CN105340744A - 一种百香果组织培养育苗的方法 - Google Patents

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    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

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Abstract

本发明公开了一种百香果组织培养育苗的方法，其包括：基本培养基的配制、外植体的消毒、丛生芽诱导培养、继代增殖培养、生根诱导培养以及移栽定植。本发明通过脱毒离体培养和快速繁殖工厂化育苗可提供生产成批的优质种苗，避免由于扦插繁殖引起病害的蔓延；另外，通过组织培养快速繁殖技术，可保持百香果杂种优势，避免由于种子繁殖引起杂种分离。

Description

一种百香果组织培养育苗的方法
技术领域
本发明属于植物的栽培方法，具体涉及一种百香果组织培养育苗的方法。
背景技术
百香果学名西番莲，又名鸡蛋果，原产南美洲，属百香果科热带、亚热带多年生常绿藤本植物，其果实为典型的热带、亚热带浆果。果汁香味独特，味道鲜美，富含各种营养成分，是理想的高级饮料，且根、茎、叶、花还可入药。近年来，国际市场对百香果果汁的需求以每年15％～20％的速度增长，大有供不应求之势。
百香果属蔓径性果树，适宜于温暖、全年无冻害天气的北纬24度以南的地区种植。百香果的繁殖方法主要有2种，一是用种子直接播种繁殖，二是用蔓条扦插繁殖。用种子直接播种繁殖易引起杂种分离，存在着品质偏酸、甜度不够、产量不高的问题；而不加选择地随意扦插繁殖，加快了品种的退化，病害增加，特别容易感染茎腐病，产量大大降低。
发明内容
本发明的目的是提供一种百香果组织培养育苗的方法，通过脱毒离体培养可快速繁殖育苗，成批生产优质种苗。
为了达到上述目的，本发明采取的技术方案是：
一种百香果组织培养育苗的方法，包括以下步骤：
(1)基本培养基的配制
在MS培养基中加入3％～5％的蔗糖和0.7％～0.9％的琼脂，用NaOH溶液调pH至5.8～6.0得到基本培养基，将基本培养基分装到200mL的培养瓶中，在120～122℃、0.1～0.15MPa压力下灭菌20min后备用；
(2)外植体的消毒
在健壮无病害的植株上剪取5～8cm小段外植体，在洗衣液中浸泡3～5min，再用自来水流水冲洗1h，在无菌条件下,用酒精洗涤30s,再使用0.1％的升汞溶液灭菌10～12min，用无菌水冲洗3～5次，备用；
(3)丛生芽诱导培养
将消毒后的外植体接种到基本培养基中，并在基本培养基中加入浓度为1.5～2.0mg/L的6-苄基嘌呤，每瓶基本培养基接种2～3个外植体，将接种好的培养瓶放在光照2000lx、温度25℃的培养室中培养；
(4)继代增殖培养
把初代培养形成的丛生芽从基部切下，转接入基本培养基中，附加1～1.5mg/L的6-苄基嘌呤和0.1～0.2mg/L的吲哚丁酸，进行增殖培养；
(5)生根诱导培养
待不定芽长至2～3cm高时，将其从基部切下，接种到基本培养基中，附加0.1～0.2mg/L的萘乙酸和0.1～0.2mg/L的吲哚丁酸，进行生根诱导；
(6)移栽定植
当植株根长至2～3cm时，进行驯化移栽，先将瓶口打开，锻炼2～3d，然后取出植株，洗净根部培养基，移栽于营养钵中，10～15d后可移栽到果园，按常规种植管理。
优选的，所述的NaOH溶液的浓度为1mol/L。
优选的，所述的酒精浓度为75％。
优选的，所述的外植体为百香果的茎段。
本发明的有益效果：
本发明通过脱毒离体培养和快速繁殖工厂化育苗可提供生产成批的优质种苗，避免由于扦插繁殖引起病害的蔓延；另外，通过组织培养快速繁殖技术，可保持百香果杂种优势，避免由于种子繁殖引起杂种分离。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步地说明。
实施例1：
(1)基本培养基的配制
称取9g琼脂、30g蔗糖，放入1000mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状；然后再将MS培养基加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1000mL，搅拌均匀，用1mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，调pH至5.8，得到基本培养基；将基本培养基分装到200mL的培养瓶中，在120℃、0.1MPa压力下灭菌20min，备用。
(2)外植体的消毒
在晴好天气的中午或下午在健壮无病害的植株上剪取5cm小段幼嫩的茎段，每个茎段含2个节，去掉基端节上的叶片，留上节的1片叶，在搅匀的洗衣液中浸泡3min，再用自来水流水冲洗1h，在无菌条件下,用75％的酒精洗涤30s,再使用0.1％的升汞溶液灭菌10min，用无菌水冲洗3次，备用。
(3)丛生芽诱导培养
将准备好的材料茎段接种到基本培养基中，并在基本培养基中加入浓度为1.5mg/L的6-苄基嘌呤，每瓶培养基接种2～3个茎段，将接种好的培养瓶放在光照2000lx、温度25℃的培养室中培养。
(4)继代增殖培养
将诱导获得的丛生芽从其基部切下，接种在基本培养基中，在基本培养基中加入1mg/L的6-苄基嘌呤和0.1mg/L的吲哚丁酸通过芽生芽途径进行增殖，接种后5～7d，基部膨大，15d长出一些细小的丛生芽，25d左右小芽长大，变成一簇丛生芽。
(5)生根诱导培养
待不定芽长至2cm高时，把丛生状的幼苗切割成单株小苗，接入基本培养基中，附加0.2mg/L的萘乙酸和0.1mg/L的吲哚丁酸，进行生根诱导。
(6)移栽定植
当植株根长至3cm时，将培养瓶从培养室移入温室，打开盖子，在自然光下锻练2～3d；经过锻练的幼苗用镊子取出，放入清水中洗去附着于根部的培养基，栽入带营养土的营养钵中；栽植好后，浇足定根水，放置于带有遮阳网的塑料大棚内，注意遮荫、保湿、通气；10～15d后就可长出新根与新叶，移栽到果园，按常规种植管理，移栽成活率可达95％以上。
实施例2：
(1)基本培养基的配制
称取7g琼脂、50g蔗糖，放入1000mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状；然后再将MS培养基加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1000mL，搅拌均匀，用1mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，调pH至6，得到基本培养基，将基本培养基分装到200mL的培养瓶中，在122℃、0.15MPa压力下灭菌20min，备用。
(2)外植体的消毒
在晴好天气的中午或下午在健壮无病害的植株上剪取8cm小段幼嫩的茎段，每个茎段含2个节，去掉基端节上的叶片，留上节的1片叶，在搅匀的洗衣液中浸泡5min，再用自来水流水冲洗1h，在无菌条件下,用75％的酒精洗涤30s,再使用0.1％的升汞溶液灭菌12min，用无菌水冲洗5次，备用。
(3)丛生芽诱导培养
将准备好的材料茎段接种到基本培养基中，并在基本培养基中加入浓度为2.0mg/L的6-苄基嘌呤，每瓶培养基接种2～3个茎段，将接种好的培养瓶放在光照2000lx、温度25℃的培养室中培养。
(4)继代增殖培养
将诱导获得的丛生芽从其基部切下，接种在基本培养基中，在基本培养基中加入1.5mg/L的6-苄基嘌呤和0.2mg/L的吲哚丁酸通过芽生芽途径进行增殖，接种后5～7d，基部膨大，15d长出一些细小的丛生芽，25d左右小芽长大，变成一簇丛生芽。
(5)生根诱导培养
待不定芽长至3cm高时，把丛生状的幼苗切割成单株小苗，接入基本培养基中，附加0.1mg/L的萘乙酸和0.2mg/L的吲哚丁酸，进行生根诱导。
(6)移栽定植
当植株根长至2cm时，将培养瓶从培养室移入温室，打开盖子，在自然光下锻练2～3d；经过锻练的幼苗用镊子取出，放入清水中洗去附着于根部的培养基，栽入带营养土的营养钵中；栽植好后，浇足定根水，放置于带有遮阳网的塑料大棚内，注意遮荫、保湿、通气；10～15d后就可长出新根与新叶，移栽到果园，按常规种植管理，移栽成活率可达95％以上。
以上所述，仅是本发明较佳实施例而已，并非对本发明的技术范围作任何限制，故凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何细微修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (4)

1.一种百香果组织培养育苗的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)基本培养基的配制
在MS培养基中加入3％～5％的蔗糖和0.7％～0.9％的琼脂，用NaOH溶液调pH至5.8～6.0得到基本培养基，将基本培养基分装到200mL的培养瓶中，在120～122℃、0.1～0.15MPa压力下灭菌20min后备用；
(2)外植体的消毒
在健壮无病害的植株上剪取5～8cm小段外植体，在洗衣液中浸泡3～5min，再用自来水流水冲洗1h，在无菌条件下,用酒精洗涤30s,再使用0.1％的升汞溶液灭菌10～12min，用无菌水冲洗3～5次，备用；
(3)丛生芽诱导培养
将消毒后的外植体接种到基本培养基中，并在基本培养基中加入浓度为1.5～2.0mg/L的6-苄基嘌呤，每瓶培养基接种2～3个外植体，将接种好的培养瓶放在光照2000lx、温度25℃的培养室中培养；
(4)继代增殖培养
把初代培养形成的丛生芽从基部切下，转接入基本培养基中，附加1～1.5mg/L的6-苄基嘌呤和0.1～0.2mg/L的吲哚丁酸，进行增殖培养；
(5)生根诱导培养
待不定芽长至2～3cm高时，将其从基部切下，接种到基本培养基中，附加0.1～0.2mg/L的萘乙酸和0.1～0.2mg/L的吲哚丁酸，进行生根诱导；
(6)移栽定植
当植株根长至2～3cm时，进行驯化移栽，先将瓶口打开，锻炼2～3d，然后取出植株，洗净根部培养基，移栽于营养钵中，10～15d后可移栽到果园，按常规种植管理。
2.根据权利要求1所述的百香果组织培养育苗的方法，其特征在于：在步骤(1)所述的基本培养基的配制中，所述的NaOH溶液的浓度为1mol/L。
3.根据权利要求1所述的百香果组织培养育苗的方法，其特征在于：在步骤(2)所述的外植体的消毒中，所述的酒精浓度为75％。
4.根据权利要求1所述的百香果组织培养育苗的方法，其特征在于：在步骤(2)所述的外植体的消毒中，所述的外植体为百香果的茎段。
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