CN104115753A

CN104115753A - 一种组织培养繁殖紫山药种苗的方法

Info

Publication number: CN104115753A
Application number: CN201410389906.7A
Authority: CN
Inventors: 王碧琴; 余发新; 刘腾云; 肖亮
Original assignee: INSTITUTE OF BIOLOGICAL RESOURCES JIANGXI ACADEMY OF SCIENCES
Current assignee: INSTITUTE OF BIOLOGICAL RESOURCES JIANGXI ACADEMY OF SCIENCES
Priority date: 2014-08-11
Filing date: 2014-08-11
Publication date: 2014-10-29

Abstract

一种组织培养繁殖紫山药种苗的方法，该方法以紫山药嫩茎尖1.0cm为外植体，在对外植体用75％酒精和0.1％氯化汞溶液进行消毒灭菌后，接种于初始培养基MS0，待茎尖成活后，取再生芽茎尖（0.5-1.0mm）处理，根据不同时期需要采用不同的培养基配方分别进行茎尖诱导培养、茎尖继代增殖培养和生根培养获得紫山药瓶苗；待苗高2cm左右时再将瓶苗移栽营养钵基质炼苗，培育50－60天苗生长10cm即为紫山药种苗。所述茎尖诱导增殖培养基为MS+6BA0.5mg·L^-1NAA0.1mg·L^-1，生根培养基为1/2MS＋NAA0.2mg·L^-1＋Ac0.2g·L^-1；以上所述培养基含45g·L^-1食用糖，琼脂6g·L^-1，pH5.7。本发明催芽方式简便，萌芽速度快；本发明脱毒方试简捷，脱毒率高；品种优纯；本发明方法可实现紫山药组培苗工厂化生产和品种改良的推广。

Description

一种组织培养繁殖紫山药种苗的方法

技术领域

本发明涉及一种组织培养繁殖紫山药种苗的方法，属植物无性繁殖技术领域。

背景技术

紫山药(Purple yam)别名薯蓣或脚板薯，长芋。为薯蓣科（Dioscoreaceae）薯蓣属(Dioscorea)的一个地方品种，为多年生蔓性植物，块根呈块状或圆柱状表皮和肉质呈紫红色而得名。紫山药因肥大的块根肉质细腻滑爽,口感极佳,富含粘性蛋白,紫色花青素,维生素和胆碱等，并富含薯蓣皂(天然的DHEA)，内含各种荷尔蒙基本物质,常吃有促进内分泌荷尔蒙的合成作用等多种独特的食疗价值也称"紫人参"，据本草纲目药书的记载，经常食用紫山药,不仅可以增加人体的抵抗力，降低血压、血糖、抗衰益寿等功效,，而且还有固肾、润肺益精、软化血管等药用滋补功能。故又被称做"蔬菜之王"之美誉。

紫山药是无性繁殖的植物。由于长期的块茎繁殖，导致种性退化，品质下降，产量降低。随着农药化肥的大量施用，病毒病不但得不到控制，而且更加严重至蔓延，危及到整个产业以致某些优良品种濒临灭绝。在山药生长初期,病毒病症状并不明显。在生长的中后期,症状逐渐明显,发病初期叶上出现明显的褪绿斑,随后绿色花斑逐渐隆起,叶片斑驳花叶、凸凹卷曲畸形、黄化或坏死,感病叶片明显小于健壮叶片,严重时整株矮化,生长缓慢,地下块茎明显小于健壮的植株,并且畸形,产量下降。不但满足不了市场的供求,还严重影响和制约了地方产业的发展和种植极积性。据资料表明并且证实了病毒病是造成山药产量下降，品质退化的重要因素。由于病毒在寄主植物体内随维管系统转移，而在细胞与细胞之间，病毒可通过胞间连丝扩散转移，因此，一旦感染植物病毒往往蔓延全株，对寄主植物可造成灭性危害。导致大幅度减产，甚至全株死亡，病毒侵入植物体内，改变了细胞的代谢途径，使正常的生理机能受到于扰和破坏，造成种性退化，抗性降低，生长受阻或出现变色、坏死、畸形，产量降低，品种变劣，甚至完全丧失商品价值。

为保证该物种遗传物质的稳定性，只有通过植物组织培养技术，采用植物营养体进行快速繁殖，才可保持原品种全部的遗传性，实现该品种种质的一致性。据资料显示通过人工脱毒无性繁殖的惠楼山药要比一般山药增产30%以上。因此选育良种，改良品质，增加产量已是当前生产上必需亟待解决的主要问题。

目前尚无有效的药物可防治愈病毒病的发生或蔓延，而采用现代生物技术选取优良无病株种苗进行离体脱毒培养，繁殖无毒或少毒苗，以组培苗更替传统的营养繁殖才能从根本上解决病毒病的问题。

发明内容

本发明的目的是，根据紫山药块茎繁殖存在的问题，本发明公开一种地方紫色山药（薯）的茎尖组织培养快繁种苗的方法。

本发明的技术方案是，本发明方法以紫山药嫩茎尖（1cm）为外植体，在对外植体用75％酒精和0.1％氯化汞溶液进行消毒灭菌后，接种于初始培养基MS0，待茎尖成活后，取再生芽茎尖（0.5－1.0mm）接种，根据不同时期需要采用不同的培养基配方分别进行茎尖诱导培养、茎尖继代增殖培养和生根培养获得紫山药瓶苗。其中茎尖诱导增殖培养基MS+6BA0.5mg·L^-1 NAA0.1 mg·L^-1 ，生根培养基：1/2MS ＋NAA0.2mg·L^-1 ＋Ac0.2g·L^-1；以上培养基含45g·L^-1食用糖，琼脂6g·L^-1，PH5.7。待苗高2cm左右时再将瓶苗移栽营养钵基质炼苗，培育50－60天苗生长10cm即为紫山药种苗。

本发明方法中的营养钵基质炼苗；基质为黄土和珍珠岩，或泥碳和珍珠岩；黄土与珍珠岩石的体积比为2：3；泥碳与珍珠岩的体积比为3：2；炼苗50－60天，苗高10cm以上即为紫山药种苗。

本发明的有益效果是，本发明催芽方式简便，萌芽速度快；本发明脱毒方试简捷，脱毒率高；品种优纯，接种有效率、诱导率高，芽苗生长快，遗传性稳定等特点；以嫩茎尖接种在初始培养基，再切取再生芽茎尖0.5-1mm接种诱导分化培养基。该方法具有脱毒效果。本发明改进了组织培养程序，每20天为培养物继代周期，增殖和壮苗交替继代培养，培养基附加外源物质后呈多芽体量增株壮，减少褐化富集。本发明方法省略诱导生根环节一步成苗，15天生根可用于移栽。所述培养方式的改进可以减少培养基褐化深度，延长培养物生长周期。本发明方法可实现紫山药组培苗工厂化生产，有利新品种及品种改良的推广。

具体实施方式

本发明的具体实施方式如下：

（1）块茎的催芽：选择个大无病虫，表面根毛少，肉紫色的块茎经表面消毒后，在室（棚）藏于砂盆催芽，待嫩芽伸长到后进行外植体取材。

（2）培养基的制备：包括培养基的配制（初始培养基、诱导分化培养基、壮苗生根培养基等）、分装、消毒。

（3）外植体消毒和接种：剪取茎尖1cm，去掉展开的叶片用洗液清洗。在无菌操作台上用70％酒精消毒，后用0.1％Hgcl浸泡消毒清洗后，将茎尖接种于初始培养基。

（4）茎尖培养：初始茎尖培养成活后，再切取再生芽茎尖0.5－1mm接种诱导分化、增殖培养当扩繁系数达到一定数时，进行生根培养。

（6）生根培养：增殖苗与壮苗交替继代培养后，苗高2－5cm左右健壮可生根培养或直接移栽。

（7）瓶苗移栽：完整小苗出瓶后移栽到配制好的基质：黄土+珍珠岩石＝2：3或泥碳+珍珠岩＝3：2，在营养钵上练苗50－60 天，苗高10cm以上即为紫山药种苗。

Claims

1.一种组织培养繁殖紫山药种苗的方法，其特征在于，所述方法以紫山药嫩顶芽为外植体，在对外植体用75％酒精和0.1％氯化汞溶液进行消毒灭菌后，接种于初始培养基MS0，待茎尖成活后，取再生芽茎尖接种，根据不同时期需要采用不同的培养基配方分别进行茎尖诱导培养、茎尖继代增殖培养和生根培养获得紫山药瓶苗；待苗高2cm左右时再将瓶苗移栽营养钵基质炼苗，培育50－60天苗生长10cm以上即为紫山药种苗。

2.根据权利要求1所述的一种组织培养繁殖紫山药种苗的方法，其特征在于，所述茎尖诱导增殖培养基为MS+6BA0.5mg·L^-1 NAA0.1 mg·L^-1 ，生根培养基为1/2MS ＋NAA0.2mg·L^-1 ＋Ac0.2g·L^-1；以上所述培养基含45g·L^-1食用糖，琼脂6g·L^-1，PH5.7。

3.根据权利要求1所述的一种组织培养繁殖紫山药种苗的方法，其特征在于，所述营养钵基质炼苗，基质为黄土和珍珠岩，或泥碳和珍珠岩；黄土与珍珠岩石的体积比为2：3；泥碳与珍珠岩的体积比为3：2；炼苗50－60天，苗高10cm以上即为紫山药种苗。

4.根据权利要求1所述的一种组织培养繁殖紫山药种苗的方法，其特征在于，所述紫山药初始培养嫩顶芽长度为1cm；所述再生芽茎尖培养0.5—1.0mm。