CN112806265B - 一种以叶片为外植体的瑶山苣苔组织培养方法 - Google Patents

一种以叶片为外植体的瑶山苣苔组织培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种以叶片为外植体的瑶山苣苔组织培养方法。本发明以人工消毒处理获得的瑶山苣苔细嫩叶片为外植体进行组织培养，取材方便，由于采用独特的培养基和培养方法，具有成功率高、繁殖效率高、种苗品质好等特点。

Description

一种以叶片为外植体的瑶山苣苔组织培养方法
技术领域
本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种以叶片为外植体的瑶山苣苔组织培养方法。
背景技术
瑶山苣苔(Dayaoshania cotinifolia)是苦苣苔科瑶山苣苔属多年生常绿草本,于1992年就被列为国家一级保护濒危植物，2012年被列为国家极小种群野生植物。其濒危的主要原因是分布区极其狭小、自然条件下难以结实、种子萌发率较低等内在原因和生境遭到破坏等外在因素。对瑶山苣苔进行种质资源保护和观赏应用均需要大量的种苗。
发明内容
本发明的目的是提供一种以叶片为外植体的瑶山苣苔组织培养方法。本发明以经过杀菌培养的瑶山苣苔细嫩叶片为外植体，利用组织培养技术能进行瑶山苣苔种苗的规模化繁殖。
本发明的以叶片为外植体的瑶山苣苔组织培养方法，包括以下步骤：
a.洗净瑶山苣苔根部的泥土，用25％多菌灵可湿性粉剂500-800倍液浸泡20-40分钟，栽植于灭菌的的混合基质中，然后用25％多菌灵可湿性粉剂500-800倍液浇透混合基质；
b.培养7天后用72％农用链霉素可溶性粉剂3000-4000倍液浇灌基质一次并喷施叶片，再过7天后用25％多菌灵可湿性粉剂500-800倍液浇透基质并喷施叶片；然后再重复步骤b的前述操作2次，培养至长出细嫩叶片；
c.切取长度1.5-2.5厘米的细嫩叶片，在体积分数75％乙醇水溶液中浸泡10-30秒后，用1.0％有效氯的次氯酸溶液浸泡5-10分钟，无菌水冲洗4-5次，再用0.1％升汞溶液消毒5-10分钟，无菌水冲洗4-5次，切取带叶柄的叶片接种到不定芽诱导培养基，培养获得不定芽；
所述的不定芽诱导培养基，每升由以下成分组成：0.5-1.0mg 6-苄基嘌呤(6-BA)、0.5-1.0mg激动素(KT)、0.1-0.3mg噻苯隆(TDZ)、20-30g蔗糖、6g琼脂，余量为MS培养基，pH5.8-6.0；
d.取不定芽接种在初代增殖培养基上，培养形成丛生芽；将丛生芽接种到丛生芽继代增殖培养基上进行丛生芽的继代增殖；
所述的初代增殖培养基，每升由以下成分组成：0.5-1.0mg 6-苄基嘌呤(6-BA)、0.5-1.0mg激动素(KT)、0.5-1.0mg噻苯隆(TDZ)、20-30g蔗糖、6g琼脂，余量为MS培养基，pH5.8-6.0；
所述的丛生芽继代增殖培养基，每升由以下成分组成：0.5-1.0mg 6-苄基嘌呤(6-BA)、0.5-1.0mg激动素(KT)、0.5-1.0mg萘乙酸(NAA)、20-30g蔗糖、6g琼脂，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；
e.切下继代增殖的2-3厘米高的丛生芽切成单芽接种到生根培养基培养生根苗；
所述的生根培养基，每升由以下成分组成：0.5-1.0mg吲哚丁酸(IBA)、0.5-1.0mg萘乙酸(NAA)、20-30g蔗糖、6g琼脂，余量为1/2MS培养基，pH 5.8-6.0；
f.待生根苗长至4-5厘米高时，炼苗，移栽。
所述的步骤a的混合基质为将泥炭土、蛭石、珍珠岩以体积比1-3:1-3:1混合得到的。
所述的步骤b-e的培养条件为温度24℃-28℃，光照强度1500-2000lx，光照12-16小时/天。
所述的步骤f的移栽，基质为将泥炭土、蛭石、珍珠岩以体积比1-3:1-3:1混合得到的栽培基质。
所述的步骤f的移栽，培养条件为温度20℃-25℃，相对湿度75％-85％。
目前，国内虽已有瑶山苣苔组织培养的文献报道，但均采用种子来源的外植体，而瑶山苣苔的种子较难获得。
本发明以人工消毒处理获得的瑶山苣苔细嫩叶片为外植体进行组织培养，取材方便，由于采用独特的培养基和培养方法，具有成功率高、繁殖效率高、种苗品质好等特点。实施该发明只需有简单的植物组织培养设备即可进行。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1
1.外植体的消毒方法：由于瑶山苣苔(Dayaoshania cotinifolia)对生长环境非常苛刻，且叶片具密集的绒毛，组织培养时，污染率高，难以获得消毒成功的外植体。将从原产地引种的瑶山苣苔洗净根部的泥土，用25％多菌灵可湿性粉剂500倍液浸泡40分钟，栽植于经过高温高压灭菌的的混合基质中，所述的混合基质由泥炭土、蛭石和珍株岩以体积比1:1:1混匀得到。栽培后用25％多菌灵可湿性粉剂500倍液浇透放入温度25℃、相对湿度60％的人工气候箱中。7天后用72％农用链霉素可溶性粉剂3000倍液浇灌一次并喷施叶片，再过7天用25％多菌灵可湿性粉剂500倍液浇透并喷施叶片。此后重复该过程2次。约42天时取新长出的细嫩叶片用于组织培养。
采用体积分数75％乙醇水溶液消过毒的解剖刀切取长度1.5厘米的细嫩叶片，在体积分数75％乙醇水溶液中浸泡10秒后，用1.0％有效氯的次氯酸溶液浸泡10分钟，无菌水冲洗5次，再用0.1％升汞溶液消毒5分钟，无菌水冲洗5次，切取1厘米左右带叶柄的叶片接种到不定芽诱导培养基，消毒成功率40％。培养温度24℃，光照强度1500lx，光照16小时/天。
所述的不定芽诱导培养基，每升由以下成分组成：0.5mg 6-苄基嘌呤(6-BA)、0.5mg激动素(KT)、0.1mg噻苯隆(TDZ)、20g蔗糖、6g琼脂，余量为MS培养基，pH 5.8。
2.不定芽诱导和继代增殖：瑶山苣苔的叶片在上述不定芽诱导培养基上，消毒成功的叶片外植体在叶片基部和叶柄连接处会形成不定芽，取不定芽接种在初代增殖培养基上，1个月左右能增殖3倍，形成的丛生芽密集矮小。随后将小的丛生芽接种到丛生芽继代增殖培养基上进行丛生芽的继代增殖，在30天的继代周期内，增殖系数为3。培养温度24℃，光照强度1500lx，光照16小时/天。
所述的初代增殖培养基，每升由以下成分组成：0.5mg 6-苄基嘌呤(6-BA)、0.5mg激动素(KT)、0.1mg噻苯隆(TDZ)、20g蔗糖、6g琼脂，余量为MS培养基，pH 5.8。
所述的丛生芽继代增殖培养基，每升由以下成分组成：0.5mg 6-苄基嘌呤(6-BA)、0.5mg激动素(KT)、0.1mg萘乙酸(NAA)、20g蔗糖、6g琼脂，余量为MS培养基，pH 5.8。
3.生根壮苗培养：当芽高2厘米时，切下单芽接种到生根培养基，培养30天时生根率可达100％，苗高4厘米，每株苗有根数4条。培养温度24℃，光照强度1500lx，光照16小时/天。
所述的生根培养基，每升由以下成分组成：0.5mg吲哚丁酸(IBA)、0.5mg萘乙酸(NAA)、20g蔗糖、6g琼脂，余量为1/2MS培养基，pH 5.8。
4.试管苗移栽：取4厘米高试管苗，在自然光照下炼苗7天。然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入将泥炭土、蛭石、珍珠岩以体积比1:1:1混合得到的栽培基质中放控温控湿温室。温度20℃，相对湿度75％，移栽成活率可达80％。
实施例2
1.外植体的消毒方法：先将从原产地引种的瑶山苣苔洗净根部的泥土，用25％多菌灵可湿性粉剂600倍液浸泡30分钟，栽植于经过高温高压灭菌的的混合基质中，所述的混合基质由泥炭土、蛭石和珍株岩以体积比2:2:1混匀得到。栽培后用25％多菌灵可湿性粉剂600倍液浇透放入温度25℃、相对湿度65％的人工气候箱中。7天后用72％农用链霉素可溶性粉剂3500倍液浇灌一次并喷施叶片，再过7天用25％多菌灵可湿性粉剂600倍液浇透并喷施叶片。此后重复该过程2次。约42天时取新长出的细嫩叶片用于组织培养。
采用体积分数75％乙醇水溶液消过毒的解剖刀切取长度2.0厘米的细嫩叶片，在体积分数75％乙醇水溶液中浸泡20秒后，用1.0％有效氯的次氯酸溶液浸泡8分钟，无菌水冲洗5次，再用0.1％升汞溶液消毒8分钟，无菌水冲洗4次，切取1厘米左右带叶柄的叶片接种到不定芽诱导培养基，消毒成功率50％。培养温度26℃，光照强度1800lx，光照14小时/天。
所述的不定芽诱导培养基，每升由以下成分组成：0.7mg 6-苄基嘌呤(6-BA)、0.8mg激动素(KT)、0.2mg噻苯隆(TDZ)、25g蔗糖、6g琼脂，余量为MS培养基，pH 5.9。
2.不定芽诱导和继代增殖：瑶山苣苔的叶片较难诱导出不定芽，在上述培养基上，消毒成功的叶片外植体在叶片基部和叶柄连接处会形成不定芽，取不定芽接种在初代增殖培养基，1个月左右能增殖4倍，形成的丛生芽密集矮小。随后将小的丛生芽接种到丛生芽继代增殖培养基上能进行丛生芽的继代增殖，在30天的继代周期内，增殖系数为3.5。培养温度26℃，光照强度1800lx，光照14小时/天。
所述的初代增殖培养基，每升由以下成分组成：0.7mg 6-苄基嘌呤(6-BA)、0.8mg激动素(KT)、0.2mg噻苯隆(TDZ)、25g蔗糖、6g琼脂，余量为MS培养基，pH 5.9。
所述的丛生芽继代增殖培养基，每升由以下成分组成：0.7mg 6-苄基嘌呤(6-BA)、0.8mg激动素(KT)、0.8mg萘乙酸(NAA)、25g蔗糖、6g琼脂，余量为MS培养基，pH 5.9。
3.生根壮苗培养：当芽高2.5厘米时，切下单芽接种到生根培养基，培养30天时生根率可达100％，苗高4.5厘米，每株苗有根数5条。培养温度26℃，光照强度1800lx，光照14小时/天。
所述的生根培养基，每升由以下成分组成：0.7mg吲哚丁酸(IBA)、0.8mg萘乙酸(NAA)、25g蔗糖、6g琼脂，余量为1/2MS培养基，pH 5.9。
4.试管苗移栽：取4.5厘米高试管苗，在自然光照下炼苗8天。然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入将泥炭土、蛭石、珍珠岩以体积比2:2:1混合得到的栽培基质中放控温控湿温室。温度23℃，相对湿度80％，移栽成活率可达85％。
实施例3
1.外植体的消毒方法：先将从原产地引种的瑶山苣苔洗净根部的泥土，用25％多菌灵可湿性粉剂800倍液浸泡20分钟，栽植于经过高温高压灭菌的的混合基质中，所述的混合基质由泥炭土、蛭石和珍株岩以体积比3:3:1混匀得到。栽培后用25％多菌灵可湿性粉剂3800倍液浇透放入温度25℃、相对湿度70％的人工气候箱中。7天后用72％农用链霉素可溶性粉剂4000倍液浇灌一次并喷施叶片，再过7天用25％多菌灵可湿性粉剂800倍液浇透并喷施叶片。此后重复该过程2次。约42天时取新长出的细嫩叶片用于组织培养。
采用体积分数75％乙醇水溶液消过毒的解剖刀切取长度2.5厘米的细嫩叶片，在体积分数75％乙醇水溶液中浸泡30秒后，用1.0％有效氯的次氯酸溶液浸泡5分钟，无菌水冲洗5次，再用0.1％升汞溶液消毒10分钟，无菌水冲洗5次，切取1厘米左右带叶柄的叶片接种到不定芽诱导培养基，消毒成功率60％。培养温度28℃，光照强度2000lx，光照12小时/天。
所述的不定芽诱导培养基，每升由以下成分组成：1.0mg 6-苄基嘌呤(6-BA)、1.0mg激动素(KT)、0.3mg噻苯隆(TDZ)、30g蔗糖、6g琼脂，余量为MS培养基，pH 6.0。
2.不定芽诱导和继代增殖：瑶山苣苔的叶片较难诱导出不定芽，在上述培养基上，消毒成功的叶片外植体在叶片基部和叶柄连接处会形成不定芽，取不定芽接种在初代增殖培养基上，1个月左右能增殖5倍，形成的丛生芽密集矮小。随后将小的丛生芽接种到丛生芽继代增殖培养基上能进行丛生芽的继代增殖，在30天的继代周期内，增殖系数为4。培养温度28℃，光照强度2000lx，光照12小时/天。
所述的初代增殖培养基，每升由以下成分组成：1.0mg 6-苄基嘌呤(6-BA)、1.0mg激动素(KT)、0.3mg噻苯隆(TDZ)、30g蔗糖、6g琼脂，余量为MS培养基，pH 6。
所述的丛生芽继代增殖培养基，每升由以下成分组成：1.0mg 6-苄基嘌呤(6-BA)、1.0mg激动素(KT)、1.0mg萘乙酸(NAA)、30g蔗糖、6g琼脂，余量为MS培养基，pH 6。
3.生根壮苗培养：当芽高3厘米时，切下单芽接种到生根培养基，培养30天时生根率可达100％，苗高5厘米，每株苗有根数6条。培养温度28℃，光照强度2000lx，光照12小时/天。
所述的生根培养基，每升由以下成分组成：1.0mg吲哚丁酸(IBA)、1.0mg萘乙酸(NAA)、30g蔗糖、6g琼脂，余量为1/2MS培养基，pH 6.0。
4.试管苗移栽：取5厘米高试管苗，在自然光照下炼苗10天。然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入将泥炭土、蛭石、珍珠岩以体积比3:3:1混合得到的栽培基质中放控温控湿温室。温度25℃，相对湿度85％，移栽成活率可达90％。

Claims (5)

1.一种以叶片为外植体的瑶山苣苔组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
a. 洗净瑶山苣苔根部的泥土，用25%多菌灵可湿性粉剂500-800倍稀释液浸泡20-40分钟，栽植于灭菌的混合基质中，然后用25%多菌灵可湿性粉剂500-800倍稀释液浇透混合基质；
b. 培养7天后用72%农用链霉素可溶性粉剂3000-4000倍稀释液浇灌基质一次并喷施叶片，再过7天后用25%多菌灵可湿性粉剂500-800倍稀释液浇透基质并喷施叶片；然后再重复步骤b的前述操作2次，培养至长出细嫩叶片；
c. 切取长度1.5-2.5厘米的细嫩叶片，在体积分数75%乙醇水溶液中浸泡10-30秒后，用1.0%有效氯的次氯酸溶液浸泡5-10分钟，无菌水冲洗4-5次，再用0.1%升汞溶液消毒5-10分钟，无菌水冲洗4-5次，切取带叶柄的叶片接种到不定芽诱导培养基，培养获得不定芽；
所述的不定芽诱导培养基，每升由以下成分组成：0.5-1.0 mg 6-BA、0.5-1.0 mg KT、0.1-0.3 mg TDZ、20-30 g蔗糖、6 g琼脂，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；
d. 取不定芽接种在初代增殖培养基上，培养形成丛生芽；将丛生芽接种到丛生芽继代增殖培养基上进行丛生芽的继代增殖；
所述的初代增殖培养基，每升由以下成分组成：0.5-1.0 mg 6-BA、0.5-1.0 mg KT、0.5-1.0 mg TDZ、20-30 g蔗糖、6 g琼脂，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；
所述的丛生芽继代增殖培养基，每升由以下成分组成：0.5-1.0 mg 6-BA、0.5-1.0 mgKT、0.5-1.0 mg NAA、20-30 g蔗糖、6 g琼脂，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；
e. 切下继代增殖的2-3厘米高的丛生芽切成单芽接种到生根培养基培养生根苗；
所述的生根培养基，每升由以下成分组成：0.5-1.0 mg IBA、0.5-1.0 mg NAA、20-30 g蔗糖、6 g琼脂，余量为1/2MS培养基，pH 5.8-6.0；f. 待生根苗长至4-5厘米高时，炼苗，移栽。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤a的混合基质为将泥炭土、蛭石、珍珠岩以体积比1-3 : 1-3 : 1混合得到的。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤b-e的培养条件为温度24℃-28℃，光照强度1500-2000lx，光照12-16小时/天。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤f的移栽，基质为将泥炭土、蛭石、珍珠岩以体积比1-3 : 1-3 : 1混合得到的栽培基质。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤f的移栽，培养条件为温度20℃-25℃，相对湿度75%-85%。
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CN115633637B (zh) * 2022-09-21 2023-11-07 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 一种心叶马铃苣苔的组织培养方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100559934C (zh) * 2007-09-17 2009-11-18 中国科学院华南植物园 一种报春苣苔(Primulina tabacum Hance)组织培养繁殖及野外栽培方法
CN101965800B (zh) * 2010-11-19 2012-07-04 中国科学院华南植物园 一种单座苣苔的组织培养繁殖方法
CN102144556A (zh) * 2011-01-29 2011-08-10 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 瑶山苣苔组织培养及快速繁殖的方法
CN103380729B (zh) * 2013-07-19 2015-09-02 中国科学院华南植物园 一种双片苣苔组织培养及快速繁殖的方法
CN106171992B (zh) * 2016-07-15 2019-03-15 四川七彩林业开发有限公司 一种苦苣苔科植物一步成苗组培快繁方法
CN106106166B (zh) * 2016-07-15 2019-03-15 四川七彩林业开发有限公司 一种苦苣苔科植物组织培养方法
CN106417015B (zh) * 2016-09-13 2018-09-28 中国科学院华南植物园 一种怀集报春苣苔组织培养和快速繁殖方法

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