CN104957042B - 鸡冠滇丁香的组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种鸡冠滇丁香的组培快繁方法，将种子接入初代培养基中培养出无菌苗，之后将无菌苗切成带腋芽的茎段接种于增殖培养基中培养出丛生芽，将丛生芽剪下，接种于生根培养基中，培养出生根苗，经炼苗得移栽苗。本发明不仅野外取材容易、方便，在短期内能用较少的材料繁殖大量优质种苗，而且不受季节和地区的限制，重复性好，移栽后成活率达90%以上，完全能够满足市场对鸡冠滇丁香的需求量。

Description

鸡冠滇丁香的组培快繁方法
技术领域
本发明涉及一种植物的组培快繁方法，尤其是一种鸡冠滇丁香的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域。
背景技术
鸡冠滇丁香(Luculia yunnanensis)系茜草科(Rubiaceae)滇丁香属(Luculia)，以小枝顶端、萼管及果密被柔毛而显著区别于本属其它的无毛种类。此外，鸡冠滇丁香为滇丁香属中唯一的我国特有植物，主要分布于云南的怒江、临沧和思茅等地。该植物叶片翠绿、株型优美，枝顶簇生伞房状聚伞花序，气味芬芳且花期较长，具有极高的观赏价值和广阔的应用前景，为极具云南特色的珍贵野生花卉资源，然而鸡冠滇丁香分布区域十分有限，加之分布地遭到人为干扰和破坏严重，其野生资源现已稀少。因此，亟需对鸡冠滇丁香的繁殖技术进行研究总结，但目前国内外未见相关的报道。
发明内容
为实现鸡冠滇丁香的快速繁殖，本发明提供一种鸡冠滇丁香的组培快繁方法，该方法取材容易、繁殖系数高，容易获得大量无病鸡冠滇丁香植株。
本发明通过以下技术方案实现：一种鸡冠滇丁香的组培快繁方法，其特征在于经过下列步骤：
A、将消毒灭菌的种子接入下列初代培养基中：
MS
蔗糖 25～35g/L，
在温度为20～30℃、光照时间为8～12h/d、光照强度为35～45μmol/m2·s的条件下进行培养直至小苗高2～3㎝；在此条件下培育至10天左右种子开始萌发，至50～60天小苗即可长高2～3㎝；
B、将步骤A培养出的小苗剪下，切成带腋芽的茎段接种于下列增殖培养基中：
在温度为20～30℃、光照时间为8～12h/d、光照强度为35～45μmol/m2·s的条件下进行增殖培养30～40天，再转入新的与上述增殖培养基相同的培养基中，按相同培养条件继续培养一次，得丛生芽；
C、将步骤B所得丛生芽剪下，接种于下列生根培养基中：
1/4MS
IBA 0.4～1.2mg/L
蔗糖 15～25g/L，
在温度为20～30℃、光照时间为8～12h/d、光照强度为35～45μmo/m2·s的条件下进行培养15～25天，得生根苗；
D、将步骤C所得生根苗移至湿度为70～85％的条件下进行炼苗3～5天，取出生根苗，洗去根部培养基，移栽到经800～900倍甲基托布津消毒的营养袋中，于湿度为70～85％的同样条件下培养，1周后逐步降低湿度，即得鸡冠滇丁香的移栽苗。
所述步骤A的消毒灭菌的种子是将野生的鸡冠滇丁香蒴果用水洗净后，在无菌条件下用体积浓度为75％酒精浸泡30s，迅速用无菌水冲洗3～5次，再用质量浓度为0.1～1.0％的升汞溶液浸泡10～20分钟，以无菌水冲洗5～8次，然后用无菌滤纸吸干表面水分，用解剖刀切开蒴果取种子。
所述步骤D中1周后逐步降低湿度是1周后分多次逐步增加光照强度用以降低湿度，到1个月时完全裸露于阳光下。
本发明具有下列优点和效果：本发明以鸡冠滇丁香的种子为扩繁材料，不仅在短期内能用较少的材料繁殖大量优质种苗，具有用材少、取材容易、周期短、速度快、繁殖系数高等特点，而且不受季节和地区的限制，重复性好。将所得鸡冠滇丁香的移栽苗移栽后成活率达90％以上，完全能够满足市场对鸡冠滇丁香的需求量。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步描述。
实施例1
A、将野生的鸡冠滇丁香蒴果用水洗净后，移至超净工作台中，在无菌条件下用体积浓度为75％酒精浸泡30s，迅速用无菌水冲洗3次，再用质量浓度为0.1％的升汞溶液浸泡20分钟，以无菌水冲洗5次，然后用无菌滤纸吸干表面水分，用解剖刀切开蒴果取种子，再将种子接入下列初代培养基中：
MS
蔗糖 30g/L，
在温度为25℃、光照时间为12h/d、光照强度为40μmol/m2·s的条件下进行培养；在此条件下培育至10天左右种子开始萌发，至50天小苗平均高2.25㎝；
B、将步骤A培养出的小苗剪下，切成带腋芽的茎段接种于下列增殖培养基中：
在温度为25℃、光照时间为12h/d、光照强度为40μmol/m2·s的条件下进行增殖培养30天，再转入新的与上述增殖培养基相同的培养基中，按相同培养条件继续培养一次，得丛生芽；平均每个外植体得丛生芽4.3个，芽长3.07cm；
C、将步骤B所得丛生芽剪下，接种于下列生根培养基中：
1/4MS
IBA 0.4mg/L
蔗糖 15g/L，
在温度为25℃、光照时间为12h/d、光照强度为40μmo/m2·s的条件下进行培养20天，得生根苗；20天生根率达93.33％，平均生根7.8条，根长0.89㎝；
D、将步骤C所得生根苗移至湿度为75％的炼苗棚中，揭盖炼苗3天，取出生根苗，洗去根部培养基，移栽到经800倍甲基托布津消毒的营养袋中，于湿度为75％的同样条件下培养，1周后分多次除去遮阴物逐步增加光照强度用以降低湿度，到1个月时完全去除遮阴物裸露于阳光下，即得鸡冠滇丁香的移栽苗。
实施例2
A、将野生的鸡冠滇丁香蒴果用水洗净后，移至超净工作台中，在无菌条件下用体积浓度为75％酒精浸泡30s，迅速用无菌水冲洗5次，再用质量浓度为1.0％的升汞溶液浸泡10分钟，以无菌水冲洗8次，然后用无菌滤纸吸干表面水分，用解剖刀切开蒴果取种子，再将种子接入下列初代培养基中：
MS
蔗糖 25g/L，
在温度为20℃、光照时间为8h/d、光照强度为35μmol/m2·s的条件下进行培养；在此条件下培育至10天左右种子开始萌发，至60天小苗长高至2.96㎝；
B、将步骤A培养出的小苗剪下，切成带腋芽的茎段接种于下列增殖培养基中：
在温度为20℃、光照时间为8h/d、光照强度为35μmol/m2·s的条件下进行增殖培养35天，再转入新的与上述增殖培养基相同的培养基中，按相同培养条件继续培养一次，得丛生芽；平均每个外植体得丛生芽3.6个，芽长3.25cm；
C、将步骤B所得丛生芽剪下，接种于下列生根培养基中：
1/4MS
IBA 0.8mg/L
蔗糖 25g/L，
在温度为20℃、光照时间为8h/d、光照强度为35μmo/m2·s的条件下进行培养15天，得生根苗；生根率达100％，平均生根10.9条，根长0.79㎝；
D、将步骤C所得生根苗移至湿度为85％的炼苗棚中，揭盖炼苗5天，取出生根苗，洗去根部培养基，移栽到经850倍甲基托布津消毒的营养袋中，于湿度为85％的同样条件下培养，1周后分多次除去遮阴物逐步增加光照强度用以降低湿度，到1个月时完全去除遮阴物裸露于阳光下，即得鸡冠滇丁香的移栽苗。
实施例3
A、将野生的鸡冠滇丁香蒴果用水洗净后，移至超净工作台中，在无菌条件下用体积浓度为75％酒精浸泡30s，迅速用无菌水冲洗4次，再用质量浓度为0.5％的升汞溶液浸泡15分钟，以无菌水冲洗6次，然后用无菌滤纸吸干表面水分，用解剖刀切开蒴果取种子，再将种子接入下列初代培养基中：
MS
蔗糖 35g/L，
在温度为30℃、光照时间为10h/d、光照强度为45μmol/m2·s的条件下进行培养直至小苗高2～3㎝；在此条件下培育至10天左右种子开始萌发，至55天小苗即可长高2.61㎝；
B、将步骤A培养出的小苗剪下，切成带腋芽的茎段接种于下列增殖培养基中：
在温度为30℃、光照时间为10h/d、光照强度为45μmol/m2·s的条件下进行增殖培养40天，再转入新的与上述增殖培养基相同的培养基中，按相同培养条件继续培养一次，得丛生芽；平均每个外植体得丛生芽4.1个，芽长3.27cm；
C、将步骤B所得丛生芽剪下，接种于下列生根培养基中：
1/4MS
IBA 1.2mg/L
蔗糖 20g/L，
在温度为30℃、光照时间为10h/d、光照强度为45μmo/m2·s的条件下进行培养25天，得生根苗；根率达100％，平均生根9.1条，根长0.94㎝；
D、将步骤C所得生根苗移至湿度为80％的炼苗棚中，揭盖炼苗4天，取出生根苗，洗去根部培养基，移栽到经900倍甲基托布津消毒的营养袋中，于湿度为80％的同样条件下培养，1周后分多次除去遮阴物逐步增加光照强度用以降低湿度，到1个月时完全去除遮阴物裸露于阳光下，即得鸡冠滇丁香的移栽苗。
对比例1：将鸡冠滇丁香的茎段，用清水清洗3次后，放入75％的酒精溶液中浸泡30s，再放入0.1％的升汞液中消毒4～5min，之后用无菌蒸馏水冲洗3～4次，在无菌条件下，将材料切成带一个茎节的1cm长的茎段，接种于MS+6-BA1～3mg/L+NAA 0.03mg/L的培养基上，进行芽的分化；再将幼苗转入1/2MS+NAA 1～3mg/L+AC 0.03％的培养基中进行生根培养。蔗糖浓度3％，琼脂0.8％，pH5.8，培养温度22±1℃，光照强度2000lx，光照时间12h/d。(“滇丁香茎段的离体培养”，王俐等，云柠农业大学学报，第20卷第3期，第446-447页)
对比例2：采用《滇丁香的组培快繁方法》(申请号：201410327388.6)，将该方法中滇丁香替换为鸡冠滇丁香。即将鸡冠滇丁香枝条剪去叶片，切成1㎝左右的带芽茎段，经自来水冲洗干净后，先用质量浓度为2％的次氯酸钠溶液浸泡5分钟，以无菌水冲洗3次，再用质量浓度为0.1％的升汞溶液浸泡10分钟，以无菌水冲洗4次，然后用无菌滤纸吸干表面水分，接种于MS+6-BA 0.1mg/L+NAA0.01mg/L+蔗糖30g/L的培养基上，进行芽的分化；将分化芽切成带腋芽的的茎段，接种于MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.02mg/L+蔗糖30g/L的培养基中进行增殖培养；再将增殖培养出的丛生芽接种于1/4MS+IBA 0.2mg/L+蔗糖20g/L的培养基上，进行生根培养。其中，pH＝5.8，培养温度25±2℃、光照时间12h/d、光照强度40μmol/m2·s。
将实施例1～3以及对比例1、2所得鸡冠滇丁香的移栽苗以水洗净根部，再移栽于经过消毒的砂质壤土中，保持湿度在70～80％，温度20～22℃，加盖遮阳网并适时浇水，观察小苗的成活情况。

Claims (1)

1.一种鸡冠滇丁香的组培快繁方法，其特征在于经过下列步骤：
A、将野生的鸡冠滇丁香蒴果用水洗净后，移至超净工作台中，在无菌条件下用体积浓度为75％酒精浸泡30s，迅速用无菌水冲洗4次，再用质量浓度为0.5％的升汞溶液浸泡15分钟，以无菌水冲洗6次，然后用无菌滤纸吸干表面水分，用解剖刀切开蒴果取种子，再将种子接入下列初代培养基中：
MS
蔗糖 35g/L，
在温度为30℃、光照时间为10h/d、光照强度为45μmol/m2·s的条件下进行培养直至小苗高2～3㎝；在此条件下培育至10天左右种子开始萌发，至55天小苗即可长高2.61㎝；
B、将步骤A培养出的小苗剪下，切成带腋芽的茎段接种于下列增殖培养基中：
MS
6-BA 1.5mg/L
NAA 0.15mg/L
蔗糖 35g/L，
在温度为30℃、光照时间为10h/d、光照强度为45μmol/m2·s的条件下进行增殖培养40天，再转入新的与上述增殖培养基相同的培养基中，按相同培养条件继续培养一次，得丛生芽；平均每个外植体得丛生芽4.1个，芽长3.27cm；
C、将步骤B所得丛生芽剪下，接种于下列生根培养基中：
1/4MS
IBA 1.2mg/L
蔗糖 20g/L，
在温度为30℃、光照时间为10h/d、光照强度为45μmo/m2·s的条件下进行培养25天，得生根苗；根率达100％，平均生根9.1条，根长0.94㎝；
D、将步骤C所得生根苗移至湿度为80％的炼苗棚中，揭盖炼苗4天，取出生根苗，洗去根部培养基，移栽到经900倍甲基托布津消毒的营养袋中，于湿度为80％的同样条件下培养，1周后分多次除去遮阴物逐步增加光照强度用以降低湿度，到1个月时完全去除遮阴物裸露于阳光下，即得鸡冠滇丁香的移栽苗。
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