CN107980633A - 西双紫薇的组织培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提出了一种西双紫薇的组织培养方法，包括以下步骤：1)接种枝条的消毒灭菌；2)接种培养：将选取的外植体切成1～2厘米的小段接种在配置好的接种培养基上，培养25～30天；3)继代培养：把切下丛生芽接种继代培养基中进行培养，在温度23～27℃，光照强度2200～2800lux，每日光照10～12小时，至28～32天，小芽基部形成愈伤组织，并形成丛生芽，丛生小芽达到1～2cm；4)生根培养：当小苗长至2～3㎝时，转移到生根培养基上培养，温度控制在25～28℃，光照强度为1200～1500lux，每日光照10～12小时经20～25天；5)炼苗和移栽。该组织培养方法打破了季节与气候的限制，繁殖周期缩短，再生植株成活率得到提高，成活率能够达到95％以上。

Description

西双紫薇的组织培养方法
技术领域
本发明属于植物组培技术领域，具体涉及一种西双紫薇的组织培养方法。
背景技术
西双紫薇，拉丁文名：Lagerstroemia venusta Wall.ex Clarke.千屈菜科、紫薇属乔木，高可达8米；枝无毛或被灰白色柔毛，干燥时灰褐色。叶对生或近对生，纸质，矩圆形或矩圆状椭圆形，顶端钝形，稀近圆形，基部近圆形，两侧常不等，两面无毛，或幼嫩时在下面脉上有小柔毛，雄蕊多数，其余的近相等；子房无毛，球形，花柱长而纤细，柱头头状。蒴果近球形至倒卵形，宿存萼杯状；花期10月，果期11-12月。
由于西双紫薇移栽到中国中部时，观赏效果很好，但是成活率很低。组织培养技术是一种常见的植物快繁手段，对于在自然条件下繁殖困难的种类大多可以通过组培的手段实现快繁，从而使种质保存及生产推广成为可能。
发明内容
本发明提出一种西双紫薇的组织培养方法，该组织培养方法打破了季节与气候的限制，繁殖周期缩短，再生植株成活率得到提高，成活率能够达到95％以上。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种西双紫薇的组织培养方法，包括以下步骤：
1)接种枝条的消毒灭菌：选取西双紫薇当年生嫩枝条，进行消毒，消毒后的嫩枝接种至诱芽培养基上；
2)接种培养：将选取的外植体切成1～2厘米的小段接种在配置好的接种培养基上，培养25～30天；
3)继代培养：把切下丛生芽接种继代培养基中进行培养，在温度23～27℃，光照强度2200～2800lux，每日光照10～12小时，至28～32天，小芽基部形成愈伤组织，并形成丛生芽，丛生小芽达到1～2cm；
4)生根培养：当小苗长至2～3㎝时，转移到生根培养基上培养，温度控制在25～28℃，光照强度为1200～1500lux，每日光照10～12小时经20～25天；
5)炼苗和移栽：西双紫薇组培苗炼苗，先在温度20～25℃之间的温室内拧松瓶盖放置2～4天，然后进行温床过渡移栽，过渡温床建在普通单体的塑料大棚内，移栽的过程中尽量减少伤根，先喷洒多菌灵溶液，然后对根进行用营养液进行喷雾处理，控制温度在20～30度，过渡移栽48～52天，上盆移栽；
其中，所述接种培养培养基的组分为：MS基本培养基+1.5mg/L2,4—D+0.3mg/LNAA+32～38g/L蔗糖+6.5～7.5g/L琼脂+3.2～3.6g/L碳粉；所述继代培养基的组分为：MS基本培养基+0.5mg/L 2,4—D+0.4mg/L NAA+0.2mg/L 6—BA+32～38g/L蔗糖+6.5～7.5g/L琼脂+3.2～3.6g/L碳粉+150～200g/L土豆。
优选地，所述生根培养基的组分为：1/3重量含量的MS基本培养基+0.8mg/L NAA+0.2mg/L IBA+0.25mg/L6—BA+0.3wt％活性炭+22～28g/L蔗糖。
优选地，所述接种培养基的pH值为5.4～5.6，所述继代培养基的pH值为5.5～5.7，所述生根培养基的pH值为5.5～5.7。
优选地，所述营养液的组分为：0.1～0.12wt％NAA、0.15～0.2wt％多效唑、0.03～0.06wt％甘氨酸、0.2～0.3wt％维生素B及0.18～0.36wt％氯化胆碱，余量为水。
优选地，所述步骤1)西双紫薇嫩枝条的消毒方法为：将嫩枝条用漂白粉浸泡5～10分钟后，流水冲洗20～30分钟，在超净工作台上以75％酒精浸泡2～3分钟，取出后用预先准备好的无菌水冲洗4～5遍，沥干水后即可。
本发明的有益效果：
本发明的方法使西双紫薇的繁殖更为容易，打破了季节与气候的限制，繁殖周期缩短，再生植株成活率得到提高，成活率能够达到95％以上。
具体实施方式
实施例1
一种西双紫薇的组织培养方法，包括以下步骤：
1)接种枝条的消毒灭菌：选取西双紫薇当年生嫩枝条，将嫩枝条用漂白粉浸泡5分钟后，流水冲洗20分钟，在超净工作台上以75％酒精浸泡2分钟，取出后用预先准备好的无菌水冲洗5遍，沥干水，消毒后的嫩枝接种至诱芽培养基上；
2)接种培养：将选取的外植体切成1厘米的小段接种在配置好的接种培养基上，培养25天；
3)继代培养：把切下丛生芽接种继代培养基中进行培养，在温度23～27℃，光照强度2500lux，每日光照10小时，至30天，小芽基部形成愈伤组织，并形成丛生芽，丛生小芽达到1～2cm；
4)生根培养：当小苗长至2～3㎝时，转移到生根培养基上培养，温度控制在25～28℃，光照强度为1300lux，每日光照11小时经23天；
5)炼苗和移栽：西双紫薇组培苗炼苗，先在温度20～25℃之间的温室内拧松瓶盖放置3天，然后进行温床过渡移栽，过渡温床建在普通单体的塑料大棚内，移栽的过程中尽量减少伤根，先喷洒多菌灵溶液，然后对根进行用营养液进行喷雾处理，控制温度在25度，过渡移栽50天，上盆移栽；
其中，所述接种培养培养基的组分为：MS基本培养基+1.5mg/L2,4—D+0.3mg/LNAA+32g/L蔗糖+6.5g/L琼脂+3.2g/L碳粉，接种培养基的pH值为5.4～5.6。
继代培养基的组分为：MS基本培养基+0.5mg/L 2,4—D+0.4mg/L NAA+0.2mg/L6—BA+38g/L蔗糖+7.5g/L琼脂+3.6g/L碳粉+200g/L土豆，继代培养基的pH值为5.5～5.7。
生根培养基的组分为：1/3重量含量的MS基本培养基+0.8mg/L NAA+0.2mg/L IBA+0.25mg/L6—BA+0.3wt％活性炭+26g/L蔗糖，生根培养基的pH值为5.5～5.7。
营养液的组分为：0.1wt％NAA、0.2wt％多效唑、0.03wt％甘氨酸、0.3wt％维生素B及0.18wt％氯化胆碱，余量为水。
实施例2
一种西双紫薇的组织培养方法，包括以下步骤：
1)接种枝条的消毒灭菌：选取西双紫薇当年生嫩枝条，将嫩枝条用漂白粉浸泡10分钟后，流水冲洗30分钟，在超净工作台上以75％酒精浸泡3分钟，取出后用预先准备好的无菌水冲洗4遍，沥干水后，消毒后的嫩枝接种至诱芽培养基上；
2)接种培养：将选取的外植体切成1～2厘米的小段接种在配置好的接种培养基上，培养30天；
3)继代培养：把切下丛生芽接种继代培养基中进行培养，在温度23～27℃，光照强度2200lux，每日光照12小时，至32天，小芽基部形成愈伤组织，并形成丛生芽，丛生小芽达到1～2cm；
4)生根培养：当小苗长至2～3㎝时，转移到生根培养基上培养，温度控制在25～28℃，光照强度为1200lux，每日光照12小时经25天；
5)炼苗和移栽：西双紫薇组培苗炼苗，先在温度20～25℃之间的温室内拧松瓶盖放置4天，然后进行温床过渡移栽，过渡温床建在普通单体的塑料大棚内，移栽的过程中尽量减少伤根，先喷洒多菌灵溶液，然后对根进行用营养液进行喷雾处理，控制温度在30度，过渡移栽48天，上盆移栽；
其中，接种培养培养基的组分为：MS基本培养基+1.5mg/L 2,4—D+0.3mg/L NAA+38g/L蔗糖+7.5g/L琼脂+3.6g/L碳粉，接种培养基的pH值为5.4～5.6；
继代培养基的组分为：MS基本培养基+0.5mg/L 2,4—D+0.4mg/L NAA+0.2mg/L6—BA+32g/L蔗糖+6.5g/L琼脂+3.2g/L碳粉+150g/L土豆，继代培养基的pH值为5.5～5.7。
生根培养基的组分为：1/3重量含量的MS基本培养基+0.8mg/L NAA+0.2mg/L IBA+0.25mg/L6—BA+0.3wt％活性炭+28g/L蔗糖，生根培养基的pH值为5.5～5.7。
营养液的组分为：0.12wt％NAA、0.15wt％多效唑、0.05wt％甘氨酸、0.2wt％维生素B及0.26wt％氯化胆碱，余量为水。
实施例3
一种西双紫薇的组织培养方法，包括以下步骤：
1)接种枝条的消毒灭菌：选取西双紫薇当年生嫩枝条，将嫩枝条用漂白粉浸泡8分钟后，流水冲洗25分钟，在超净工作台上以75％酒精浸泡3分钟，取出后用预先准备好的无菌水冲洗5遍，沥干水后的嫩枝接种至诱芽培养基上；
2)接种培养：将选取的外植体切成1～2厘米的小段接种在配置好的接种培养基上，培养30天；
3)继代培养：把切下丛生芽接种继代培养基中进行培养，在温度23～27℃，光照强度2800lux，每日光照10小时，至28天，小芽基部形成愈伤组织，并形成丛生芽，丛生小芽达到1～2cm；
4)生根培养：当小苗长至2～3㎝时，转移到生根培养基上培养，温度控制在25～28℃，光照强度为1500lux，每日光照10小时经20天；
5)炼苗和移栽：西双紫薇组培苗炼苗，先在温度20～25℃之间的温室内拧松瓶盖放置4天，然后进行温床过渡移栽，过渡温床建在普通单体的塑料大棚内，移栽的过程中尽量减少伤根，先喷洒多菌灵溶液，然后对根进行用营养液进行喷雾处理，控制温度在20度，过渡移栽52天，上盆移栽；
其中，接种培养培养基的组分为：MS基本培养基+1.5mg/L 2,4—D+0.3mg/L NAA+36g/L蔗糖+7g/L琼脂+3.5g/L碳粉，pH值为5.4～5.6。
继代培养基的组分为：MS基本培养基+0.5mg/L 2,4—D+0.4mg/L NAA+0.2mg/L6—BA+36g/L蔗糖+7g/L琼脂+3.4g/L碳粉+180g/L土豆，pH值为5.5～5.7。
生根培养基的组分为：1/3重量含量的MS基本培养基+0.8mg/L NAA+0.2mg/LIBA+0.25mg/L6—BA+0.3wt％活性炭+25g/L蔗糖，pH值为5.5～5.7。
营养液的组分为：0.12wt％NAA、0.18wt％多效唑、0.06wt％甘氨酸、0.2wt％维生素B及0.36wt％氯化胆碱，余量为水。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种西双紫薇的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)接种枝条的消毒灭菌：选取西双紫薇当年生嫩枝条，进行消毒，消毒后的嫩枝接种至诱芽培养基上；
2)接种培养：将选取的外植体切成1～2厘米的小段接种在配置好的接种培养基上，培养25～30天；
3)继代培养：把切下丛生芽接种继代培养基中进行培养，在温度23～27℃，光照强度2200～2800lux，每日光照10～12小时，至28～32天，小芽基部形成愈伤组织，并形成丛生芽，丛生小芽达到1～2cm；
4)生根培养：当小苗长至2～3㎝时，转移到生根培养基上培养，温度控制在25～28℃，光照强度为1200～1500lux，每日光照10～12小时经20～25天；
5)炼苗和移栽：西双紫薇组培苗炼苗，先在温度20～25℃之间的温室内拧松瓶盖放置2～4天，然后进行温床过渡移栽，过渡温床建在普通单体的塑料大棚内，移栽的过程中尽量减少伤根，先喷洒多菌灵溶液，然后对根进行用营养液进行喷雾处理，控制温度在20～30度，过渡移栽48～52天，上盆移栽；
其中，所述接种培养培养基的组分为：MS基本培养基+1.5mg/L 2,4—D+0.3mg/L NAA+32～38g/L蔗糖+6.5～7.5g/L琼脂+3.2～3.6g/L碳粉；所述继代培养基的组分为：MS基本培养基+0.5mg/L 2,4—D+0.4mg/L NAA+0.2mg/L 6—BA+32～38g/L蔗糖+6.5～7.5g/L琼脂+3.2～3.6g/L碳粉+150～200g/L土豆。
2.根据权利要求1所述的西双紫薇的组织培养方法，其特征在于，所述生根培养基的组分为：1/3重量含量的MS基本培养基+0.8mg/LNAA+0.2mg/L IBA+0.25mg/L6—BA+0.3wt％活性炭+22～28g/L蔗糖。
3.根据权利要求2所述的西双紫薇的组织培养方法，其特征在于，所述接种培养基的pH值为5.4～5.6，所述继代培养基的pH值为5.5～5.7，所述生根培养基的pH值为5.5～5.7。
4.根据权利要求1所述的西双紫薇的组织培养方法，其特征在于，所述营养液的组分为：0.1～0.12wt％NAA、0.15～0.2wt％多效唑、0.03～0.06wt％甘氨酸、0.2～0.3wt％维生素B及0.18～0.36wt％氯化胆碱，余量为水。
5.根据权利要求1所述的西双紫薇的组织培养方法，其特征在于，所述步骤1)西双紫薇嫩枝条的消毒方法为：将嫩枝条用漂白粉浸泡5～10分钟后，流水冲洗20～30分钟，在超净工作台上以75％酒精浸泡2～3分钟，取出后用预先准备好的无菌水冲洗4～5遍，沥干水后即可。
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