CN104322375A - 一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104322375A CN104322375A CN201410674752.6A CN201410674752A CN104322375A CN 104322375 A CN104322375 A CN 104322375A CN 201410674752 A CN201410674752 A CN 201410674752A CN 104322375 A CN104322375 A CN 104322375A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dendrobium chrysotoxum
- chrysotoxum lindl
- dendrobium
- root
- lindl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法，将鼓槌石斛的种子播种于诱导培养基中诱导发芽，然后将鼓槌石斛小芽转先后移至继代培养基、生根培养基中继续培养，得到鼓槌石斛生根组培苗，即可移栽至大棚中进行炼苗。本发明的组织培养方法简便，步骤简单，操作方便，所得鼓槌石斛生根组培苗植株健壮，生长能力强，适于工厂化生产。
Description
技术领域
本发明涉及植物快速繁殖方法，特别是一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法。
背景技术
鼓槌石斛(Dendrobium chrysotoxumLind1.)为兰科多年生附生草本。假鳞茎直立、肉质，纺锤形或鼓槌状，具2-5节和多数圆钝的条棱，干后金黄色；叶顶生，革质，2-5枚，长圆形，长10-19cm，宽2-4cm，先端急尖而钩转。总状花序由近顶端叶腋抽出，长达20cm，疏生花5-8朵，花金黄色，具清香；唇瓣近肾状圆形，基部两侧多少具红色条纹，中央具深红色晕斑，边缘波状，密被短绒毛，花期3-5月。鼓槌石斛原产我国云南南部至西南部，生于海拔500-1600m，阳光充足的常绿阔叶林中树干上或疏林下岩石上。国外分布于印度东北部、缅甸、泰国、老挝和越南。
鼓槌石斛又名金弓石斛，以鲜茎或干茎入药，是我国民间习用药用石斛种类之一。具有生津益胃、清热养阴等药效。又因观赏性佳，花期长，是著名的观花植物。由于兰科植物种子在野外很难发芽，自然繁殖主要是靠分株繁殖，繁殖率低下，自然更新困难，随着社会的发展，人民对美的追求以及长期以来药用的需求，造成野生资源的严重破坏，现野外已经很少能见到美丽的鼓槌石斛。本发明采用现代生物技术，克隆鼓槌石斛，规模化生产种苗，解决鼓槌石斛人工种植的种苗问题，为社会的发展以及鼓槌野生植物资源的保护做出贡献。
发明内容
本发明的目的是提供一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法，直接取鼓槌石斛的种子进行组织培养，有效缩短鼓槌石斛的培养周期，减小因多次继代培养造成的变异概率，采用组织培养所得的鼓槌石斛组培苗，植株健壮，生长能力强，适于工厂化生产，以解决鼓槌石斛人工种植的种苗问题。
本发明提供的技术方案是：
一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一、将预处理的鼓槌石斛种子播种于诱导培养基中，在温度为23-30℃，光照强度为2000-2500lux，光照照时间为13-15h/d的条件下培养7-15天，得到鼓槌石斛小芽；
步骤二、将鼓槌石斛小芽置于继代培养基中，培养30-60天，其中培养温度为25-32℃，在光照强度为2000-2600lux照射13-15h/d，培养30-60天，获得鼓槌石斛组培分化苗；
步骤三、将鼓槌石斛组培分化苗移栽至生根培养基中，培养30-50天，然后移到自然光下培养45-60天，得到鼓槌石斛生根组培苗；
步骤四、将鼓槌石斛生根组培苗移栽至苗床上，培养30-40天，鼓槌石斛生根组培苗生长稳定后即可移栽至大棚中。
优选的是，所述的鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法中，步骤一中所述鼓槌石斛种子的预处理是将鼓槌种子置于75-80％的乙醇溶液中浸泡25-40秒，然后取质量分数为0.1％升汞溶液消毒10-30分钟，并置于无菌水下反复清洗。
优选的是，所述的鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法中，步骤一中所述的诱导培养基为：以MS-H为基本培养基，然后加入0.5-3mg/L萘乙酸、1.0-3.0mg/L吲哚乙酸、0.2-2.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及3-5g/L琼脂，并调整诱导培养基pH值为5.5-6。
优选的是，所述的鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法中，步骤二所述的继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.5-2mg/L玉米素、1-3mg/L6-苄氨基嘌呤、0.5-2mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丁酸、0.2-1.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及4-5g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值5.7-6。其中，MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。基于此，这种培养基就用他们的名字来命名了。
优选的是，所述的鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法中，步骤三中所述生根培养基为：1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉、0.1-2.0g/L吲哚丙酸、0.2-3.0mg/L萘乙酸、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.6-6。
优选的是，所述的鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法中，步骤三中所述鼓槌石斛组培分化苗移栽至生根培养基中的培养条件为：温度25-32℃、光照强度2500-3000lux，光照时间为13-15h/d。
优选的是，所述的鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法中，步骤四所述苗床含有基质，所述基质由以下重量份的组分组成：20-30树皮、10-20杂木、20-30蛭石及10-15珍珠岩。
优选的是，所述的鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法中，步骤四中所述将鼓槌石斛生根组培苗移栽至苗床前，先将鼓槌石斛生根苗根部的培养基冲洗干净，晾干水汽后再移栽至苗床上。
本发明的有益效果是：本发明中鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法，种子诱导的发芽率达96％，经过继代培养后的成苗率95％，转移至生根培养基中，鼓槌石斛的生根率为90％，最后移入大棚炼苗的成活率为94％，大大提高了鼓槌石斛的组织培养效率。
嫩芽和种子都可以作为组培的原始材料，石斛嫩芽是从外面的植株上取的部分材料，由于一株石斛只有一个芽，用茎段也只能获得几个芽，每个芽采下来以后消毒灭菌，最后获得的无菌材料大概只有40％左右，然后利用无菌材料才能继续增殖、诱导原球茎、扩繁，要经过非常长的时间，一般需要经过10-20代才能获得足够多的材料，然而组培过程中继代代数越长，成本升高，玻璃化变异加大，因此此时的材料已经没有很大的价值，随着继代的增加，材料退化也是很严重的问题。本发明中使用鼓槌石斛的种子进行培养，种子发芽到最后出苗所需时间远远短于嫩芽继代，几乎是嫩芽的零头，这在很大程度上节约了资金，节约了能源，提高了竞争力，利用种子所需仅200多天可以出苗，而利用嫩芽做到出苗所需的时间将是1000多天，因此从市场角度考虑也远远优于嫩芽诱导苗。相对嫩芽而言组织培养而言，本发明的利用鼓槌石斛的种子作为组培材料成本低，推广容易，经济性好，技术先进，并且具有很高的市场价值，让利种植，有利于扩大推广，对石斛资源的保护提供了新的思路。
具体实施方式
下面结合对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤一、在鼓槌石斛种子发黄未开裂之前，取鼓槌石斛的硕果在流水下清洗干净，然后利用75-80％的乙醇溶液浸泡25-45秒，接着0.1％的升汞溶液消毒10-30分钟，并置于无菌水下反复清洗，得到预处理的鼓槌石斛种子；将预处理的鼓槌石斛种子播种于诱导培养基中，其中所述诱导培养基为：以MS-H为基本培养基，然后加入0.5-3mg/L萘乙酸、1.0-3.0mg/L吲哚乙酸、0.2-2.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及3-5g/L琼脂，并调整诱导培养基pH值为5.5-6；在温度为23-30℃，光照强度为2000-2500lux，光照时间为10-15h/d的条件下培养7-15天，得到鼓槌石斛小芽；培养基中萘乙酸为广谱型植物生长调节剂，能有效促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根，增加座果；吲哚乙酸作为植物生长素，有利于促进植物生长，噻苯隆是一种新型高效的细胞分裂素，能很好的促进鼓槌石斛的芽组织分化，蔗糖为能源物质，为植物组织培养提供碳源和能源，还能很好的维持培养基内的低渗环境，同时在一定程度上还能减少微生物的污染，提高鼓槌石斛的无菌环境质量；采用的诱导培养基大大提高了鼓槌石斛的愈伤组织分化能力，使得鼓槌石斛小芽的出芽率高达92-98％；
步骤二、将鼓槌石斛小芽置于继代培养基中，所述继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.5-2mg/L玉米素、1-3mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.5-2mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丁酸、0.2-1.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及4-5g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值5.7-6；培养30-60天，其中培养温度为25-32℃，在光照强度为2000-2600lux照射10-15h/d，培养30-60天，获得2-5cm左右高度整齐的鼓槌石斛组培分化苗；其中，培养基中玉米素为天然的细胞分裂素，能有效促进愈伤组织发芽，促进鼓槌石斛小芽生长，6-苄氨基嘌呤有效加快植物细胞生长，促进植物生长发育，诱导鼓槌石斛小芽的分化，促进侧芽萌发生长，几种培养基原料组分发挥协同作用，提高鼓槌石斛小芽的生长速率，所得鼓槌石斛组培分化苗的成苗率为92-95％；
步骤三、将鼓槌石斛组培分化苗移栽至生根培养基中，所述生根培养基为：1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉、0.1-2.0g/L吲哚丙酸、0.2-3.0mg/L萘乙酸、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.6-6；在温度25-32℃，光照强度2500-3000lux，光照时间为13-15h/d条件下培养30-50天，然后移到自然光下照射培养45-60天，得到具有3-4条根系的鼓槌石斛生根组培苗；其中，生根培养基中，在MS培养基中加入打碎的香蕉，促进鼓槌石斛组培分化苗快速生根，为鼓槌石斛组培分化苗提供所需营养物质，吲哚丙酸为植物生长刺激素，促进组培分化苗快速生根，活性炭的加入有助于吸附一些有害的代谢物质，同时活性炭的加入使得生根培养基变黑，可模仿黑暗条件，有利于组培分化苗的生根；鼓槌石斛组培分化苗生根后放在自然光下照射，为组培分化苗提供与户外环境相似的培养环境，提高了鼓槌石斛组培分化苗在后期炼苗过程中的成活率。
步骤四、将鼓槌石斛生根组培苗根部的培养基用清洗干净，晾干水汽，再将鼓槌石斛生根组培苗移栽至苗床上，其中苗床上设置的基质为：20-30树皮、10-20杂木、20-30蛭石及10-15珍珠岩，培养30-40天，鼓槌石斛生根组培苗生长稳定后即可移栽至大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，控制遮阴度为75％，间隔浇水，温度为28℃，超过28℃要水帘降温，防止根腐病发生。
实施例1
步骤一、鼓槌石斛无菌材料获得方法：在鼓槌石斛种子发黄未开裂之前，取硕果，在流水下清洗干净，利用75％乙醇浸泡30秒，升汞消毒15分钟，无菌水清洗5遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于诱导培养基中，其中诱导培养基为：以MS-H为基本培养基，然后加入0.2mg/L萘乙酸、吲哚乙酸2.0mg/L、噻苯隆0.5mg/L、35g/L蔗糖及5g/L琼脂，并调整诱导培养基pH值为5.8，在培养温度为28℃，光照强度为2000lux，光照时间为13h/d的条件下培养15天后可见鼓槌石斛小芽发出，获得鼓槌石斛小芽，种子发芽率为96％。
步骤二、将大量的鼓槌石斛小芽置于继代培养基中，所述继代培养基为：以MS为基本培养基，加入1.5mg/L玉米素、2mg/L 6-苄氨基嘌呤、1.5mg/L萘乙酸、2.5mg/L吲哚丁酸、0.5mg/L噻苯隆、25g/L蔗糖及4g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值5.9；培养温度为27℃，培养时间为13h/d，光照强度为2600lux，45天左右可获得2cm左右高度的整齐的鼓槌石斛组培分化苗。分化苗的继代培养成苗率95％。
步骤三、将鼓槌石斛组培分化苗移栽到生根培养基，其中生根培养基为：1/2MS为基本培养基，加入15％香蕉、0.8g/L吲哚丙酸、3.0mg/L萘乙酸、3％蔗糖及0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.9，在温度25℃，光照强度2600lux，光照时间为13-15h/d条件下培养40天后，把鼓槌石斛组培分化苗移到自然光下照射培养，约60天后可得到具有3-4条根的鼓槌石斛生根组培苗。鼓槌石斛生根率为90％。
步骤四、将鼓槌石斛生根组培苗的完整植株，打开盖子，清洗掉组培苗根部的培养基，晾干水汽，移栽到带基质的苗床上，其中苗床上设置的基质为：20g树皮、10g杂木、25g蛭石及10g珍珠岩，待2个月后鼓槌石斛小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，控制遮阴度为75％，间隔浇水，温度为28℃，超过28℃要水帘降温，防止根腐病发生。炼苗成活率为94％。
实施例2
步骤一、在鼓槌石斛种子发黄未开裂之前，取硕果，在流水下清洗干净，利用80％乙醇浸泡40秒，升汞消毒20分钟，无菌水清洗6遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于诱导培养基中，培养温度为30℃，光照强度为2300lux，光照时间为14h/d，培养15天后可见鼓槌石斛发出小芽，即可获得鼓槌石斛小芽；其中诱导培养基为：以MS-H为基本培养基，然后加入2.0mg/L萘乙酸、2.0mg/L吲哚乙酸、1.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及3-5g/L琼脂，并调整诱导培养基pH值为5.9。种子发芽率为97％。
步骤二、将鼓槌石斛小芽置于继代培养基中，所述继代培养基以MS为基本培养基，加入1.5mg/L玉米素、2mg/L 6-苄氨基嘌呤、1.5mg/L萘乙酸、2.0mg/L吲哚丁酸、0.5mg/L噻苯隆、30g/L蔗糖及4.5g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值5.9，培养温度为30℃，培养时间为14h/d，光照强度为2300lux，42天左右可获得2cm左右高度的整齐的鼓槌石斛组培分化苗。分化苗的继代培养成苗率92％。
步骤三、鼓槌石斛组培分化苗移栽到生根培养基，培养温度为28℃，，光照强度2500lux，光照时间为14h/d的条件下培养40天后，把鼓槌石斛组培分化苗移到自然光下培养，约60天后可得到具有3-4条根的鼓槌石斛生根组培苗。其中生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入10％香蕉、1.0g/L吲哚丙酸、1.5mg/L萘乙酸、5％蔗糖及0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.9。鼓槌石斛生根率为92％。
步骤四、将鼓槌石斛生根组培苗的完整植株，打开盖子，清洗掉组培苗根部的培养基，晾干水汽，移栽到带基质的苗床上，其中苗床上设置的基质为：25g树皮、10g杂木、20g蛭石及15g珍珠岩，待2个月后鼓槌石斛小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，控制遮阴度为75％，间隔浇水，温度为28℃，超过28℃要水帘降温，防止根腐病发生。炼苗成活率为99％。
实施例3
步骤一、在鼓槌石斛种子发黄未开裂之前，取硕果，在流水下清洗干净，利用80％乙醇浸泡40秒，升汞消毒20分钟，无菌水清洗6遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于诱导培养基中，培养温度为30℃，光照强度为2500lux，光照时间为14h/d，培养15天后可见鼓槌石斛发出小芽，即可获得鼓槌石斛小芽；其中诱导培养基为：以MS-H为基本培养基，然后加入1.5mg/L萘乙酸、1.0mg/L吲哚乙酸、1.5mg/L噻苯隆、35g/L蔗糖及3-5g/L琼脂，并调整诱导培养基pH值为5.5-6。种子发芽率为98％。
步骤二、将鼓槌石斛小芽置于继代培养基中，所述继代培养基以MS为基本培养基，加入2mg/L玉米素、1.5mg/L 6-苄氨基嘌呤、1.5mg/L萘乙酸、2.0mg/L吲哚丁酸、1.5mg/L噻苯隆35g/L蔗糖及4g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值6.0，培养温度为30℃，培养时间为14h/d，光照强度为2600lux，42天左右可获得2cm左右高度的整齐的鼓槌石斛组培分化苗。分化苗的继代培养成苗率95％。
步骤三、鼓槌石斛组培分化苗移栽到生根培养基，培养温度为28℃，光照强度2500lux，光照时间为14h/d的条件下培养40天后，把鼓槌石斛组培分化苗移到自然光下培养，约60天后可得到具有3-4条根的鼓槌石斛生根组培苗。其中生根培养基为：1/2MS为基本培养基，加入15％香蕉、2.0g/L吲哚丙酸、1.5mg/L萘乙酸，3％蔗糖及0.3％活性炭，并调整生根培养基的pH值为6.0。鼓槌石斛生根率为92％。
步骤四、将鼓槌石斛生根组培苗的完整植株，打开盖子，清洗掉组培苗根部的培养基，晾干水汽，移栽到带基质的苗床上，其中苗床上设置的基质为：30g树皮、15g杂木、25g蛭石及12g珍珠岩，待2个月后鼓槌石斛小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，控制遮阴度为75％，间隔浇水，温度为28℃，超过28℃要水帘降温，防止根腐病发生。炼苗成活率为98％。
试验比较
(1)组1为本发明所述鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法，采用鼓槌石斛种子作为组培材料；培养基分别为：
诱导培养基以MS-H为基本培养基，加入0.5-3mg/L萘乙酸、1.0-3.0mg/L吲哚乙酸、0.2-2.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及3-5g/L琼脂；
继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.5-2mg/L玉米素、1-3mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.5-2mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丁酸、0.2-1.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及4-5g/L琼脂；
生根培养基为：1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉、0.1-2.0g/L吲哚丙酸、0.2-3.0mg/L萘乙酸、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭。
(2)组2为采用鼓槌石斛嫩芽作为组培材料，采用的培养基与组1相同；
(3)组3为采用鼓槌石斛种子作为组培材料，采用的培养基分别为：
诱导培养基以MS-H为基本培养基，加入0.5-3mg/L萘乙酸、1.0-3.0mg/L吲哚乙酸、25-35g/L蔗糖及3-5g/L琼脂；
继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.5-2mg/L玉米素、1-3mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.5-2mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丁酸、25-35g/L蔗糖及4-5g/L琼脂；
生根培养基为：1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉、0.1-2.0g/L吲哚丙酸、0.2-3.0mg/L萘乙酸、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭。
(4)组4为采用鼓槌石斛种子作为组培材料，采用的培养基分别为：
诱导培养基以MS-H为基本培养基，加入0.5-3mg/L萘乙酸、0.2-2.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及3-5g/L琼脂；
继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.5-2mg/L玉米素、1-3mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.5-2mg/L萘乙酸、0.2-1.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及4-5g/L琼脂；
生根培养基为：1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉、0.2-3.0mg/L萘乙酸、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭。
(5)组5为采用鼓槌石斛种子作为组培材料，采用的培养基相较于组1分别为：
诱导培养基以MS-H为基本培养基，加入1.0-3.0mg/L吲哚乙酸、0.2-2.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及3-5g/L琼脂；
继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.5-2mg/L玉米素、1-3mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.5-3.0mg/L吲哚丁酸、0.2-1.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及4-5g/L琼脂；
生根培养基为：1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉、0.1-2.0g/L吲哚丙酸、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭。
(6)组6为采用鼓槌石斛种子作为组培材料，采用的培养基分别为：
诱导培养基以MS-H为基本培养基，加入0.5-3mg/L萘乙酸、1.0-3.0mg/L吲哚乙酸、0.2-2.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及3-5g/L琼脂，并调整诱导培养基pH值为5.5-6；
继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.5-2mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丁酸、0.2-1.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及4-5g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值5.7-6；
生根培养基为：1/2MS为基本培养基，加入0.1-2.0g/L吲哚丙酸、0.2-3.0mg/L萘乙酸、2-5％蔗糖，并调整生根培养基的pH值为5.6-6。
(7)组7为采用鼓槌石斛种子作为组培材料，采用的培养基分别为：
诱导培养基以MS-H为基本培养基，加入25-35g/L蔗糖及3-5g/L琼脂；
继代培养基为：以MS为基本培养基25-35g/L蔗糖及4-5g/L琼脂；
生根培养基为：1/2MS为基本培养基，加入2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭。
得到结果如表1所示：
表1
从表1中可以看出，组1与组2比较，，组1的每一个阶段的培育效果均优于组2，采用鼓槌石斛的种子作为组培材料，所需要的周期远远小于采用鼓槌石斛嫩芽作为组培材料需要的周期时间，组1的培养周期相对于组2，缩短了2年的培育时间，有效保证了提供优质的鼓槌石斛幼苗的同时也满足了市场生产需求；
组1与组3、组4、组5、组6比较，组1的培养基产生的效果最好，培养基中缺少某一种原料组分，则会影响某一个阶段的培育效果。组3、组4、组5、组6均分别缺少了某一些原料组分，达到的培育效果很差，组1是按照一定的原则筛选出来的对石斛具有很好诱导，能在保持原植物的优良特性情况下，不变异情况下，增值率高，生长快的优良培养基。
本发明所述尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (8)
1.一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤一、将预处理的鼓槌石斛种子播种于诱导培养基中，在温度为23-30℃，光照强度为2000-2500lux，光照时间为13-15h/d的条件下培养7-15天，得到鼓槌石斛小芽；
步骤二、将鼓槌石斛小芽置于继代培养基中，培养30-60天，其中培养温度为25-32℃，在光照强度为2000-2600lux照射13-15h/d，培养30-60天，获得鼓槌石斛组培分化苗；
步骤三、将鼓槌石斛组培分化苗移栽至生根培养基中，培养30-50天，然后移到自然光下培养45-60天，得到鼓槌石斛生根组培苗；
步骤四、将鼓槌石斛生根组培苗移栽至苗床上，培养30-40天，鼓槌石斛生根组培苗生长稳定后即可移栽至大棚中。
2.如权利要求1所述的鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤一中鼓槌石斛种子的预处理是将鼓槌种子置于75-80％的乙醇溶液中浸泡25-40秒，然后取质量分数为0.1％升汞溶液消毒10-30分钟，并置于无菌水下反复清洗。
3.如权利要求1所述的鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤一中所述的诱导培养基为：以MS-H为基本培养基，然后加入0.5-3mg/L萘乙酸、1.0-3.0mg/L吲哚乙酸、0.2-2.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及3-5g/L琼脂，并调整诱导培养基pH值为5.5-6。
4.如权利要求1所述的鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤二所述的继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.5-2mg/L玉米素、1-3mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.5-2mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丁酸、0.2-1.0mg/L噻苯隆、25-35g/L蔗糖及4-5g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值5.7-6。
5.如权利要求1所述的鼓槌石斛组织培养方法，其特征在于，步骤三中所述生根培养基为：1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉、0.1-2.0g/L吲哚丙酸、0.2-3.0mg/L萘乙酸、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.6-6。
6.如权利要求1所述的鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤三中所述鼓槌石斛组培分化苗移栽至生根培养基中的培养条件为：温度25-32℃、光照强度2500-3000lux，光照时间为13-15h/d。
7.如权利要求1所述的鼓槌石斛组织培养方法，其特征在于，步骤四所述苗床含有基质，所述基质由以下重量份的组分组成：20-30树皮、10-20杂木、20-30蛭石及10-15珍珠岩。
8.如权利要求1所述的鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤四中所述将鼓槌石斛生根组培苗移栽至苗床前，先将鼓槌石斛生根苗根部的培养基冲洗干净，晾干水汽后再移栽至苗床上。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410674752.6A CN104322375B (zh) | 2014-11-21 | 2014-11-21 | 一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410674752.6A CN104322375B (zh) | 2014-11-21 | 2014-11-21 | 一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104322375A true CN104322375A (zh) | 2015-02-04 |
| CN104322375B CN104322375B (zh) | 2017-07-28 |
Family
ID=52397305
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410674752.6A Active CN104322375B (zh) | 2014-11-21 | 2014-11-21 | 一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104322375B (zh) |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106718875A (zh) * | 2016-11-16 | 2017-05-31 | 深圳市华盛实业股份有限公司 | 石斛育苗方法 |
| CN107466862A (zh) * | 2017-09-30 | 2017-12-15 | 福建省农业科学院作物研究所 | 一种快速繁殖鼓槌石斛组培苗的方法 |
| CN108064691A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-05-25 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种红牙刷石斛组培扩繁育苗的方法 |
| CN108157119A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-15 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种鼓槌石斛培养基质及制备方法 |
| CN108157175A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-15 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种串珠石斛组织培养扩繁的方法 |
| CN108157176A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-15 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种玫瑰石斛组织培养扩繁的方法 |
| CN108207625A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-29 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种肿节石斛的组织培养方法 |
| CN108243953A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-07-06 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种扭瓣石斛组织培养扩繁的方法 |
| CN108260527A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-07-10 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种黄喉石斛的组织培养育苗方法 |
| CN108308022A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-07-24 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种报春石斛的组织培养育苗方法 |
| CN108307985A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-07-24 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种鼓槌石斛培养基质与制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101213940A (zh) * | 2008-01-18 | 2008-07-09 | 中国科学院昆明植物研究所 | 石斛属的快速繁殖方法 |
| CN103392593A (zh) * | 2013-06-20 | 2013-11-20 | 武汉久源生物医药科技有限公司 | 一种霍山石斛种苗的快速组培繁殖方法 |
-
2014
- 2014-11-21 CN CN201410674752.6A patent/CN104322375B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101213940A (zh) * | 2008-01-18 | 2008-07-09 | 中国科学院昆明植物研究所 | 石斛属的快速繁殖方法 |
| CN103392593A (zh) * | 2013-06-20 | 2013-11-20 | 武汉久源生物医药科技有限公司 | 一种霍山石斛种苗的快速组培繁殖方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 蓝玉甜等: "鼓槌石斛种子萌发培养与小苗组培快繁技术研究", 《安徽农业科学》, vol. 39, no. 9, 31 December 2011 (2011-12-31), pages 5380 - 5382 * |
| 陈文等: "鼓槌石斛未成熟种子无菌萌发与小苗组培快繁的研究", 《贵州科学》, vol. 26, no. 1, 31 March 2008 (2008-03-31), pages 45 - 51 * |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106718875A (zh) * | 2016-11-16 | 2017-05-31 | 深圳市华盛实业股份有限公司 | 石斛育苗方法 |
| CN106718875B (zh) * | 2016-11-16 | 2018-11-06 | 深圳市华盛实业股份有限公司 | 石斛育苗方法 |
| CN107466862A (zh) * | 2017-09-30 | 2017-12-15 | 福建省农业科学院作物研究所 | 一种快速繁殖鼓槌石斛组培苗的方法 |
| CN107466862B (zh) * | 2017-09-30 | 2019-07-05 | 福建省农业科学院作物研究所 | 一种快速繁殖鼓槌石斛组培苗的方法 |
| CN108207625A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-29 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种肿节石斛的组织培养方法 |
| CN108157176A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-15 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种玫瑰石斛组织培养扩繁的方法 |
| CN108157175A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-15 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种串珠石斛组织培养扩繁的方法 |
| CN108243953A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-07-06 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种扭瓣石斛组织培养扩繁的方法 |
| CN108260527A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-07-10 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种黄喉石斛的组织培养育苗方法 |
| CN108308022A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-07-24 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种报春石斛的组织培养育苗方法 |
| CN108307985A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-07-24 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种鼓槌石斛培养基质与制备方法 |
| CN108157119A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-15 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种鼓槌石斛培养基质及制备方法 |
| CN108064691A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-05-25 | 康美药业（文山）药材种植管理有限公司 | 一种红牙刷石斛组培扩繁育苗的方法 |
| CN108308022B (zh) * | 2017-12-27 | 2021-04-16 | 康美药业(昆明)种质资源有限公司 | 一种报春石斛的组织培养育苗方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104322375B (zh) | 2017-07-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104322375B (zh) | 一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法 | |
| KR101587707B1 (ko) | 난 유묘의 생산방법 | |
| CN103190347B (zh) | 一种茶壶枣组织培养方法 | |
| CN105815213A (zh) | 一种猕猴桃离体再生体系的建立方法 | |
| CN103688855B (zh) | 一种小叶红豆离体胚培养及植株再生方法 | |
| CN103988777B (zh) | 一种小叶矮生型广玉兰的嫩茎段离体培养方法 | |
| CN104255524A (zh) | 一种微扦插快速生产杉木苗的方法 | |
| CN104137779A (zh) | 一种白木乌桕茎段快速诱导再生植株的方法 | |
| CN101810144B (zh) | 瓜叶菊的快速繁殖方法 | |
| CN102907325B (zh) | 利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的方法 | |
| CN103155869A (zh) | 甜樱桃砧木Colt组织培养方法 | |
| CN105875410B (zh) | 一种墨兰与虎头兰的杂交兰种苗的快速繁殖方法 | |
| CN100391333C (zh) | 安祖花无菌苗组织培养和试管苗炼苗移栽方法 | |
| CN104335898B (zh) | 一种红星茵芋离体快速繁殖的方法 | |
| CN103444529B (zh) | 一种鄂西红豆树植株再生及大量繁殖方法 | |
| CN106605596B (zh) | 一种通过体胚发生大量繁殖忽地笑的方法 | |
| CN105379621A (zh) | 一种大岛樱成年优良单株“小乔”樱的高效离体植株再生方法 | |
| CN103688861A (zh) | 一种东方百合组培苗壮苗的方法 | |
| CN107155882A (zh) | 一种药用白芨无菌播种快速育苗方法 | |
| CN102405832B (zh) | 小桐子快速繁殖方法 | |
| CN105519434A (zh) | 一种日本枫橙之梦的组培苗微嫁接方法 | |
| Qin et al. | Propagation of Cleome spinosa Jacq. through tissue culture | |
| CN104521759B (zh) | 一种通脱木组织培养快速繁殖方法 | |
| CN103444534A (zh) | 鸟巢蕨诱导绿色小球高频率植株再生方法 | |
| CN112514796B (zh) | 垂枝型流苏树新品种‘雪丽’的组培快繁方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200410 Address after: 226500 No. 99, Group 8, Wunicun, Changjiang Town, Rugao City, Nantong City, Jiangsu Province Patentee after: JIANGSU BEIHUAN BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 13 No. 530213 the Guangxi Zhuang Autonomous Region Nanning Qingxiu District five Avenue Patentee before: Guangxi University of Chinese Medicine |
|
| TR01 | Transfer of patent right |