CN109105257B - 一种烤烟组培快繁育苗的方法 - Google Patents

一种烤烟组培快繁育苗的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109105257B
CN109105257B CN201810902894.1A CN201810902894A CN109105257B CN 109105257 B CN109105257 B CN 109105257B CN 201810902894 A CN201810902894 A CN 201810902894A CN 109105257 B CN109105257 B CN 109105257B
Authority
CN
China
Prior art keywords
seedlings
tobacco
medium
tissue culture
rooting
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810902894.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109105257A (zh
Inventor
邓世媛
陈建军
王维
许冬梅
李淮源
常娟娟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
South China Agricultural University
Original Assignee
South China Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by South China Agricultural University filed Critical South China Agricultural University
Priority to CN201810902894.1A priority Critical patent/CN109105257B/zh
Publication of CN109105257A publication Critical patent/CN109105257A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109105257B publication Critical patent/CN109105257B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开一种烤烟组培快繁育苗的方法，涉及烟草生产技术领域。该方法包括愈伤组织的诱导、芽的分化继代、生根壮苗等步骤。本发明系统的进行了烤烟组培快繁育苗研究工作，组培苗从组培室到假植的过程中需要3～5天的炼苗时间，且假植时间应适当提早，较为适合的假植叶龄为3～4叶龄，假植45天左右可以起到培育壮苗的作用。组培苗大田生长期花叶病发病率比常规苗降低了80.04％、虫害发生率减少52.73％、中上等烟比例增加12.58％、烟叶产量增加了8.36％、产值增加17.41％，烤烟组培快繁育苗技术增加了烟农收入、繁荣了农村经济，体现了良好的社会效益。

Description

一种烤烟组培快繁育苗的方法
技术领域
本发明涉及烟草生产技术领域，尤其涉及一种烤烟组培快繁育苗的方法。
背景技术
组织培养是一种植物快速繁殖的手段，同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径，其优越性主要在于：遗传特性一致、周期短、繁殖速度快、效率高，可生产大量无病毒或去病毒植株，可连续运行、周年试验生产，节省土地和空间。
烟草是我国重要的经济作物。目前，我国烟草生产上普遍采用的是有性繁殖方式，但繁殖的烟苗不均衡，易发生变异，而且容易感染病菌，造成生长发育中经常发生病害、品质退化，既降低了烟叶的可用性，也影响烟农的经济收入。同时，当前烟草生产存在品种单一、后备品种匮乏、良种种性退化、新品种更新缓慢等问题，而从国外引进优良烟草品种是一条简单易行、迅速见效的途径，不仅可以直接应用于生产，而且可以充实育种的遗传资源供育种科研使用。但是国外引种存在的一个严重问题是，引进的烤烟品种多为不育系，不利于育种研究利用及优良种质资源的保存。而通过组织培养技术结合高温脱毒处理，不仅可以保持烟草优良品种的优良性状，减少病虫害的发生，提高烟叶质量，还可以进行优良种质资源的保存。但将快繁技术用于烤烟育苗生产的工艺、培养基配方尚未发现，这在实际应用中又是非常需要的。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种烤烟组培快繁育苗的方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种烤烟组培快繁育苗的方法，主要包括以下步骤：
(1)愈伤组织的诱导
取叶龄为2～4(优选为3)的烟草无菌苗，将其叶子切成(0.4～0.6)cm*(0.4～0.6)cm(优选为0.5cm*0.5cm)大小，接种于诱导培养基中，于(26±1)℃、黑暗条件培养至有愈伤出现，移至(26±1)℃、16h/d光照条件下培养，获得愈伤组织；
(2)芽的分化继代
在芽分化时，取步骤(1)获得的愈伤组织在继代增殖培养基中再进行芽的继代增殖，获得不定芽；
(3)生根壮苗
待不定芽长至2～3cm高时切下接种于生根壮苗培养基A中，于(26±1)℃，16h/d光照条件下培养；然后炼苗后假植42～48天(优选45天)，获得壮苗。
为了更好的实现本发明的目的，还包括：
(4)组培苗从组培室到假植的过程中需要3～5天的炼苗时间，且假植时间应适当提早，较为适合的假植叶龄为3～4叶龄，假植45天左右可以起到培育壮苗的作用。
优选的，步骤(1)中所述的烟草无菌苗的获取过程如下：
将烟草品种K326种子用纱布包紧，在流动水中冲洗10～15分钟后，在超净工作台上，将种子在浓度75％乙醇溶液中浸泡30s，无菌水冲洗3次；然后在浓度0.1％HgCl溶液中消毒5～7min；无菌水冲洗5次；在培养基上播种及发芽培养、继代培养、生根壮苗培养成所需的无菌苗；
其中，播种及发芽培养所用的培养基为1/2MS培养基；
继代培养所用的继代培养基为：MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.05g/L肌醇+30g/L蔗糖+0.5mg/L萘乙酸(NAA)+1.0mg/L6-苄氨基嘌呤(6-BA)；
生根壮苗培养所用的生根壮苗培养基B为：1/2MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.2mg/L萘乙酸(NAA)+0.05g/L肌醇+30g/L蔗糖+0.5g/L活性炭(AC)。
优选的，步骤(1)中所述的诱导培养基为：MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.05～1.0g/L肌醇+20～30g/L蔗糖+(0.2±0.05)mg/L萘乙酸(NAA)+(2.0±0.1)mg/L激动素(KT)。
更优选的，步骤(1)中所述的诱导培养基为：MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.05g/L肌醇+30g/L蔗糖+0.2mg/L萘乙酸(NAA)+2.0mg/L激动素(KT)。
优选的，步骤(2)中所述的继代增殖培养基为：MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.05～1.0g/L肌醇+20～30g/L蔗糖+(0.5±0.1)mg/L萘乙酸(NAA)+(1.0±0.1)mg/L6-苄氨基嘌呤(6-BA)。
更优选的，步骤(2)中所述的继代增殖培养基为：MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.05g/L肌醇+30g/L蔗糖+0.5mg/L萘乙酸(NAA)+1.0mg/L6-苄氨基嘌呤(6-BA)。
优选的，步骤(3)中所述的生根壮苗培养基A为：1/2MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.05～1.0g/L肌醇+20～30g/L蔗糖+0.5～1.0g/L活性炭(AC)+(0.2±0.05)mg/L萘乙酸(NAA)。
更优选的，步骤(3)中所述的生根壮苗培养基A为：1/2MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.05g/L肌醇+30g/L蔗糖+0.5g/L活性炭(AC)+0.2mg/L萘乙酸(NAA)。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
本发明系统的进行了烤烟组培快繁育苗研究工作，组培苗从组培室到假植的过程中需要3～5天的炼苗时间，且假植时间应适当提早，较为适合的假植叶龄为3～4叶龄，假植45天左右可以起到培育壮苗的作用。组培苗大田生长期花叶病发病率比常规苗降低了80.04％、虫害发生率减少52.73％、中上等烟比例增加12.58％、烟叶产量增加了8.36％、产值增加17.41％，烤烟组培快繁育苗技术增加了烟农收入、繁荣了农村经济，体现了良好的社会效益。
附图说明
图1是不同处理各芽点的形态特征。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1烟苗获取
将烟草品种K326种子(广东烟草清远市有限公司提供)用纱布包紧，在流动水中冲洗10～15分钟然后在超净工作台上，将种子在浓度75％乙醇溶液中浸泡30s，无菌水冲洗3次；然后在浓度0.1％HgCl溶液中消毒5～7min；无菌水冲洗5次；播种于1/2MS培养基。(26±1)℃，16h/d光照条件下进行发芽培养。然后进行继代培养，在继代培养基：MS+0.5mg/L萘乙酸(NAA)+1.0mg/L6-苄氨基嘌呤(6-BA)+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.05g/L肌醇+30g/L的蔗糖上进行芽的分化；再在生根壮苗培养基B：1/2MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.2mg/LNAA+0.05g/L肌醇+30g/L的蔗糖+0.5g/L活性炭(AC)上生根壮苗培养成所需的无菌苗。
实施例2愈伤组织的诱导
取叶龄为3左右的无菌苗，将其叶子切成0.5cm*0.5cm大小，播种于如下表1的16种培养基中每个处理接8瓶三个重复，每瓶内接种5片，于(26±1)℃、黑暗条件培养至有愈伤出现，移至(26±1)℃、16h/d光照条件下培养。每五天观察记录一次，对愈伤组织形态、生长速度、诱导率情况进行了研究，具体结果如表1所示。
表1不同激素浓度配比对愈伤组织生长状况及诱导率的影响
Figure BDA0001759881440000041
从表1的数据中可以看出，在本发明的培养条件下，诱导愈伤组织产生的培养基选用配方为MS+卡拉粉7.5～8.0g/L+肌醇0.05g/L+蔗糖30g/L+0.2mg/L萘乙酸(NAA)+2.0mg/L激动素(KT)，烤烟组培快繁育苗愈伤组织诱导速度最快，愈伤形态显示为绿色长芽且可以长苗生根，诱导率高。
实施例3芽的分化继代
在芽分化时取在愈伤诱导时最好效果的4个配方再进行芽的继代增殖，每个处理接8瓶三个重复，每瓶内接种4个切割均匀的芽。
芽分化继代配方采用了在愈伤诱导时表现较好的几个配方，不同浓度的激素配比对于芽的分化结果如下：
由表2和图1可知，在所试的各组配方中，A3芽的增值率达到了100％，污染率低，分化继代效果良好，A3的芽点形态最好，芽点比较簇拥，并且都为绿色，可以长根、长苗。
表2不同激素浓度配比对芽分化增值率和芽点颜色及形态的影响
Figure BDA0001759881440000051
实施例4生根壮苗
待不定芽长至2～3cm高时切下接种于如下的7种培养基中每个处理接8瓶三个重复，每瓶内接种4棵于(26±1)℃，16h/d光照条件下培养。对不同激素浓度配比下生根情况进行了研究，具体结果如表3所示。
表3不同激素浓度配比对对生根数及根形态的影响
Figure BDA0001759881440000052
由表3结果可以看出，G下的培养基配方加了浓度比较低的生长素NAA以及6-BA或者是KT，生根数多，当所加的激素浓度比较大时，如B、C，就会限制根系的生长，不能形成有利于假植的组培苗。在成苗时期，根数多、茎较粗、叶片大且呈绿色对成活率有重要影响，特别是根的多少及其粗细。粗根在移栽时不易折断，可以有效地提高成活率，茎小的会造成假植时徒长、叶子也会相对偏小。在G培养基下，根系比较多且粗长，植株比较矮壮，不易徒长，叶片较大且呈绿色，是生根壮苗中最好的培养基。
表4K326组培苗与常规苗烤烟大田病虫害发生率及经济性状的比较
Figure BDA0001759881440000061
注：表中同列数值后不同字母表示在0.05水平上达到显著差异。
表4显示，在整个大田生育期内，品种K326表现出较好的抗性，K326组培苗的虫害发生率比常规苗低52.73％。在产量方面，K326组培苗比常规苗每公顷增收8.36％，产值上，K326每公顷增收1.05万元，从上等烟比例来看，组培苗的比率显著提高，组培苗收购均价显著高于当地烟叶收购价约10.44％。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种烤烟组培快繁育苗的方法，其特征在于主要包括以下步骤：
(1)愈伤组织的诱导
取叶龄为2～4的烟草无菌苗，将其叶子切成(0.4～0.6)cm*(0.4～0.6)cm大小，接种于诱导培养基中，于(26±1)℃、黑暗条件培养至有愈伤出现，移至(26±1)℃、16h/d光照条件下培养，获得愈伤组织；
所述的烟草无菌苗的获取过程如下：
将烟草品种K326种子用纱布包紧，在流动水中冲洗10～15分钟后，在超净工作台上，将种子在浓度75％乙醇溶液中浸泡30s，无菌水冲洗3次；然后在浓度0.1％HgCl2 溶液中消毒5～7min；无菌水冲洗5次；在培养基上播种及发芽培养、继代培养、生根壮苗培养成所需的无菌苗；
播种及发芽培养所用的培养基为1/2MS培养基；
继代培养所用的继代培养基为：MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.05g/L肌醇+30g/L蔗糖+0.5mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA；
生根壮苗培养所用的生根壮苗培养基B为：1/2MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.2mg/L NAA+0.05g/L肌醇+30g/L蔗糖+0.5g/L AC；
(2)芽的分化继代
在芽分化时，取步骤(1)获得的愈伤组织在继代增殖培养基中再进行芽的继代增殖，获得不定芽；
(3)生根壮苗
待不定芽长至2～3cm高时切下接种于生根壮苗培养基A中，于(26±1)℃，16h/d光照条件下培养；然后炼苗后假植42～48天，获得壮苗；
步骤(1)中所述的诱导培养基为：MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.05g/L肌醇+30g/L蔗糖+0.2mg/L NAA+2.0mg/L KT；
步骤(2)中所述的继代增殖培养基为：MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.05g/L肌醇+30g/L蔗糖+0.5mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA；
步骤(3)中所述的生根壮苗培养基A为：1/2MS+7.5～8.0g/L卡拉粉+0.05g/L肌醇+30g/L蔗糖+0.5g/L AC+0.2mg/L NAA。
CN201810902894.1A 2018-08-09 2018-08-09 一种烤烟组培快繁育苗的方法 Active CN109105257B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810902894.1A CN109105257B (zh) 2018-08-09 2018-08-09 一种烤烟组培快繁育苗的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810902894.1A CN109105257B (zh) 2018-08-09 2018-08-09 一种烤烟组培快繁育苗的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109105257A CN109105257A (zh) 2019-01-01
CN109105257B true CN109105257B (zh) 2021-03-26

Family

ID=64853133

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810902894.1A Active CN109105257B (zh) 2018-08-09 2018-08-09 一种烤烟组培快繁育苗的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109105257B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114514879A (zh) * 2021-12-13 2022-05-20 金华市农业科学研究院(浙江省农业机械研究院) 一种本氏烟草的快速繁殖及无糖生根培养方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103168687B (zh) * 2013-03-22 2014-06-04 云南省烟草农业科学研究院 一种诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法
CN108142290A (zh) * 2017-12-13 2018-06-12 云南中烟工业有限责任公司 一种用硫代硫酸钠防止烟草外植体褐化的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN109105257A (zh) 2019-01-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106613997B (zh) 一种牡丹离体再生组培方法
CN105918126B (zh) 掌叶覆盆子脱毒种苗的离体快繁方法
CN102499088A (zh) 一种利用广西金线莲蒴果快速繁育其种苗的方法
CN105265316B (zh) 一种葱属植物鳞茎盘快速繁殖方法
CN112470929B (zh) 大花红景天根颈顶端组织获得再生植株的方法
CN103548691B (zh) 茶树组培苗生根培养的方法
CN115606503B (zh) 一种紫菀的组织培养方法
CN109258469B (zh) 一种中国辣椒带柄子叶诱导再生植株的方法
CN101904302B (zh) 一种药用植物北五味子体细胞胚发生和植株再生方法
CN109105257B (zh) 一种烤烟组培快繁育苗的方法
CN115885855B (zh) 一种以紫魁茶树下胚轴为外植体建立再生体系的方法
CN117223604B (zh) 一种防风组织培养快繁的方法
CN115918542B (zh) 一种以紫魁茶树带腋芽茎段为外植体快速建立繁殖体系的方法
CN111480573A (zh) 樱桃李组培快繁方法
CN110402818A (zh) 一种优种板栗成熟胚组织培养快繁育苗的方法
CN113711914B (zh) 一种以子叶节为外植体的柠条锦鸡儿离体再生方法
CN112106663B (zh) 一种杨梅实生无性系的建立方法
CN116806705A (zh) 一种油莎豆组织培养再生体系的方法
CN115380819A (zh) 一种君迁子带芽茎段获得再生植株的方法
CN107173225A (zh) 用甘薯叶柄进行愈伤组织诱导和分化的方法
CN113575422A (zh) 菠萝叶片高效离体再生方法
CN112931226A (zh) 一种东方桤木组培快繁方法
CN114793659B (zh) 一种成龄栗属植物良种快繁方法
CN117502246B (zh) 一种荷花快繁体系的构建方法
CN120615724B (zh) 一种通过胚愈伤组织诱导获得布顿大麦草再生植株的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant