灭菌的外植体接入下列初代培养基中：MS+6-BA 0.1mg/L+NAA 0.01mg/L+蔗糖 20.0g/L，在温度为25℃、光照时间为12h/d、光照强度为40μmol/m2·s的条件下进行培养30天，诱导出不定芽；平均每个外植体分化不定芽1.1个，芽长2.85cm；
B、将步骤A诱导出的不定芽剪下，切成带腋芽的长0.5～1.0cm的茎段，再接种于下列增殖培养基中：MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.02mg/L+蔗糖 20.0g/L，在温度为25℃、光照时间为12h/d、光照强度为40μmol/m2·s的条件下进行增殖培养30天，再转入上述新的增殖培养基中，并在相同条件下继续培养一次，得到丛生芽；平均每个外植体得丛生芽3.5个，芽长3.25cm；
C、将步骤B所得丛生芽剪下，接种于下列生根培养基中：1/4 MS+IBA 0.2mg/L+蔗糖 15.0g/L，在温度为25℃、光照时间为12h/d、光照强度为40μmo/m2·s的条件下培养20天，得到生根苗；生根率达96.67%，平均生根8.7条，根长0.93㎝；
D、将步骤C所得生根苗移至湿度为70%的炼苗棚中，揭盖炼苗3天，取出生根苗，洗去根部培养基，移栽到经800倍甲基托布津消毒的消毒营养袋中，于湿度为70%的条件下培养1周后，得滇丁香的移栽苗，成活率达90.4%。
实施例2
A、将采回来的当年生滇丁香枝条剪去叶片，切成0.5～1.5㎝的带芽茎段，经自来水冲洗干净后，先用质量浓度为1%的次氯酸钠溶液浸泡10分钟，以无菌水冲洗4次，再用质量浓度为0.5%的升汞溶液浸泡15分钟，以无菌水冲洗6次，然后用无菌滤纸吸干表面水分，即得消毒灭菌的外植体，再将消毒灭菌的外植体接入下列初代培养基中：MS+6-BA 0.3mg/L+NAA 0.03mg/L+蔗糖 30.0g/L，在温度为20℃、光照时间为8h/d、光照强度为30μmol/m2·s的条件下进行培养40天，诱导出不定芽；平均每个外植体分化不定芽1.4个，芽长2.82cm；
B、将步骤A诱导出的不定芽剪下，切成带腋芽的长0.5～1.0cm的茎段，再接种于下列增殖培养基中：MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L+蔗糖 30.0g/L，在温度为20℃、光照时间为8h/d、光照强度为30μmol/m2·s的条件下进行增殖培养20天，再转入上述新的增殖培养基中，并在相同条件下继续培养一次，得到丛生芽；平均每个外植体得丛生芽4.5个，芽长2.68cm；
C、将步骤B所得丛生芽剪下，接种于下列生根培养基中：1/4 MS+IBA 0.5mg/L+蔗糖 20.0g/L，在温度为20℃、光照时间为8h/d、光照强度为30μmo/m2·s的条件下培养25天，得到生根苗；生根率达100%，平均生根11.7条，根长0.98㎝；
D、将步骤C所得生根苗移至湿度为85%的炼苗棚中，揭盖炼苗5天，取出生根苗，洗去根部培养基，移栽到经900倍甲基托布津消毒的消毒营养袋中，于湿度为85%的条件下培养1周后，得滇丁香的移栽苗，成活率达94.6%。
实施例3
A、将采回来的当年生滇丁香枝条剪去叶片，切成0.5～1.5㎝的带芽茎段，经自来水冲洗干净后，先用质量浓度为0.2%的次氯酸钠溶液浸泡15分钟，以无菌水冲洗5次，再用质量浓度为1%的升汞溶液浸泡5分钟，以无菌水冲洗8次，然后用无菌滤纸吸干表面水分，即得消毒灭菌的外植体，再将消毒灭菌的外植体接入下列初代培养基中：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.10mg/L+蔗糖 40.0g/L，在温度为30℃、光照时间为10h/d、光照强度为50μmol/m2·s的条件下进行培养38天，诱导出不定芽；平均每个外植体分化不定芽1.6个，芽长2.68cm；
B、将步骤A诱导出的不定芽剪下，切成带腋芽的长1.0cm的茎段，再接种于下列增殖培养基中：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.10mg/L+蔗糖 40.0g/L，在温度为30℃、光照时间为10h/d、光照强度为50μmol/m2·s的条件下进行增殖培养40天，再转入上述新的增殖培养基中，并在相同条件下继续培养一次，得到丛生芽；平均每个外植体得丛生芽4.0个，芽长3.04cm；
C、将步骤B所得丛生芽剪下，接种于下列生根培养基中：1/4 MS+IBA 1.0mg/L+蔗糖 30.0g/L，在温度为30℃、光照时间为10h/d、光照强度为50μmo/m2·s的条件下培养15天，得到生根苗；生根率达100%，平均生根10.1条，根长0.89㎝；
D、将步骤C所得生根苗移至湿度为80%的炼苗棚中，揭盖炼苗4天，取出生根苗，洗去根部培养基，移栽到经1000倍甲基托布津消毒的消毒营养袋中，于湿度为80%的条件下培养1周后，得滇丁香的移栽苗，成活率达92.5%。
上述实施例与现有技术对比，由于滇丁香种子细小，千粒重仅0.07g左右，种子成熟后发芽率为65%左右，苗圃出苗率约15～25%，利用现有技术的常规扦插方法成活率仅33.3%，若以IAA生长素处理后，成活率可提高到80%以上。与本发明实施例的成活率还是有很大差距，可见，本发明不仅在短期内能用较少的材料繁殖大量优质种苗，而且移栽后成活率达90%以上，具有用材少、周期短、速度快、繁殖系数高等特点。

Claims (1)

1.一种滇丁香的组培快繁方法，其特征在于经过下列各步骤：
A、将采回来的当年生滇丁香枝条剪去叶片，切成0.5～1.5㎝的带芽茎段，经自来水冲洗干净后，先用质量浓度为1%的次氯酸钠溶液浸泡10分钟，以无菌水冲洗4次，再用质量浓度为0.5%的升汞溶液浸泡15分钟，以无菌水冲洗6次，然后用无菌滤纸吸干表面水分，即得消毒灭菌的外植体，再将消毒灭菌的外植体接入下列初代培养基中：MS+6-BA 0.3mg/L+NAA0.03mg/L+蔗糖 30.0g/L，在温度为20℃、光照时间为8h/d、光照强度为30μmol/m2·s的条件下进行培养40天，诱导出不定芽；平均每个外植体分化不定芽1.4个，芽长2.82cm；
B、将步骤A诱导出的不定芽剪下，切成带腋芽的长0.5～1.0cm的茎段，再接种于下列增殖培养基中：MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L+蔗糖 30.0g/L，在温度为20℃、光照时间为8h/d、光照强度为30μmol/m2·s的条件下进行增殖培养20天，再转入上述新的增殖培养基中，并在相同条件下继续培养一次，得到丛生芽；平均每个外植体得丛生芽4.5个，芽长2.68cm；
C、将步骤B所得丛生芽剪下，接种于下列生根培养基中：1/4 MS+IBA 0.5mg/L+蔗糖20.0g/L，在温度为20℃、光照时间为8h/d、光照强度为30μmo/m2·s的条件下培养25天，得到生根苗；生根率达100%，平均生根11.7条，根长0.98㎝；
D、将步骤C所得生根苗移至湿度为85%的炼苗棚中，揭盖炼苗5天，取出生根苗，洗去根部培养基，移栽到经900倍甲基托布津消毒的消毒营养袋中，于湿度为85%的条件下培养1周后，得滇丁香的移栽苗，成活率达94.6%。
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滇丁香茎段的离体培养;王俐等;《云南农业大学学报》;20050630;第20卷(第3期);第446-447页，尤其是摘要及第1-3节 *

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