CN103503776A - 一种山豆根组织培养育苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明针对山豆根人工繁育难度大，成苗率低的问题，提供一种组织培养育苗方法，具体包括采种、培养无菌苗、诱导培养基、诱导丛生芽、丛生芽继代增殖、诱导生根、试管苗的移栽等具体步骤，具有取材方便，丛生芽诱导率达50%～80%，成苗达85%以上，可以满足人工大面积栽培对山豆根苗的需要的有益效果，而且经过薄层色谱技术鉴定，培养出的试管苗具有生物合成药用有效成分苦参碱和氧化苦参碱的能力。
Description
技术领域
本发明涉及中草药材栽培技术，具体涉及一种山豆根育苗的方法，尤其是山豆根的组织培养育苗方法，属于中药材栽培技术领域。
背景技术
山豆根，拉丁名为：Radix Sophorae Tonkinensis，也叫广豆根、南豆根，为双子叶植物纲豆科植物越南槐，属于野生药材，药用部位为根及根茎，秋季采挖，具有清热解毒，消肿止痛的功能，用于治疗咽喉肿痛、齿龈肿痛、喘满热咳、肝炎、便秘、黄疸、下痢、疥癣及蚊、虫叮咬等，植物形态为灌木，高1～2米，野生山豆根生于石灰岩山地或岩石缝中，主产广西，云南和贵州也有分布，但产量较小。
山豆根的药用部位是根系和根茎，除了作为传统的中药材使用外，医药工业还以山豆根作为原料，大量研制开发治疗肝炎的针剂、咽喉肿痛的片剂以及抗肿的中成药，因此山豆根的需求量越来越大，但山豆根的地域分布范围相当有限，常零星生长于石山岩缝之中，在自然条件下，山豆根开花结荚期的病虫害严重、种子成熟时容易自然脱落，因此自然繁殖系数极低，且为了满足市场需求，获得经济利益，人们大量采挖野生山豆根资源，致使野生山豆根资源濒临灭绝，为满足需要，人们不得不发展人工栽培技术，而开展山豆根人工栽培，首先要解决山豆根育苗问题。而山豆根不仅自然繁殖系数低，通过采收种子进行人工繁殖难度也很大，成苗率不到20%，几乎失败。
发明内容
发明目的：本发明的目的是针对现有技术中山豆根人工繁育难度大，成苗率低的问题，提供一种组织培养育苗方法，提高山豆根育苗成苗率，而且能保持山豆根药用成分，移栽后生长快，可大面积进行山豆根人工栽培。
技术方案：本发明所述的一种山豆根组织培养育苗方法，具体包括以下步骤：
1. 采种，选健壮、无病虫害的野生山豆根植株作采种母株，每年霜降节气过后，种子成熟，即可采种；
2.无菌苗的培养，将山豆根种子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分钟，在超净工作台上用无菌水浸洗5次，每次浸洗3分钟，然后将种子播种于培养基，在室内自然散射光照下培养；
3.诱导培养基，以MS为基本培养基，加入不同浓度的植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），苄基嘌呤（BA）浓度为1.0～2.5mg/L，优选为2.0mg/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.1～0.3mg/L，优选为0.2mg/L，同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2；
4.丛生芽诱导，当步骤2培养的无菌苗长至5～6厘米后，切取上部2.6～2.9厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养28天后即有丛生芽形成；
5.丛生芽继代增殖，丛生芽诱导50天后，平均高达3.5～4.5厘米时，将丛生芽切成3芽一簇，转至另一诱导过的培养基，25天～30天后，每簇增殖至45～50个丛生芽；
6.诱导生根，当继代增殖的丛生芽有70%长至3～4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，18天后基部切口开始分化出根；
7.试管苗的移栽，将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3～4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75%～80%遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常规管理。
有益效果：本发明与现有技术相比，其有益效果是：
本发明的山豆根育苗方法，取材方便，丛生芽诱导率达50%～80%，成苗达85%以上，可以满足人工大量栽培的需要，而且经过薄层色谱技术鉴定，本方法培养出的试管苗具有生物合成药用有效成分苦参碱和氧化苦参碱的能力。
具体实施方式
下面结合具体实施事例对本发明技术方案进行详细说明。
实施例1：一种山豆根组织培养育苗，其具体步骤如下：
1. 采种，选健壮、无病虫害的野生山豆根植株作采种母株，每年霜降节气过后，种子成熟，即可采种；
2.无菌苗的培养，将山豆根种子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分钟，在超净工作台上用无菌水浸洗5次，每次浸洗3分钟，然后将种子播种于培养基，在室内自然散射光照下培养；
3.诱导培养基，以MS为基本培养基，加入植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），苄基嘌呤（BA）浓度为1.0/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.1mg/L，同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2；
4.丛生芽诱导，当步骤2培养的无菌苗长至5～6厘米后，切取上部2.6～2.9厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养28天后即有丛生芽形成，丛生芽诱导率为50%；
5.丛生芽继代增殖，丛生芽诱导50天后，平均高达3.5～4.5厘米时，将丛生芽切成3芽一簇，转至另一诱导过的培养基，25天～30天后，每簇增殖至45～50个丛生芽；
6.诱导生根，当继代增殖的丛生芽有70%长至3～4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，18天后基部切口开始分化出根；
7.试管苗的移栽，将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3～4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75%～80%遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常规管理。
实施例2：一种山豆根组织培养育苗，其具体步骤如下：
1. 采种，选健壮、无病虫害的野生山豆根植株作采种母株，每年霜降节气过后，种子成熟，即可采种；
2.无菌苗的培养，将山豆根种子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分钟，在超净工作台上用无菌水浸洗5次，每次浸洗3分钟，然后将种子播种于培养基，在室内自然散射光照下培养；
3.诱导培养基，以MS为基本培养基，加入不同浓度的植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），苄基嘌呤（BA）浓度为2.0mg/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.2mg/L，同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2；
4.丛生芽诱导，当步骤2培养的无菌苗长至5～6厘米后，切取上部2.6～2.9厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养28天后即有丛生芽形成，丛生芽诱导率为85%；
5.丛生芽继代增殖，丛生芽诱导50天后，平均高达3.5～4.5厘米时，将丛生芽切成3芽一簇，转至另一诱导过的培养基，25天～30天后，每簇增殖至45～50个丛生芽；
6.诱导生根，当继代增殖的丛生芽有70%长至3～4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，18天后基部切口开始分化出根；
7.试管苗的移栽，将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3～4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75%～80%遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常规管理。
实施例3：一种山豆根组织培养育苗，其具体步骤如下：
1. 采种，选健壮、无病虫害的野生山豆根植株作采种母株，每年霜降节气过后，种子成熟，即可采种；
2.无菌苗的培养，将山豆根种子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分钟，在超净工作台上用无菌水浸洗5次，每次浸洗3分钟，然后将种子播种于培养基，在室内自然散射光照下培养；
3.诱导培养基，以MS为基本培养基，加入不同浓度的植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），苄基嘌呤（BA）浓度为2.5mg/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.3mg/L，同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2；
4.丛生芽诱导，当步骤2培养的无菌苗长至5～6厘米后，切取上部2.6～2.9厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养28天后即有丛生芽形成，丛生芽诱导率为67%；
5.丛生芽继代增殖，丛生芽诱导50天后，平均高达3.5～4.5厘米时，将丛生芽切成3芽一簇，转至另一诱导过的培养基，25天～30天后，每簇增殖至45～50个丛生芽；
6.诱导生根，当继代增殖的丛生芽有70%长至3～4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，18天后基部切口开始分化出根；
7.试管苗的移栽，将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3～4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75%～80%遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常规管理。
Claims (3)
1.一种山豆根组织培养育苗方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）采种，选健壮、无病虫害的野生山豆根植株作采种母株，每年霜降节气过后，种子成熟，即可采种；
（2）无菌苗的培养，将山豆根种子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒，后在超净工作台上用无菌水浸洗5次，每次浸洗3分钟，然后将种子播种于培养基，在室内自然散射光照下培养；
（3）诱导培养基，以MS为基本培养基，加入植物激素进行诱导培养，植物激素用苄基嘌呤（BA）和奈乙酸（NAA），同时加入2.5%的蔗糖和0.7%的琼脂，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2；
（4）丛生芽诱导，当无菌苗长至5～6厘米后，切取上部2.6～2.9厘米长的顶芽茎段，接入诱导过的培养基培养丛生芽；
（5）丛生芽继代增殖，丛生芽诱导后，平均高达3.5～4.5厘米时，将丛生芽切成3芽一簇，转至另一诱导过的培养基进行继代增殖；
（6）诱导生根，当继代增殖的丛生芽有70%长至3～4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根；
（7）试管苗的移栽，将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3～4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75%～80%遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常规管理。
2.根据权利要求1所述的山豆根组织培养育苗方法，其特征在于所述的步骤（2）山豆根种子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒的时间为15分钟。
3.根据权利要求1所述的山豆根组织培养育苗方法，其特征在于所述的步骤（3）的植物激素苄基嘌呤（BA）浓度为1.0～2.5mg/L，奈乙酸（NAA）浓度为0.1～0.3mg/L。
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