CN104041417A

CN104041417A - 一种巴戟天组织培养育苗方法

Info

Publication number: CN104041417A
Application number: CN201410326231.1A
Authority: CN
Inventors: 黄振忠
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2014-07-10
Filing date: 2014-07-10
Publication date: 2014-09-17

Abstract

本发明针对巴戟天人工繁育难度大，成苗率低的问题，提供一种组织培养育苗方法，具体包括采种、培养无菌苗、诱导培养基、诱导丛生芽、丛生芽继代增殖、诱导生根、试管苗的移栽等具体步骤，具有取材方便，丛生芽诱导率达50%～80%，成苗达85%以上，能保持巴戟天药用成分，移栽后生长快，可以满足人工大面积栽培对巴戟天苗的需要的有益效果。

Description

一种巴戟天组织培养育苗方法

技术领域

本发明涉及中草药材栽培技术，具体涉及一种巴戟天育苗的方法，尤其是巴戟天的组织培养育苗方法，属于中药材栽培技术领域。

背景技术

巴戟天（学名：Morinda officinalis How），为双子叶植物茜草科（Rubiaceae），缠绕藤本，叶对生，膜质，长圆形，长3～13cm，宽1.5～5cm，前端短渐尖，基部钝形或圆形，主要分布于广东、广西，属药用植物。

巴戟天的药用部位是根，根呈扁圆柱形，略弯曲，主治阳痿遗精、宫冷不孕、月经不调、少腹冷痛、风湿痹痛、筋骨痿软。

除了作为传统的中药材使用外，医药工业还以巴戟天作为原料，大量研制开发用于补肾壮阳，强筋骨的中成药产品：如人参鹿茸丸、全鹿大补丸、杜仲地黄丸、还少丸、龟鹿滋肾丸、参茸丸、安肾丸、固本丸等，因此巴戟天的需求量越来越大，年需求量超过60万公斤，并以每年10%—15%的速率增长，但巴戟天的地域分布范围相当有限，在自然条件下，巴戟天开花结荚期的病虫害严重、种子成熟时容易自然脱落，因此自然繁殖系数极低，且为了满足市场需求，获得经济利益，人们大量采挖野生巴戟天资源，致使野生巴戟天资源濒临灭绝。

为满足需要，人们不得不发展人工栽培技术，而开展巴戟天人工栽培，首先要解决巴戟天育苗问题。而巴戟天不仅自然繁殖系数低，通过采收种子进行人工繁殖难度也很大，成苗率不到20%，几乎失败。

发明内容

发明目的：本发明的目的是针对现有技术中巴戟天人工繁育难度大，成苗率低的问题，提供一种组织培养育苗方法，提高巴戟天育苗成苗率，而且能保持巴戟天药用成分，移栽后生长快，可大面积进行巴戟天人工栽培。

技术方案：本发明所述的一种巴戟天组织培养育苗方法，具体包括以下步骤：

1. 采种，选健壮、无病虫害的野生巴戟天植株作采种母株，每年霜降节气过后，种子成熟，即可采种。

2.无菌苗的培养，将巴戟天种子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分钟，在超净工作台上用无菌水浸洗5次，每次浸洗3分钟，然后将种子播种于培养基，在室内自然散射光照下培养。

3.诱导培养基，以MS为基本培养基，加入不同浓度的植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），苄基嘌呤（BA）浓度为1.0～2.5mg/L，优选为2.0mg/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.1～0.3mg/L，优选为0.2mg/L，同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2。

4.丛生芽诱导，当步骤2培养的无菌苗长至5～6厘米后，切取上部2.6～2.9厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养28天后即有丛生芽形成。

5.丛生芽继代增殖，丛生芽诱导50天后，平均高达3.5～4.5厘米时，将丛生芽切成3芽一簇，转至另一诱导过的培养基，25天～30天后，每簇增殖至45～50个丛生芽。

6.诱导生根，当继代增殖的丛生芽有70%长至3～4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，18天后基部切口开始分化出根。

7.试管苗的移栽，将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3～4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75%～80%遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常规管理。

有益效果：本发明与现有技术相比，其有益效果是：

本发明的巴戟天育苗方法，取材方便，丛生芽诱导率达50%～80%，成苗达85%以上，可以满足人工大量栽培的需要，而且经过薄层色谱技术鉴定，本方法培养出的试管苗具有生物合成药用有效成分甲基异茜草素、大黄素甲醚、水晶兰甙和四乙酰车叶草甙的能力。

具体实施方式

下面结合具体实施事例对本发明技术方案进行详细说明。

实施例1：一种巴戟天组织培养育苗，其具体步骤如下：

1. 采种，选健壮、无病虫害的野生巴戟天植株作采种母株，每年霜降节气过后，种子成熟，即可采种；

2.无菌苗的培养，将巴戟天种子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分钟，在超净工作台上用无菌水浸洗5次，每次浸洗3分钟，然后将种子播种于培养基，在室内自然散射光照下培养；

3.诱导培养基，以MS为基本培养基，加入植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），苄基嘌呤（BA）浓度为1.0/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.1mg/L，同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2；

4.丛生芽诱导，当步骤2培养的无菌苗长至5～6厘米后，切取上部2.6～2.9厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养28天后即有丛生芽形成，丛生芽诱导率为50%；

5.丛生芽继代增殖，丛生芽诱导50天后，平均高达3.5～4.5厘米时，将丛生芽切成3芽一簇，转至另一诱导过的培养基，25天～30天后，每簇增殖至45～50个丛生芽；

6.诱导生根，当继代增殖的丛生芽有70%长至3～4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，18天后基部切口开始分化出根；

实施例2：一种巴戟天组织培养育苗，其具体步骤如下：

3.诱导培养基，以MS为基本培养基，加入不同浓度的植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），苄基嘌呤（BA）浓度为2.0mg/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.2mg/L，同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2；

4.丛生芽诱导，当步骤2培养的无菌苗长至5～6厘米后，切取上部2.6～2.9厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养28天后即有丛生芽形成，丛生芽诱导率为85%；

实施例3：一种巴戟天组织培养育苗，其具体步骤如下：

3.诱导培养基，以MS为基本培养基，加入不同浓度的植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），苄基嘌呤（BA）浓度为2.5mg/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.3mg/L，同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2；

4.丛生芽诱导，当步骤2培养的无菌苗长至5～6厘米后，切取上部2.6～2.9厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养28天后即有丛生芽形成，丛生芽诱导率为67%；

Claims

1.一种巴戟天组织培养育苗方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）采种，选健壮、无病虫害的野生巴戟天植株作采种母株，每年霜降节气过后，种子成熟，即可采种；

（2）无菌苗的培养，将巴戟天种子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒，后在超净工作台上用无菌水浸洗5次，每次浸洗3分钟，然后将种子播种于培养基，在室内自然散射光照下培养；

（3）诱导培养基，以MS为基本培养基，加入植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2；

（4）丛生芽诱导，当无菌苗长至5～6厘米后，切取上部2.6～2.9厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养丛生芽；

（5）丛生芽继代增殖，丛生芽诱导后，平均高达3.5～4.5厘米时，将丛生芽切成3芽一簇，转至另一诱导过的培养基进行继代增殖；

（6）诱导生根，当继代增殖的丛生芽有70%长至3～4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根；

（7）试管苗的移栽，将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3～4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75%～80%遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常规管理。

2.根据权利要求1所述的巴戟天组织培养育苗方法，其特征在于所述的步骤（2）巴戟天种子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒的时间为15分钟。

3.根据权利要求1所述的巴戟天组织培养育苗方法，其特征在于所述的步骤（3）的植物激素苄基嘌呤（BA）浓度为1.0～2.5mg/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.1～0.3mg/L。