CN103125396A

CN103125396A - 一种山药苗离体繁殖方法

Info

Publication number: CN103125396A
Application number: CN2013100859468A
Authority: CN
Inventors: 吴金平; 丁自立; 邓晓辉; 矫振彪; 陈磊夫; 郭凤领; 邱正明
Original assignee: Institute of Economic Crop of Hubei Academy of Agricultural Science
Current assignee: Crop Institute, Hunan Academy of Agricultural Sciences; Lichuan Huichuan Modern Agriculture Co., Ltd.
Priority date: 2013-03-18
Filing date: 2013-03-18
Publication date: 2013-06-05
Anticipated expiration: 2033-03-18
Also published as: CN103125396B

Abstract

本发明公开了一种山药苗离体繁殖方法，其步骤：A、取山药幼嫩带腋芽茎段为外植体，酒精、升汞表面消毒后无菌水冲洗；B、用灭菌的手术刀将茎段在无菌纸上切成带节茎段，按极性方向竖插于诱导培养基中；C、光照恒温培养，长出丛芽；D、将丛芽切割成数个小丛芽，转入诱导培养基中进行继代增殖培养；E、继代培养过程中的健壮小苗转生根培养基中，待长出根时开瓶炼苗，清洗后移栽到基质中，保温保湿，组培苗成活后移栽。获得的山药苗遗传稳定性好，繁殖占用空间小，繁殖速度快，一年一个芽可繁殖十万棵以上山药苗。有效解决山药种植中的优质山药种苗供应问题。所建立的生产体系稳定、周期较短，能满足规模化快繁生产。

Description

一种山药苗离体繁殖方法

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，更具体涉及一种山药苗的快速繁殖方法，是利用基本培养基和附加不同成份对利川山药苗的快速繁殖方法。

背景技术

湖北利川山药，在利川市有1500多年的种植历史，它富含硒、锗等稀有微量元素，性平味甘、无副作用，是医疗上一种常用中药，也是人们喜食的一种上乘滋补蔬菜和天然保健品。2007年，利川山药成为国家质检总局地理标志保护产品；2008年，利川山药产地被国家绿色食品中心认定为“全国绿色食品原料标准化生产基地”；2009年，利川山药获国家绿色食品认证；同年，在农业部信息中心举办的首届中国农产品区域公用品牌建设论坛上，“利川山药”的品牌价值为2.32亿元；2010年，“龙船水乡”牌利川山药获国家有机转换食品认证；同年，“龙船水乡”牌利川山药被选定为上海世博会专供产品，在国际有机食品博览会成功签约160万美元。利川山药作为高产高效经济作物被广泛种植。

利川山药一般采用无性繁殖技术，此技术虽然简单易行，但大都是以根茎作为种源，这在一定程度上减少了产量，且长期营养繁殖，致使其品质退化，农药残留严重，产量降低。为保证该物种遗传物质的稳定性，只有通过植物组织培养技术，采用植物营养体进行快速繁殖，才可保持原品种全部的遗传性，实现该品种种质的一致性。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种山药苗离体繁殖方法，方法易行，操作方便，繁殖速度快，可加快利川或其它地方山药快速繁殖。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：

一种山药苗离体繁殖方法，其步骤是：

A、取利川山药刚长出的10～15cm左右地上茎为外植体，剪成2～4cm左右带茎节的节段，先用洗衣粉水摇晃浸泡4～6min，再用自来水冲洗干净，在超净工作台上用75%（体积比）的酒精溶液浸泡10～30s，无菌水冲洗，再用0.1%（重量比）升汞溶液消毒3～7min，无菌水冲3～5次；

B、无菌纸吸干外植体表面水分。用灭菌的手术刀将茎切成0.9～1.1cm的带节茎段。按极性方向竖插于配制好的培养基中。诱导培养基的有效成份为：MS+KT1.5～2.5mg/L+NAA0.1～0.2mg/L+琼脂4000～6000mg/L+白糖20000～30000mg/L+PVP100～200mg/L；

C、光照培养，温度为25～28℃，光强1500～3000Lx，每天光照10～16h，培养30～60d，长出丛芽；

D、然后将丛芽切割成数个小丛芽转入B步骤中的诱导培养基中进行芽的继代增殖培养，以后每隔25～35d继代1次。继代培养过程中将已有3～4片展开叶，苗高4～5cm的健壮小苗转生根培养基中，使其形成完整植株。生根培养基的有效成份为：1/2MS+BA0.1～0.3mg/L+NAA0.4～0.6mg/L+琼脂4000～6000mg/L+白糖30000～60000mg/L+活性炭0.1%～0.3%；

E、山药试管苗接种于生根培养基中30～40d，待叶片4～5片，长2条以上根时即开瓶炼苗5～7d，将瓶内苗轻轻取出，用0.003%～0.005%（重量比）NAA溶液浸苗根基部10～15min，将组培苗移栽到基质（草炭∶珍珠岩∶蛭石=2∶1∶1)）中，浇足定根水，盖上小拱棚膜保温保湿，前期温度保持在15～25℃，湿度80～90%以上，7～15d后逐步揭膜降低温度，增加光照强度，每隔2～3周浇施0.1%～0.3%（重量比）尿素和0.1%～0.3%（重量比）KH₂PO₄或稀薄粪水，保证棚内生长期肥水管理条件相一致，注意进行病虫害防治，组培苗成活率达95%以上，将成活苗移栽。

所述的MS培养基的成份(单位：mg/L)：

硝酸氨 1650

硝酸钾 1900

七水硫酸镁 370

磷酸二氢钾 170

二水氯化钙 440

乙二胺四乙酸二钠 37.3

碘化钾 0.83

硼酸 6.2

四水硫酸锰 22.3

七水硫酸锌 8.6

二水钼酸钠 0.25

五水硫酸铜 0.025

六水氯化钴 0.025

七水硫酸亚铁 27.8

肌醇 100

烟酸 0.5

甘氨酸 2

盐酸硫胺素 0.1

盐酸吡哆醇 0.5。

本发明与常规种植技术相比，具有以下优点和效果：

山药离体繁殖体系的建立，为利川山药的大规模种植提供一种遗传稳定性好、繁殖占用空间小、周期短、繁殖率高、成本低廉的育苗方法。可以有效解决利川山药种植中的优质山药种苗供应问题。所建立的生产体系稳定，周期较短，能满足山药苗规模化生产。该方法培养基中用白糖代替蔗糖、用自来水代替蒸馏水，使成本有效降低，试管苗的茎段又可以作为组培外植体进行下一轮的扩繁，繁殖速度快，不受季节限制，30～50d的增殖倍数达到4～6倍，一年一个芽可繁殖十万棵以上山药苗。以一个芽40d继代一次，每次的繁殖倍数为5计算。

天数（d）	30	70	110	150	190	230	270	310	350
										苗数(棵)	1	5	25	125	625	3125	15625	78125	390625

具体实施方式

实施例1：

一种山药苗离体繁殖方法，其步骤是：

1.取利川山药刚长出的10cm或12cm或15cm地上茎为外植体，剪成2cm或3cm或4cm的带茎节的节段，先用洗衣粉水摇晃浸泡4min或5min或6min，再用自来水冲洗干净，在超净工作台上用75%（体积比）的酒精溶液表面浸泡约10s或15s或20s或25s或30s，无菌水冲洗，再用0.1%（重量比）升汞溶液消毒3min或5min或7min，无菌水冲3次或4次或5次；

2.无菌纸吸干外植体表面水分。用灭菌的手术刀将茎切成0.9cm或1.0cm或1.1cm的带节茎段。按极性方向竖插于配制好的培养基中。诱导培养基的有效成份为：MS+KT2.0mg/L+NAA0.2mg/L+琼脂5000mg/L+白糖30000mg/L+PVP150mg/L；

3.光照培养，温度为25℃或26℃或27℃或28℃，光强1500～3000Lx，每天光照10～16h，培养30d或40d或50d或60d，长出丛芽；

4.然后将丛芽切割成数个小丛芽转入上述诱导培养基中进行芽的继代增殖培养，以后每隔25d或30d或35d继代1次。继代培养过程中将已有3～4片展开叶，苗高4～5cm的健壮小苗转生根培养基中，使其形成完整植株。生根培养基的有效成份为：1/2MS+BA0.2mg/L+NAA0.5mg/L+琼脂4000mg/L+白糖30000mg/L+活性炭0.2%；

5.山药试管苗接种于生根培养基中30d或35d或40d，待叶片4～5片，长2条以上根时即开瓶炼苗5d或6d或7d，将瓶内苗轻轻取出，用0.004%NAA溶液浸苗根基部12min，将组培苗移栽到基质（草炭∶珍珠岩∶蛭石=2∶1∶1)）中，浇足定根水，盖上小拱棚膜保温保湿，前期温度保持在15℃或17℃或19℃或21℃或23℃或25℃，湿度80%或85%或90%以上，7d或9d或11d或13d或15d后逐步揭膜降低温度，增加光照强度，每隔2～3周浇施0.2%尿素和0.1%KH₂PO₄或稀薄粪水，保证棚内生长期肥水管理条件相一致，注意进行病虫害防治，组培苗成活率达95%以上，将成活苗移栽。

Claims

1.一种山药苗离体繁殖方法，其步骤是：

A、取利川山药刚长出的10~15 cm地上茎为外植体，剪成2~4 cm带茎节的节段，先用洗衣粉水摇晃浸泡4~6 min，再用自来水冲洗，在超净工作台上用75 %体积比的酒精溶液浸泡10~30 s，无菌水冲洗，再用0.1%重量比升汞溶液消毒3~7 min，无菌水冲3~5次；

B、无菌纸吸干外植体表面水分，用灭菌的手术刀将茎切成0.9~1.1cm的带节茎段，按极性方向竖插于配制好的培养基中，诱导培养基的有效成份为：MS+KT 1.5~2.5 mg/L+NAA 0.1~0.2 mg/L+琼脂4000~ 6000 mg/L+白糖 20000~30000 mg/L+PVP 100~200 mg/L；

C、光照培养，温度为25~28 ℃，光强1500~3000 Lx，每天光照10~16 h，培养30~60 d，长出丛芽；

D、将丛芽切割成数个小丛芽转入B步骤中的诱导培养基中进行芽的继代增殖培养，以后每隔25~35 d 继代1 次，继代培养过程中将已有3~4 片展开叶，苗高4~5 cm 的小苗转生根培养基中，生根培养基的有效成份为：1/2MS+BA 0.1~0.3 mg/L+NAA 0.4~0.6 mg/L+琼脂4000~6000 mg/L+白糖 30000~60000 mg/L+活性炭0.1 %~0.3 %；

E、山药试管苗接种于生根培养基中30~40 d，待叶片4~5片，长2条以上根时开瓶炼苗5~7 d，将瓶内苗取出，用0.003 %~0.005 % 重量比NAA溶液浸苗根基部10~15 min，将组培苗移栽到基质∶草炭∶珍珠岩∶蛭石=2∶1∶1中，浇足定根水，盖上小拱棚膜保温保湿，前期温度保持在15~25 ℃，湿度80~90 %，7~15 d后揭膜降低温度，增加光照强度，每隔2~3周浇施 0.1 %~0.3 %重量比尿素和0.1 %~0.3 %重量比KH₂PO₄或稀薄粪水，注意进行病虫害防治，组培苗成活率达95 %，将成活苗移栽。