CN104126506B - 一种美国红火箭紫薇的组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种美国红火箭紫薇的组织培养方法，包括消毒灭菌、初代培养、继代培养、生根培养和炼苗移栽。以美国紫薇当年生嫩枝条为外植体，经过无菌接种于诱芽培养基上，形成丛生芽后，利用丛生芽再进行继代培养，然后转接到生根培养基上进行生根诱导形成生根苗，生根苗经过炼苗驯化得到再生植株。本发明的方法使美国紫薇的繁殖更为容易，打破了季节与气候的限制，繁殖周期缩短，再生植株成活率得到提高。
Description
技术领域
本发明涉及植物无性繁殖领域，具体涉及一种美国红火箭紫薇的组织培养方法。
背景技术
美国红火箭紫薇是紫薇中花色最鲜红的品种之一，花鲜红如国旗，花簇可达24英寸，花量大，花色艳丽，片植的色块开花时一片火海。花在晴热天为猩红色，多云凉爽天花色略淡，可能有白色斑，新叶微红，老叶绿色略带红晕，叶芽在开花前为深红色，开花时变成樱桃红。6月初始花，可连续开到霜降，花期进行修剪，可多次开花。适应性广，抗逆性强。适合于孤植、丛植，培植为花篱，可制作盆景和桩景。美国红火箭紫薇的组织培养方法是常用的培育繁殖方法，但是现有的组织培养方法存活率较低，容易受季节限制。
发明内容
发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种美国红火箭紫薇的组织培养方法法。
技术方案：为实现上述目的，本发明提供的一种美国红火箭紫薇的组织培养方法，包括以下步骤：
1）消毒灭菌：选取美国红火箭紫薇当年生嫩枝条，用漂白粉浸泡10分钟后，流水冲洗20分钟，在超净工作台上以75%酒精浸泡30秒钟，再转入0.1%升汞溶液中灭菌10分钟，倒去灭菌液，用预先准备好的无菌水冲洗4～5遍，沥干水后，将消毒后的嫩枝接种到诱芽培养基上；
2）进行接种培养：将选取的外植体切成1~2厘米的小段接种在配置好的MS培养基上，培养25~30天左右，接种培养基成份为：MS基本培养基，附加2,4—D 1.5mg/L＋BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖30g/L＋琼脂5～7g/L，PH值控制在5.5~5.8；
3）继代培养：把切下丛生芽接种在MS+BA1.5mg/L＋NAA 0.2mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂5～7g/L，PH值5.6~5.7，MS培养基经1.1kg/cm2高压消毒15～20分钟，在温度25±2℃，光照强度2000lux，每日光照12小时，至28~32天，小芽基部形成愈伤组织，并形成丛生芽，丛生小芽达到1-2cm。一般第一次继代培养时增殖率2～3倍左右，经2～3次继代培养后增殖倍数可达到4-5倍左右。
4）生根培养：当小苗长至2～3㎝时，转移到生根培养基上培养：生根培养基配方为1/3MS＋NAA0.2mg/L＋IBA0.5mg/L＋0.3%活性炭＋蔗糖20g/L，温度控制在25～28℃，pH控制在5.5~5.7；光照强度为1000lux，每日光照10-12小时。一般15-20天左右可见白色短根形成，经20-25天左右，即可进行炼苗移栽。
5）炼苗和移栽：美国红火箭紫薇组培苗炼苗，先在温度23±2℃之间的温室内拧松瓶盖放置3～5天，然后进行温床过渡移栽。过渡苗床（即温床）建在普通单体的塑料大棚内。移栽的过程中尽量减少伤根，并碰洒1000倍稀释的多菌灵药液。控制温度在20~30度，过渡移栽48~52天，可以上盆移栽。
有益效果：本发明的方法使美国紫薇的繁殖更为容易，打破了季节与气候的限制，繁殖周期缩短，再生植株成活率得到提高，成活率能够达到95%以上。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作更进一步的说明。
一种美国红火箭紫薇的组织培养方法，包括以下步骤：
1）消毒灭菌 ：选取美国红火箭紫薇当年生嫩枝条，用漂白粉浸泡10分钟后，流水冲洗20分钟，在超净工作台上以75%酒精浸泡30秒钟，再转入0.1%升汞溶液中灭菌10分钟，倒去灭菌液，用预先准备好的无菌水冲洗4～5遍，沥干水后，将消毒后的嫩枝接种到诱芽培养基上；
2）进行接种培养：将选取的外植体切成1~2厘米的小段接种在配置好的MS培养基上，培养25~30天左右，接种培养基成份为：MS基本培养基，附加2,4—D 1.5mg/L＋BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖30g/L＋琼脂5～7g/L，PH值5.5左右；
3）继代培养：把切下丛生芽接种在MS+BA1.5mg/L＋NAA 0.2mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂5～7g/L，PH值5.6左右，MS培养基经1.1kg/cm2高压消毒15～20分钟，在温度25±2℃，光照强度2000lux，每日光照12小时，至30天左右，小芽基部形成愈伤组织，并形成丛生芽，丛生小芽达到1-2cm。一般第一次继代培养时增殖率2～3倍左右，经2～3次继代培养后增殖倍数可达到4-5倍左右。
4）生根培养：当小苗长至2～3㎝时，转移到生根培养基上培养：生根培养基配方为1/3MS＋NAA0.2mg/L＋IBA0.5mg/L＋0.3%活性炭＋蔗糖20g/L，温度控制在25～28℃，光照强度为1000lux，每日光照10-12小时。一般15-20天左右可见白色短根形成，经20-25天左右，即可进行炼苗移栽。
5）炼苗和移栽：美国红火箭紫薇组培苗炼苗，先在温度23±2℃之间的温室内拧松瓶盖放置3～5天，然后进行温床过渡移栽。过渡苗床（即温床）建在普通单体的塑料大棚内。移栽的过程中尽量减少伤根，并碰洒1000倍稀释的多菌灵药液。控制温度在20~30度，过渡移栽50天左右，可以上盆移栽。
上述步骤相同，每个阶段的培养基配方如下：
进行接种培养时接种培养基为：MS基本培养基，附加2,4—D 1.5mg/L＋BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖30g/L＋琼脂5g/L，PH值5.5；
继代培养基组分：MS+BA1.5mg/L＋NAA 0.2mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂7g/L，PH值5.6；
生根培养基配方为1/3MS＋NAA0.2mg/L＋IBA0.5mg/L＋0.3%活性炭＋蔗糖20g/L。
选取1000株植株进行组织培养，最终成活978株，成活率达到97.8%。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种美国红火箭紫薇的组织培养方法，其特征在于 ：包括以下步骤 ：
1）消毒灭菌 ：选取美国红火箭紫薇当年生嫩枝条，用漂白粉浸泡 10 分钟后，流水冲洗20 分钟，在超净工作台上以 75% 酒精浸泡 30 秒钟，再转入 0.1% 升汞溶液中灭菌 10分钟，倒去灭菌液，用预先准备好的无菌水冲洗 4 ～ 5 遍，沥干水后，将消毒后的嫩枝接种到诱芽培养基上 ；
2）进行接种培养 ：将选取的外植体切成 1~2 厘米的小段接种在配制好的 MS 培养基上，培养 25~30 天 ；接种培养基成份为 ：MS 基本培养基，附加 2,4—D 1.5mg/L ＋BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+ 蔗糖 30g/L ＋琼脂 5 ～ 7g/L，PH 值 5.5~5.8；
3）继代培养 ：把切下的丛生芽接种在 MS+BA1.5mg/L ＋ NAA 0.2mg/L ＋蔗糖 30g/L＋琼脂5 ～ 7g/L，PH 值 5.6~5.7，MS 培养基经 1.1kg/cm2 高压消毒 15 ～ 20 分钟，在温度 25±2℃，
光照强度 2000lux，每日光照 12 小时，至 28~32 天，小芽基部形成愈伤组织，并形成丛生芽，丛生小芽达到 1-2cm ；
4）生根培养 ：当小苗长至 2 ～ 3 ㎝时，转移到生根培养基上培养，温度控制在 25～28℃，光照强度为 1000lux，每日光照 10-12 小时，经 20-25 天 ；所述生根培养基的配方为 1/3 MS，附加 NAA0.2mg/L ＋ IBA0.5mg/L ＋ 0.3% 活性炭＋蔗糖 20g/L，PH 值为5.5~5.7；
5）炼苗和移栽 ：美国红火箭紫薇组培苗炼苗，先在温度 23±2℃之间的温室内拧松瓶盖放置 3 ～ 5 天，然后进行温床过渡移栽，过渡温床建在普通单体的塑料大棚内，移栽的过程中尽量减少伤根，并喷洒 1000 倍稀释的多菌灵药液，控制温度在 20~30 ℃，过渡移栽48~52 天，上盆移栽。
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